植物乳杆菌N3117发酵乳...的糖尿病大鼠肠道菌群的影响_张博玮.pdf

2023年第51卷第4期（总第389期）植物乳杆菌 N3117 发酵乳对二甲双胍治疗的糖尿病大鼠肠道菌群的影响张博玮1，李晴1，赵宝华1，张栋2，边艳青1（1.河北师范大学生命科学学院，石家庄 050024；2.石家庄君乐宝乳业有限公司，石家庄 050221）摘要：探究了以植物乳杆菌 N3117 为活菌成分的益生菌发酵乳对二甲双胍治疗的糖尿病大鼠肠道菌群的影响。利用高脂饮食联合链脲佐菌素诱导 2 型糖尿病大鼠模型。将造模成功的大鼠随机分为糖尿病组（DM）、二甲双胍治疗组（Met）以及发酵乳和二甲双胍联合干预组（MLf）；正常饮食的大鼠为对照组（Con）。每周记录大鼠体重及血糖水平。收集大鼠粪便，采用 16S rRNA 高通量测序对大鼠肠道菌群进行分析。与 DM 组大鼠相比，Met 组空腹和餐后血糖显著降低（P0.05），但仍显著高于 Con 组（P0.05）；与 Con 组相比，DM 和 Met 组肠道菌群 shannon 指数和 simpson 指数均显著下降（P0.05），而且厚壁菌门与拟杆菌门的比值显著降低（P0.05）；但与DM 组相比，Met 组寡源杆菌、棒状杆菌等肠道有害菌的丰度增加。与 DM 组相比，MLf 组血糖水平显著降低（P0.05），simpson 指数显著升高（P0.05），厚壁菌门与拟杆菌门的比值显著升高（P0.05），乳酸杆菌、毛螺菌等有益菌的丰度增加，肠道菌群向 Con 组的组成靠近。结果表明联合干预能够在发挥降糖作用的同时，在一定程度上调节大鼠肠道菌群结构，缓解因糖尿病及二甲双胍治疗而导致的肠道菌群失调。关键词：2 型糖尿病；植物乳杆菌；发酵乳；肠道菌群中图分类号：Q93-337文献标识码：A文章编号：1001-2230(2023)04-0004-07doi:10.19827/j.issn1001-2230.2023.04.001Effect of Lactobacillus Plantarum N3117 fermented milk on intestinal flora ofdiabetes rats treated with metforminZHANG Bowei1,LI Qing1,ZHAO Baohua1,ZHANG Dong2,BIAN Yanqing1(1.College of Life Sciences,Hebei Normal University,Shijiazhuang 050024,China;2.Shijiazhuang Junlebao Dairy Co.Ltd.,Shijiazhuang 050221,China)Abstract：To investigate the effects of probiotic fermented milk with Lactobacillus plantarum N3117 as living bacteria on intestinal microflora of diabetic rats treated with metformin were investigated.High-fat diet combined with streptozotocin was used to induce type 2 diabetes in rats.The ratswere randomly divided into diabetic rats group(DM),metformin treatment group(Met),and combined fermented milk and metformin intervention group(MLf);rats with normal diet were the control group(Con).The body weight and blood glucose levels of rats were recorded weekly.Feces of rats were collected and the intestinal flora of rats was analyzed by 16S rRNA high-throughput sequencing.Compared with DM group,fasting and postprandial blood glucose in Met group was significantly decreased(P0.05),but it was still significantly higher than that in Con group(P0.05).The analysis of intestinal flora showed that compared with the Con group,the shannon index and simpson index of DM and Met groupsmarkedly decreased(P0.05).And the ratio of Firmicutes to Bacteroidetes decreased significantly between the DM and Met groups too(P0.05).But compared with DM group,the abundance of intestinal harmful bacteria such as oligobacteria and Corynebacterium increased.Compared with DMgroup,the blood glucose level was significantly decreased(P0.05)and simpson index were significantly increased in MLf group(P0.05),and theratio of Firmicutes to Bacteroidetes,and the abundance of beneficial bacteria such as Lactobacillus and Lachnospira was increased(P0.05),the intestinal flora is close to the composition of Con group.The results showed that the combined intervention could not only play a hypoglycemic role,butalso regulate the intestinal microflora structure of rats to a certain extent,and alleviate the intestinal microflora imbalance caused by diabetes andmetformin treatment.Key words：type 2 diabetes mellitus;Lactobacillus Plantarum;fermented milk;intestinal flora0 引言近年来由于高盐、高脂、高糖饮食导致的糖尿病发病率逐年上升，对人体健康造成威胁1。糖尿病分为1 型糖尿病（T1DM）和 2 型糖尿病（T2DM），其中 2收稿日期：2022-05-30基金项目：河北省重点研发计划项目（20312804D）。作者简介：张博玮（1998-），女，硕士，研究方向为分子细菌学。通讯作者：边艳青4Vol.51，No.4 2023(total 389)型糖尿病患者约占糖尿病总病患 95%2。盐酸二甲双胍具有良好的降糖效果，目前临床利用盐酸二甲双胍治疗 T2DM 较为普遍。研究发现，T2DM 会造成患者肠道菌群失调，而长期服用二甲双胍会加重 T2DM 患者的腹泻、便秘，使肠道菌群失衡更加严重3。肠道菌群是人体最大的微生态系统，对人体具有重要的生理功能，参与人体的物质和能量代谢，可通过“微生物肠脑轴”影响机体大脑的功能和中枢神经系统的发育4。因此，在降低血糖的同时，改善患者肠道菌群是治疗T2DM 中需要重点关注的靶点。发酵乳制品是益生菌的优良载体，具有调节肠道菌群的作用。已有研究表明植物乳杆菌 N3117 菌株对低 pH 值和高胆汁酸盐具有较强的抗性，发酵特性优良，适用于高活菌数发酵乳的制备5。刘尧尧等用植物乳杆菌 N3117 菌粉干预肥胖大鼠，明显改善了其炎症反应和肠黏膜屏障功能6。本研究前期已证明活菌数为 107CFU/mL 的 N3117 发酵乳对 T2DM 大鼠的生理指标表现出更好的干预效果。利用植物乳杆菌N3117 菌株制备的发酵乳能否改善长期服用二甲双胍引起的肠道菌群紊乱还未见相关报道，因此本研究采用 16S rRNA 高通量基因测序技术，研究了其对二甲双胍治疗的 T2DM 大鼠肠道菌群的影响，从而为开发适用于服用二甲双胍治疗的 T2DM 患者的发酵乳制品提供理论依据。1 材料与方法1.1 材料1.1.1 菌株植物乳杆菌 N3117 菌株，分离自内蒙古传统发酵乳制品，在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物菌种保藏中心保藏编号为 CGMCC 10133，由石家庄君乐宝乳业有限公司提供。1.1.2 动物及饲料SPF 级健康雄性 SD 大鼠 24 只，体重 180220 g，购自辽宁长生生物技术股份有限公司，合格证号：No.210726210100404183，许可证号：SCXK（辽）2020-0001。基础饲料和高脂饲料购自北京博泰宏达生物技术有限公司，含碳水化合物 42.1%（质量分数，下同）、脂肪 25.4%、蛋白质 24.2%，于20 冰箱保存。1.1.3 试剂与仪器柠檬酸、柠檬酸钠、MRS 琼脂培养基，索莱宝生物科技有限公司；链脲佐菌素（S6089）、盐酸二甲双胍（M813341），麦克林企业有限公司；三诺易准 GA-3血糖试纸（synz01）、三诺易准 GA-3 血糖仪（synz02），北京康为世纪科技有限公司。高压蒸汽灭菌锅，日本 Panasonic 公司；80 超低温冰箱，青岛海尔集团；低温离心机，德国 Eppendorf 公司；电子分析天平，日本 Shimadzu 公司；烘箱，北京永光明医疗仪器有限公司；37 恒温培养箱，上海新苗医疗器械。1.2 方法1.2.1 发酵乳制备流程标准化鲜牛奶（预热5055）加入质量分数7%的白砂糖搅拌均匀后水合30 min 均质（5560，20 MPa）杀菌（9095，5 min）冷却至42 接种发酵至pH为4.44.5破乳冷却（20 左右）灌装封口冷藏成品1.2.2 保质期内活菌数测定吸取 1 mL 4 保存的发酵乳制品加入 9 mL 的生理盐水中进行 10 倍梯度稀释，取 100 L 稀释液接种于 MRS 培养基中，37 培养 48 h，选取菌落数在30300 之间的平板计数，最终浓度以每毫升菌液的菌落形成单位（Colony Forming Unit,CFU）平均值表示。分别在 0、7、14、21、28 d 测定发酵乳的活菌数。1.2.3 动物分组及模型建立适应性喂养 1 周后，随机分组为正常对照组（Con，n=6）和糖尿病模型组（n=18），分别喂养普通饲料和高脂饲料。第 5 周糖尿病造模组大鼠用 0.1 mmol/L pH 为4.5 的柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液配制 1%链脲佐菌素（STZ）溶液造模，按照大鼠体重 30 mg/kg 的给药量腹腔注射 STZ。一周后于大鼠的尾静脉取血测量血糖值，若测得空腹血糖值7.8 mmol/L，餐后 2 h 血糖值11.1 mmol/L 则判定为造模成功，未达标大鼠于第 6 周用同剂量 STZ 再次进行腹腔注射，剔除造模失败的大鼠。7、8 周作为模型巩固期，糖尿病造模组继续喂食高脂饲料。选取造模成功的糖尿病大鼠随机分为糖尿病模型组（DM，n=5）、二甲双胍治疗组（Met，n=5）、二甲双胍加发酵乳联合干预组（MLf，n=5）。从第 9 周开始，所有大鼠以普通饲料喂养，同时 Met组给予 120 mg/kg 盐酸二甲双胍灌胃，MLf 组给予120 mg/kg 二甲双胍加 2 mL 发酵乳联合灌胃，Con 组和 DM 组给予同剂量生理盐水灌胃，直至试验结束，干预期共 7 周。1.2.4 样品采集与指标测定1.2.4.1 体重测定实验期间，每周测大鼠体重，记录大鼠体重情况。1.2.4.2 血糖测定实验期间，每周尾静脉采血，使用血糖仪测空腹血糖及餐后 2 h 血糖。1.2.4.3 粪便肠道菌群的检测实验最后一天，灌胃结束后于无菌条件下对大鼠进行刺激使其排便，无菌 EP 管收集粪便。之后各组大鼠粪便样本送至北京百迈客生物科技有限公司进行16 s 区域扩增子高通量测序分析。1.3 数据统计分析利用百迈客生物云平台（http:/ GraphPad Prism 8 软件对试验的数据进行统计分析，数据采用均值标准差（Mean SD）表示。组间比较采用 t 检验，P0.05 表示有统计学差异。2 结果与讨论2.1 发酵乳保质期内活菌数的变化植物乳杆菌 N3117 发酵乳的活菌数在 28 d 保质期内数量级未发生明显变化。由此可以说明本研究制备的Research Papers研究报告52023年第51卷第4期（总第389期）N3117 发酵乳在整个储藏期比较稳定，如图 1 所示。2.2 植物乳杆菌 N3117 发酵乳对二甲双胍治疗的糖尿病大鼠体重的影响糖尿病的典型特征为多饮多食多尿，体重减轻7。如图 2 所示，与 Con 组相比，DM 组大鼠的体重显著下降（P0.05）；经灌胃干预后，从第 12 周开始 Met 组和 MLf 组体重均显著上升（P0.05），但和 Con 组比较，没有达到正常水平。2.3 植物乳杆菌 N3117 发酵乳对二甲双胍治疗的糖尿病大鼠血糖的影响如图 3 所示，在第 5、6 周注射 STZ 后大鼠空腹血糖和餐后血糖显著升高（P7.8 mmol/L，餐后 2 h 血糖值11.1 mmol/L，提示糖尿病模型造模成功。经灌胃干预后 Met 组和 MLf组大鼠空腹血糖和餐后血糖均显著下降（P0.05）。与Con 组相比，DM 组和 Met 组 shannon 指数和 simpson指数均显著降低（P0.05），MLf 组 simpson 指数显著降低（P0.05）。与 DM组相比，各干预组 shannon 指数均无统计学差异（P0.05）；Simpson 指数在 MLf 组显著升高（P0.05）。对干预组进行组间比较得出 MLf 组的 shannon 指数和 Simpson 指数均显著高于 Met 组（P0.05）。这表明糖尿病会影响大鼠肠道菌群多样性。二甲双胍治疗后，肠道菌群 Alpha 多样性均出现下降趋势。经发酵乳干预能够显著提高二甲双胍治疗后的糖尿病大鼠肠道菌群丰富度及多样性。2.4.2 Beta 多样性分析Beta 多样性分析可用于研究多个样本间菌群结构的相似性及差异性10。此研究采用了主坐标分析（PCoA），以 OTU 水平，Bray-Curtis 距离算法计算样品间的距离从而获得样本间的值，距离越近，表示相似性越高。Anosim 是一种非参数检验，用来检验组间的差异是否显著大于组内差异，从而判断分组是否有意义。由图 6 可知，与 Con 组相比，DM 组菌群分布出现明显差异。经灌胃干预后，Met 组与 DM 组的菌群分布较集中；MLf 组菌群分布与 DM 组完全分开，整体向 Con 组靠拢。这表明二甲双胍组大鼠与糖尿病组大鼠的肠道菌群结构较为相似，而发酵乳干预对菌群有着明显的重塑作用，更接近正常大鼠肠道菌群。Anosim 分析显示，R 值为 0.365，P 值为 0.005，说明组间差异大于组内差异，分组有意义。2.4.3 门水平菌种组成由图 7 可知，门水平上在合并丰度占比小于 1%的细菌之后，大鼠肠道菌群主要由厚壁菌门（FirmiResearch Papers研究报告72023年第51卷第4期（总第389期）图 7 各组大鼠肠道菌群门水平下物种组成图 8 各组大鼠肠道菌群属水平下物种组成（a）大鼠肠道菌群门水平下的组成（c）大鼠拟杆菌门丰度（b）大鼠厚壁菌门丰度（d）大鼠厚壁菌门/拟杆菌门丰度2.4.4 属水平菌种组成在分析了 4 组门水平的差异后，对属水平的菌种进行了分析，结果如图 8。由图 8 可知，从属水平结果来看，在合并丰度占比小于 1%的菌属之后，共有 18 个菌属显示其相对丰度。主要包括乳杆菌属（Lactobacillus）、寡源杆菌属（Oligella）、瘤 胃 球 菌（Ruminococcus）、棒 状 杆 菌（Corynebacterium_1）、拟普雷沃式菌属（Alloprevotella）、毛螺菌属（Lachnospira）等。与 Con 组相比，DM 组增加了寡源杆菌属（Oligella）、棒状杆菌（Corynebacterium_1）、瘤胃球菌属（Ruminococcaceae_UCG-014）、柔膜细菌（uncultured_bacterium_o_Mollicutes_RF39）的相对丰度，降低了 uncultured_bacterium_f_Muribaculaceae、拟普雷沃式菌属（Alloprevotella）、毛螺菌属（uncultured_bacterium_f_Lachnospiraceae）的相对丰度。与 DM 组相比，Met 组增加了寡源杆菌属（Oligella）、拟普雷沃式菌属（Alloprevotella）、棒状杆菌(Corynebacterium_1）的相对丰度，降低了乳杆菌 属（Lactobacillus）、普 氏 菌 属（uncultured_bacterium_f_Prevotellaceae）的相对丰度；MLf 组增加了乳杆菌属（Lactobacillus)的相对丰度，降低了寡源杆菌属（Oligella）、瘤胃球菌属（Ruminococcaceae_UCG-014）等的相对丰度。这说明二甲双胍治疗进一步导致了 T2DM 大鼠肠道菌群的紊乱，而发酵乳能够调节二甲双胍治疗后的糖尿病大鼠肠道菌群结构，使大鼠肠道内的有益菌增多，有害菌减少。cutes）、拟杆菌门（Bacteroidetes）、变形菌门（Proteobacteria）以及少量的放线菌门（Actinobacteria）和软壁菌门（Tenericutes）组成。与 Con 组相比，DM 组 Firmicutes丰度显著下降（P0.05），Bacteroidetes 丰度显著上升（P0.05），Firmicutes 与 Bacteroidetes 的比值显著下降（P0.05）。与 DM 组相比，MLf 组 Firmicutes 丰度显著上升（P0.05），Bacteroidetes 丰度显著下降（P0.05），F/B 显著上升（P0.05）。这说明二甲双胍治疗不能改善 T2DM 大鼠肠道菌群紊乱，而发酵乳可以促进二甲双胍治疗后的糖尿病大鼠肠道菌群的恢复，但跟正常大鼠肠道菌群还存在一定差异。*为与 Con 组相比，P0.05；#为与 DM 组相比，P0.05；a 为与 Met 组相比，P0.05Research Papers研究报告8Vol.51，No.4 2023(total 389)图 9 Con 组与 DM 组 LEfSe 结果图 10 DM 组与 Met 组 LEfSe 结果图 11 DM 组与 MLf 组 LEfSe 结果3结论近年来研究显示，T2DM 发病常伴有肠道菌群紊乱发生13-14。Larsen 等研究发现15，糖尿病患者粪便厚壁菌门丰度较正常人群下降，拟杆菌门丰度上升，厚壁菌门与拟杆菌门比值降低，且该比值与糖耐量呈正相关性。厚壁菌门和拟杆菌门是肠道菌群中的优势菌群，厚壁菌门与拟杆菌门的比值可作为高脂饮食诱导2.4.5 组间差异显著性分析LEfSe 多级物种差异判别分析用于发现不同组别样本中最能解释组间差异的物种以及这些物种对组间差异的影响程度。本研究比较了 Con 组与 DM 组以及 DM 组与各干预组间的差异菌群。由图 9 可知，Con 组与 DM 组在门、纲、目、科、属、种分类层面上均存在差异菌群。LDA 判别柱形图显示共有 30 个物种对两组差异影响较大，其中 10 个物种在 Con 组显著富 集，包 括 p_Firmicutes、c_Clostridia、f_Lachnospiraceae、Trichinella_pseudospiralis、g_Ruminiclostridium 等。20 个物种在 DM 组显著富集，包括 c_Bacteroidia、f_Corynebacteriaceae、g_Oligella、c_Gammaproteobacteria、s_uncultured_bacterium_g_Facklamia、f_Burkholderiaceae 等，大多为有害菌。提示糖尿病大鼠肠道菌群有益菌减少，有害菌增多，肠道菌群失衡。由图 10、图 11 可知，Met 组与 DM 组仅有两个显著差异物种，说明两组大鼠菌群结构相似，相较于 DM 组，有 6 个物种在 MLf 组显著富集，包括p_Firmicutes、g_Lactobacillus、c_Bacilli 等。p_Firmicutes 是典型的产丁酸细菌，参与调节机体对炎症的反应11。g_Lactobacillus 是人们所熟知的肠道益生菌，其在肠道中所占比例的增加能阻止病原菌对肠道的入侵和定植，抑制病原菌，抗感染，维持肠道的微生态平衡12。这表明发酵乳干预可调节二甲双胍治疗后的大鼠肠道菌群结构，增加肠道内有益菌的生长。Research Papers研究报告92023年第51卷第4期（总第389期）的肠道菌群紊乱的标志16。本研究结果与 Larsen 等的研究结果一致。二甲双胍作为临床治疗糖尿病的常用药，具有显著降糖疗效，但其对糖尿病患者菌群失调的影响及可能机制，目前相关文献报道较少，因此本研究分析了二甲双胍治疗对糖尿病大鼠肠道菌群的影响。结果显示，灌胃二甲双胍后，T2DM 大鼠肠道微生物群落丰富度和多样性下降，肠道菌群紊乱症状未得到缓解。这与陈晔17等的研究结果相一致。同时灌胃二甲双胍还增加了寡源杆菌和棒状杆菌等有害菌的丰度，由它们产生的内毒素会加重肠道内炎症反应，加重病情18。最新研究显示19，植物乳杆菌 C88 是一株具有辅助降血糖功能的益生菌，这提示植物乳杆菌具备改善T2DM 的潜力。有研究表明益生菌联合降糖药物治疗患者能够增强降糖药物的疗效而且减少药物的不良反应20。方铭21等人将双歧杆菌三联活菌联合二甲双胍治疗 T2DM 患者后发现益生菌组比单用二甲双胍有更强的疗效。为了探究二甲双胍联合益生菌干预是否具有协同作用，本研究用二甲双胍加发酵乳联合处理，探讨了植物乳杆菌 N3117 发酵乳对二甲双胍治疗后的的 T2DM 大鼠肠道菌群的影响。结果显示，联合干预改善了二甲双胍导致的大鼠肠道微生物群落丰富度和多样性的下降，基于 Bray-Curtis 指标的 PCoA分析也证实联合干预后的大鼠肠道菌群更接近正常大鼠。LEfSe 分析显示乳酸杆菌在联合组显著富集，这可能与植物乳杆菌 N3117 菌株能够很好的定植于肠道有关，同时也证明发酵乳可在一定程度上维持大鼠肠道菌群稳态，缓解因二甲双胍摄入而导致的肠道菌群失调。这将为开发适用于服用二甲双胍治疗的T2DM 患者的发酵乳制品提供理论支持，为通过调节肠道菌群改善慢性代谢疾病提供新思路。参 考 文 献：1 SUN Y,HUANG Y,YE F,et al.Effects of probiotics on glycemiccontrol and intestinal dominant flora in patients with type 2 diabetesmellitus:A protocol for systematic review and meta-analysisJ.Medici-ne,2020,99(46):e23039.DOI:10.1097/MD.0000000000023039.2 HOLMAN N,YOUNG B,GADSBY R.Current prevalence of Type1 and Type 2 diabetes in adults and children in the UK J.Diabeticmedicine:a journal of the British Diabetic Association,2015,32(9).DOI:10.1111/dme.12791.3 FATIMA M,SADEEQA S,NAZIR CUR.Metformin and its gastrointestinal problems:A review J.Biomedical Research,2018,29(11):2285-2289.DOI：10.4066/biomedicalresearch.40-18-526.4 MARGOLIS K G,CRYAN J F,MAYER E A.The microbiota-gut-brain axis:from motility to moodJ.Gastroenterology,2021 Apr;160(5):1486-1501.DOI:10.1053/j.gastro.2020.10.066.5 冯丽莉,王华,王世杰,等.植物乳杆菌 N3117 功能及发酵特性研究J.中国乳品工业,2016,44(12):15-18.6 刘尧尧,李璐,柳婷婷,等.植物乳杆菌菌粉对肥胖大鼠肠道黏膜屏障功能的影响J.食品科学,2020,41(17):153-160.7 贾兆通,田凯华.1 型糖尿病并发代谢综合征的患病特点及其原因分析J.中国现代医学杂志,2007(22):2770-2772,2776.8 WANG Y,SHENG HF,HE Y,et al.Comparison of the levels ofbacterial diversity in freshwater,intertidal wetland,and marine sediments by using millions of illumina tags J.Appl Environ Microbiol,2012,78(23):8264-71.DOI:10.1128/AEM.01821-12.9 KONG H H,CONLAN S,GRICE E A,et al.Topographical andtemporal diversity of the human skin microbiomeJ.Science,2009,324(5931):1190-1192.DOI:10.1126/science.1171700.10 GOWER J C.Some distance properties of latent root and vector methods used in multivariate analysisJ.Biometrika,1966,53:325.DOI:10.1093/biomet/53.3-4.325.11 PETRA LOUIS,HARRY J.Flint,Diversity.metabolism and microbialecology of butyrate-producing bacteria from the human large intestineJ,FEMS Microbiology Letters,2009,294(1):1-8.DOI:10.1111/j.1574-6968.2009.01514.12 QUANTAO MA,YAQI LI,PENGFEI LI,et al.Research progressin the relationship between type 2 diabetes mellitus and intestinal floraJ.Biomedicine&Pharmacotherapy,2019,117.DOI:10.1016/j.biopha.2019.109138.13 张博荀.基于“肠道菌群黏膜屏障”研究“黄芩黄连”药对治疗T2DM 的疗效机制及配伍效应D.成都:成都中医药大学,2020.14 MA Q,LI Y,LI P,et al.Research progress in the relationship between type 2 diabetes mellitus and intestinal floraJ.Biomed Pharmacother,2019,117(25):632-638.DOI:10.1016/j.biopha.2019.109138.15 LARSEN N,VOGENSEN F K,VAN DEN BERG F W,et al.Gutmicrobiota in human adults with type 2 diabetes differs from non-diabetic adultsJ.PLoS ONE.2010,5(2):e9085.DOI:10.1371/journal.pone.0009085.16 ZHANG X,ZHAO Y,ZHANG M,et al.Structural changes of gutmicrobiota during berberine-mediated prevention of obesity and insulinresistance in high-fat diet-fed ratsJ.PloS ONE,2012,7(8):e42529.DOI:10.1371/journal.pone.0042529.17 魏志宏,汪钦,张宇轩,等.二甲双胍促进 2 型糖尿病小鼠支链氨基酸分解代谢J.心脏杂志,2021,33(6):579-584.18 孙小鹏,何小花,黄利红,等.不同程度颅脑疾病患者肠道菌群分析J.中国微生态学杂志,2022,34(4):445-450.19 罗宏,段翠翠,栾畅,等.植物乳杆菌 C88 对高脂饲料和链脲佐菌素诱导 2 型糖尿病模型大鼠的降血糖作用J.食品科学,2018,39(13):190-197.20 齐金新.复合益生菌联合二甲双胍对 2 型糖尿病患者血糖、胰岛功能及胰岛素抵抗影响的研究D.呼和浩特:内蒙古医科大学,2021.21 方铭,金兴权,张晔.双歧三联活菌胶囊辅助治疗 2 型糖尿病疗效及对血清炎症因子的影响J.中国药师,2017,20(10):1823-1825.Research Papers研究报告10