HIV实验室检测及规范操作.pptx

HIV实验室检测及规范操作实验室检测及规范操作xxx艾滋病检测的方法艾滋病检测的方法n nHIV抗体检测抗体检测HIVHIV抗体初筛检测抗体初筛检测HIVHIV抗体确认检测（免疫印迹试验）抗体确认检测（免疫印迹试验）n nHIVHIV核酸检测核酸检测核酸检测核酸检测 核酸序列依赖性扩增（核酸序列依赖性扩增（NASBANASBA）HIVHIV定量逆转录定量逆转录PCRPCR系统（系统（RTRTPCRPCR）HIVRNAHIVRNA定量检测的分支测定法（定量检测的分支测定法（bDNA)bDNA)艾滋病检测方法的意义艾滋病检测方法的意义n nHIVHIV抗体检测抗体检测抗体检测抗体检测酶联免疫吸附试验酶联免疫吸附试验 间接法间接法 直接法（双抗原夹心法）直接法（双抗原夹心法）抗体竞争法抗体竞争法明胶颗粒凝集试验（明胶颗粒凝集试验（PAPA）快速法快速法 HIV/AIDSHIV/AIDS的筛查的筛查，但初筛阳性结果不能做为艾滋，但初筛阳性结果不能做为艾滋病诊断依据，需将该标本送地区筛查中心实验室用两病诊断依据，需将该标本送地区筛查中心实验室用两种方法进行复核，仍为阳性或一阴一阳则须送省确认种方法进行复核，仍为阳性或一阴一阳则须送省确认中心。中心。艾滋病检测方法的意义艾滋病检测方法的意义n nHIVHIV抗体确认检测（免疫印迹试验）抗体确认检测（免疫印迹试验）HIV/AIDSHIV/AIDS诊断的唯一依据诊断的唯一依据,省省CDCCDC确认实验室负责全省确认实验室负责全省监测哨点以及常规检测中阳性及可疑标本的确认和省内监测哨点以及常规检测中阳性及可疑标本的确认和省内HIVHIV初筛实验室的质量管理初筛实验室的质量管理.另外另外,省检疫系统有一个确省检疫系统有一个确认认实验室实验室,设在省检疫局保健中心设在省检疫局保健中心.艾滋病检测方法的意义艾滋病检测方法的意义HIV核酸检测核酸检测辅助诊断：在特殊情况下，如出现某些非典型的抗体反应，特别是不确定反应时，RNA的测定可提供有用的证据。感染早期：在HIV感染的窗口期，无法使用抗体检测进行诊断，此时RNA的测定具有特殊的意义，提示是否有感染的可能，但仍需追踪检测HIV抗体，最终根据抗体的检测情况做出诊断。病程监控：帮助确定疾病发展的阶段。指导治疗方案及疗效测定预测疾病进程国家对国家对HIV抗体检测试剂的要求抗体检测试剂的要求初筛试剂初筛试剂 筛查试剂必须是筛查试剂必须是HIV1+2HIV1+2混合型的、经国混合型的、经国家食品药品监督管理局注册批准、批批检合家食品药品监督管理局注册批准、批批检合格、临床评估质量优良、在有效期内的试剂。格、临床评估质量优良、在有效期内的试剂。确认试剂 必须经国家食品药品监督管理局注册批准。必须经国家食品药品监督管理局注册批准。我国常用的我国常用的HIV抗体检测试剂抗体检测试剂 HIVHIV抗体筛查试剂抗体筛查试剂 酶联免疫：初筛实验室的常用基本试剂。酶联免疫：初筛实验室的常用基本试剂。明胶颗粒凝集明胶颗粒凝集 其它快速诊断试剂：在尚未建立艾滋病筛其它快速诊断试剂：在尚未建立艾滋病筛查实验室的偏远地区由经过培训的技术人员查实验室的偏远地区由经过培训的技术人员在规定的场所使用。在规定的场所使用。HIVHIV抗体确认试剂抗体确认试剂 免疫印迹试剂免疫印迹试剂快速检测试剂的优缺点快速检测试剂的优缺点硒标记法和金标记法硒标记法和金标记法与与ELISAELISA相比相比优点优点所需时间短所需时间短操作简便，不需特殊设备。操作简便，不需特殊设备。试剂贮存于室温。试剂贮存于室温。缺点缺点特异性和敏感性与特异性和敏感性与ELISAELISA有差距。有差距。费用较高。费用较高。HIV抗体检测程序及流程图抗体检测程序及流程图1 1、筛查试验、筛查试验 标本验收合格后，用筛查试剂进行检测，如标本验收合格后，用筛查试剂进行检测，如呈阴性反应，报告为呈阴性反应，报告为HIVHIV抗体阴性；对呈阳性抗体阴性；对呈阳性反应的标本须进行重复检测。反应的标本须进行重复检测。2 2、重复检测、重复检测 用原有试剂和另外一种不同原理或不同厂家用原有试剂和另外一种不同原理或不同厂家的试剂重复检测，如两种试剂复测均呈阴性的试剂重复检测，如两种试剂复测均呈阴性反应，则报告反应，则报告HIVHIV抗体阴性；如均呈阳性反应，抗体阴性；如均呈阳性反应，或一阴一阳，需送艾滋病确认实验室进行确或一阴一阳，需送艾滋病确认实验室进行确认。认。3、筛查试验的流程图、筛查试验的流程图样品样品筛查检测筛查检测筛查试剂筛查试剂阳性反应阳性反应重复检测重复检测均阳性反应均阳性反应一阴一阳一阴一阳送确认实验室送确认实验室进行确认进行确认均阴性反应均阴性反应阴性报告阴性报告阴性反应阴性反应原有试剂加原有试剂加另一种筛查试剂另一种筛查试剂HIV抗体筛查结果的报告和处理抗体筛查结果的报告和处理筛查试验呈阴性反应，出具筛查试验呈阴性反应，出具HIVHIV抗体阴性报告抗体阴性报告（提示应考虑窗口期的可能）。（提示应考虑窗口期的可能）。筛查试验呈阳性反应，可出具筛查试验呈阳性反应，可出具“HIVHIV待复查待复查”报报告，不能出阳性报告。同时尽快进行以下处理：告，不能出阳性报告。同时尽快进行以下处理：填写填写HIVHIV阳性标本送检单，并随标本送至当阳性标本送检单，并随标本送至当地筛查中心实验室，或直接送确认实验室。地筛查中心实验室，或直接送确认实验室。筛查中心实验室应尽快用两种试剂进行复测，筛查中心实验室应尽快用两种试剂进行复测，如结果均阳性或一阴一阳，则应将该标本和送如结果均阳性或一阴一阳，则应将该标本和送检单一并送至省艾滋病确认实验室确认。检单一并送至省艾滋病确认实验室确认。阳性标本必须送省确认中心，筛查实验室不阳性标本必须送省确认中心，筛查实验室不能随意处理。能随意处理。做好检测后的咨询做好检测后的咨询结果的解释结果的解释 问题:HIV抗体检测结果阴性是否表明未感染?对不确定结果如何解释?怎么样知道婴儿是否感染了HIV?HIV抗体初筛检测抗体初筛检测结果解释 阴性阴性阴性阴性(1)1)未感染未感染HIVHIV(2)(2)可能感染了可能感染了HIV,HIV,但处于窗口期但处于窗口期,或或HIV-1/2HIV-1/2抗抗体和体和HIV-1OHIV-1O亚型抗体低于检测下限。亚型抗体低于检测下限。(3)(3)疾病晚期疾病晚期,免疫功能缺损免疫功能缺损,抗体可能呈阴性抗体可能呈阴性.确认阳性确认阳性确认阳性确认阳性 感染了感染了HIV,HIV,样品含有样品含有HIV-1/2HIV-1/2抗体和抗体和HIV-1OHIV-1O亚型抗体亚型抗体(未满未满1818个月的婴儿除外个月的婴儿除外).).不确定不确定:建议追踪检测建议追踪检测.HIV抗体初筛检测抗体初筛检测结果解释 什么是不确定结果？什么是不确定结果？什么是不确定结果？什么是不确定结果？HIV HIV抗体确认试验时抗体确认试验时,试验条带上出现的蛋白带型试验条带上出现的蛋白带型不足以判断为不足以判断为HIVHIV抗体阳性抗体阳性,应建议其应建议其3 3个月后复查个月后复查.如果复查结果阳转如果复查结果阳转,表明受检者已感染表明受检者已感染HIV;HIV;如复查时条带全部消失如复查时条带全部消失,则为阴性结果则为阴性结果;如复查时条带没有变化或有变化但仍不足以判断如复查时条带没有变化或有变化但仍不足以判断为阳性为阳性,则应建议其则应建议其3 3个月后再复查一次个月后再复查一次,如还不能如还不能判断为阳性结果判断为阳性结果,则应作为阴性对待则应作为阴性对待.HIV抗体初筛检测结果解释抗体初筛检测结果解释n n造成检测结果不确定的原因造成检测结果不确定的原因(1)(1)处于窗口期处于窗口期,血清中还没有形成典型的血清中还没有形成典型的HIVHIV抗抗体。体。(2)(2)艾滋病进展到终末期艾滋病进展到终末期,人体免疫力缺陷人体免疫力缺陷,抗体抗体水平下降。水平下降。(3)(3)与其他非病毒蛋白抗体有交叉反应与其他非病毒蛋白抗体有交叉反应.自身免疫自身免疫性疾病、恶性肿瘤、怀孕、输血或器官移殖性疾病、恶性肿瘤、怀孕、输血或器官移殖等，此时，身体产生的一些抗体与核等，此时，身体产生的一些抗体与核心蛋白抗体相似。心蛋白抗体相似。(4)(4)以前接种过以前接种过HIVHIV疫苗。疫苗。HIV抗体初筛检测结果解释抗体初筛检测结果解释如何判断婴儿是否感染了如何判断婴儿是否感染了HIV？通过胎盘，感染了通过胎盘，感染了HIVHIV的母亲所生的婴儿可的母亲所生的婴儿可能带有来自母体的能带有来自母体的HIVHIV抗体，此时抗体，此时HIVHIV抗体检抗体检测阳性并不意味着已被感染。测阳性并不意味着已被感染。建议在婴儿建议在婴儿9 9个月时进行个月时进行HIVHIV初筛检测初筛检测 如阴性，则判定为未感染如阴性，则判定为未感染HIVHIV。如阳性，则应在婴儿如阳性，则应在婴儿1818个月时进行复检个月时进行复检 阴性：判定为未感染。阴性：判定为未感染。阳性：则将血样送至省阳性：则将血样送至省CDCCDC确认中心进确认中心进行行 HIVHIV抗体的确认试验。抗体的确认试验。HIV抗体初筛检测 酶联免疫吸附试验（酶联免疫吸附试验（enzyme linked immunosorbent assay,ELISA）ELISA法中有间接法、夹心法和竞争法。目前使用最多的是夹心法。夹心法。HIV抗体初筛检测（ELISA实验原理）酶球（酶标记抗原）酶球（酶标记抗原）抗体抗体HIV抗体初筛检测ELISA夹心法 n n原理原理原理原理 将将HIVHIV抗原包被到固相载体上，标本中的抗原包被到固相载体上，标本中的HIVHIV抗体抗体与包被的与包被的HIVHIV抗原结合形成复合物，利用抗体的多抗原结合形成复合物，利用抗体的多价性，又与酶（价性，又与酶（HRPHRP）标记的同类）标记的同类HIVHIV抗原也即酶抗原也即酶标板内的球状复合物，形成一个标板内的球状复合物，形成一个HIVHIV抗原抗体酶标抗原抗体酶标记的记的HIVHIV抗原复合物，最后加入底物，避光抗原复合物，最后加入底物，避光3030分钟，分钟，在酶作用下，产生显色反应，加在酶作用下，产生显色反应，加2N2N硫酸终止后呈硫酸终止后呈黄色，在黄色，在450/620nm450/620nm双波长下测定光密度值，与双波长下测定光密度值，与标准进行比较，以判定标本标准进行比较，以判定标本 的结果。的结果。HIV抗体初筛检测抗体初筛检测 n n材料材料材料材料 标本，试剂盒，酶标仪和洗板机，其它标本，试剂盒，酶标仪和洗板机，其它试验基本材料。试验基本材料。n n方法方法方法方法 以荷兰阿克苏试剂盒为例以荷兰阿克苏试剂盒为例实验前试剂应在室温下放置实验前试剂应在室温下放置3030分钟，使用后分钟，使用后试剂放回试剂放回2828配制洗液配制洗液125125洗液用蒸馏水洗液用蒸馏水1 1：2525稀释。稀稀释。稀释后可在释后可在2828稳定稳定2 2周。周。TMBTMB与尿过氧化物溶液等量混合准备成与尿过氧化物溶液等量混合准备成TMBTMB底物。因其稳定性有限，所以应现用现配。底物。因其稳定性有限，所以应现用现配。配制后的配制后的TMBTMB底物为无色，在避光下可以稳底物为无色，在避光下可以稳定定6 6个小时。个小时。HIV抗体初筛检测（阿克苏（阿克苏ELISA）每孔加入每孔加入100ul100ul血清稀释液，注意不准碰到孔内的血清稀释液，注意不准碰到孔内的酶球。酶球。在所确定的孔中加入在所确定的孔中加入50ul50ul血清标本或对照；设血清标本或对照；设3 3孔孔阴性、阴性、1 1孔孔HIV-1HIV-1阳性、阳性、1 1孔孔HIV-2HIV-2阳性对照。阳性对照。混匀，盖上贴膜放入混匀，盖上贴膜放入3737环境孵育环境孵育1 1小时。孵育结小时。孵育结束前束前5 5分钟，准备充足的分钟，准备充足的TMBTMB底物液。底物液。撕去贴膜，用新配制洗涤液洗板（洗板次数根据撕去贴膜，用新配制洗涤液洗板（洗板次数根据试剂盒要求）。吸干，每孔加入试剂盒要求）。吸干，每孔加入100ulTMB100ulTMB底物液。底物液。置室温（置室温（18251825）闭光孵育）闭光孵育3030分钟。分钟。每孔加入每孔加入100ul2N100ul2N硫酸终止反应。硫酸终止反应。在在450nm450nm（单波长）或（单波长）或450/620nm450/620nm（双波长）读（双波长）读取光密度值（取光密度值（ODOD值）（应在终止反应值）（应在终止反应2 2小时内进小时内进行读数）。行读数）。HIV抗体初筛检测抗体初筛检测（阿克苏（阿克苏ELISA）n n结果判定结果判定结果判定结果判定阴性对照（阴性对照（Negative Control,Negative Control,，NCNC）的参考标准）的参考标准 NCNC必须必须0.2500.250，去除，去除0.2500.250的各孔；的各孔；计算剩余计算剩余NCNC的平均值（的平均值（NCxNCx）0.6NCx0.6NCxNCNC1.4NC1.4NCX X,如果有一个以上超出此范围，如果有一个以上超出此范围，去除后重新计算去除后重新计算NCxNCx。判定实验有效性：判定实验有效性：至少有至少有2 2个阴性对照个阴性对照ODOD值有效。值有效。PC1-NCx0.400PC1-NCx0.400（PC1PC1：HIV-1HIV-1抗体阳性对照值）抗体阳性对照值）PC2-NCx0.400PC2-NCx0.400（PC2PC2：HIV-2HIV-2抗体阳性对照值）抗体阳性对照值）HIV抗体初筛检测（阿克苏ELISA）临界值（Cutoff）如果实验有效，按照公式计算界限值：Cutoff=NCx+0.100实验结果判定如果OD值Cutoff值，则样品为阳性；如果OD值Cutoff值，则样品为阴性。HIV抗体初筛检测抗体初筛检测（阿克苏（阿克苏（阿克苏（阿克苏ELISAELISA）计算举例计算举例NC=0.089NC=0.089；0.0930.093；0.0910.091PC1=1.155 PC2=1.069PC1=1.155 PC2=1.069NCx=0.091NCx=0.091清除异常的质控对照清除异常的质控对照去除去除去除去除NC0.250 NC0.250，无去除无去除无去除无去除 去除去除去除去除NCNC1.4NCx 1.40.091=0.127 1.4NCx 1.40.091=0.127 无去除无去除无去除无去除去除去除去除去除NCNC0.6NCx 0.60.091=0.055 0.6NCx 0.60.091=0.055 无去除无去除无去除无去除确定下列条件满足确定下列条件满足PC1-NCx0.400 1.155-0.091=1.064 PC1-NCx0.400 1.155-0.091=1.064 通过通过通过通过PC2-NCx0.400 1.069-0.091=0.987 PC2-NCx0.400 1.069-0.091=0.987 通过通过通过通过计算临界值计算临界值Cutoff=NCx+0.100=0.091+0.100=0.191Cutoff=NCx+0.100=0.091+0.100=0.191HIV抗体初筛检测抗体初筛检测（阿克苏（阿克苏ELISA）n n注意事项注意事项注意事项注意事项超过有效期的试剂不能使用，样品和试剂应处于室温，超过有效期的试剂不能使用，样品和试剂应处于室温，使用后试剂放回使用后试剂放回2-82-8。为了避免污染，不要用手指或加样器尖接触酶标板孔为了避免污染，不要用手指或加样器尖接触酶标板孔及孔内的酶复合物。及孔内的酶复合物。所有的加样步骤要精心准确，试剂或样品的交叉污染所有的加样步骤要精心准确，试剂或样品的交叉污染会引起错误的结果，避免微生物或其它污染物污染。会引起错误的结果，避免微生物或其它污染物污染。清除酶标板孔内的气泡，如果需要，轻轻拍打板架。清除酶标板孔内的气泡，如果需要，轻轻拍打板架。洗板机要经常保养，避免交叉污染。洗板机要经常保养，避免交叉污染。HIV抗体初筛检测抗体初筛检测（阿克苏（阿克苏（阿克苏（阿克苏ELISAELISA）n n非重复有活性反应结果（假阳性）可能属于下列一个或多个技术问题引起：n n由于仪器或加样器尖造成的交叉污染。n n底物被金属离子污染。n n由于潮湿或试剂滴漏造成的交叉污染。n n不充分的洗板或最后吸去不彻底。n n读数错误，在酶标板底部有水滴或在酶标板孔内有气泡。HIV抗体检测抗体检测明胶颗粒凝集试验（明胶颗粒凝集试验（gelatin particle agglutination,PA)以日本富士药厂和珠海丽珠试剂厂生产的试剂盒为例n n原理 经HIV抗原致敏的明胶颗粒与血清中的抗体发生特异性抗原-抗体结合并产生肉眼可见的凝集反应。n n优点 操作简便，快速，无需特殊仪器设备，适合门诊少量标本的检测。HIV抗体检测抗体检测（明胶颗粒凝集试验）（明胶颗粒凝集试验）n n材料材料 血清标本血清标本 ,U,U型板型板 ,PA,PA试剂盒试剂盒(“A”(“A”溶解用液溶解用液,”B”,”B”血清稀释液血清稀释液,”C”,”C”致敏颗粒致敏颗粒,”D”,”D”非致敏颗粒非致敏颗粒,阳性对照血清阳性对照血清,专用滴管专用滴管.n n方法方法 (1)(1)从从4 4冰箱取出试剂盒冰箱取出试剂盒,恢复至室温后使用恢复至室温后使用.(2)(2)从从1:41:4开始做倍比稀释开始做倍比稀释.(3)(3)用专用滴管用专用滴管,第二孔加第二孔加1 1滴滴(25ul)(25ul)非致敏颗粒非致敏颗粒”D”,D”,第三孔加第三孔加1 1滴滴(25ul)(25ul)致敏颗粒致敏颗粒”C”.C”.(4)(4)轻轻拍打微量板或在振荡器上振荡轻轻拍打微量板或在振荡器上振荡1 1分钟混分钟混合后合后,室温室温(20(20)静置静置2 2小时后观察结果小时后观察结果.HIV抗体检测抗体检测（明胶颗粒凝集试验）（明胶颗粒凝集试验）n n结果判断结果判断 明胶颗粒沉积在孔底明胶颗粒沉积在孔底,周边平滑周边平滑,或形成或形成致密圆圈者为阴性结果致密圆圈者为阴性结果.(-).(-)明胶颗粒沉积在孔底明胶颗粒沉积在孔底,中央形成致密小环中央形成致密小环,周边平滑为可疑反应周边平滑为可疑反应.(+_).(+_)孔内有清晰的宽环且外缘粗糙者孔内有清晰的宽环且外缘粗糙者,为阳性为阳性结果结果.(+/+).(+/+)孔内凝聚颗粒形成均一的膜覆盖在整个孔内凝聚颗粒形成均一的膜覆盖在整个孔底者为强阳性反应孔底者为强阳性反应.(+/+).(+/+)孔内样品与致敏和非致敏颗粒均产生凝孔内样品与致敏和非致敏颗粒均产生凝集者集者,则需作重吸收试验后进一步检测则需作重吸收试验后进一步检测.确认试验的试剂确认试验的试剂 必须是经国家食品药品监督管理必须是经国家食品药品监督管理局注册批准、在有效期内的试剂。局注册批准、在有效期内的试剂。确认试验方法确认试验方法 包括免疫印迹试验（包括免疫印迹试验（WBWB）、条带）、条带免疫试验（免疫试验（LIATEK HIVLIATEK HIV）、放射免）、放射免疫沉淀试验（疫沉淀试验（RIPARIPA）及免疫荧光试验）及免疫荧光试验（IFAIFA）。国内常用的确认试验方法）。国内常用的确认试验方法是是WBWB。HIVHIV抗体确认试验抗体确认试验 确认检测流程确认检测流程 有有有有HIV-1/2HIV-1/2HIV-1/2HIV-1/2混合型和单一的混合型和单一的混合型和单一的混合型和单一的HIV-1HIV-1HIV-1HIV-1或或或或HIV-2HIV-2HIV-2HIV-2型。型。型。型。先用先用先用先用HIV-1/2HIV-1/2HIV-1/2HIV-1/2混合型试剂进行检测，如果呈阴性混合型试剂进行检测，如果呈阴性混合型试剂进行检测，如果呈阴性混合型试剂进行检测，如果呈阴性反应，则报告反应，则报告反应，则报告反应，则报告HIVHIVHIVHIV抗体阴性；如果呈阳性反应，抗体阴性；如果呈阳性反应，抗体阴性；如果呈阳性反应，抗体阴性；如果呈阳性反应，则报告则报告则报告则报告HIV-1HIV-1HIV-1HIV-1抗体阳性；如果不满足阳性标准，抗体阳性；如果不满足阳性标准，抗体阳性；如果不满足阳性标准，抗体阳性；如果不满足阳性标准，则判为则判为则判为则判为HIVHIVHIVHIV抗体检测结果不确定。如果出现抗体检测结果不确定。如果出现抗体检测结果不确定。如果出现抗体检测结果不确定。如果出现HIV-HIV-HIV-HIV-2 2 2 2型的特异性指示条带，需用型的特异性指示条带，需用型的特异性指示条带，需用型的特异性指示条带，需用HIV-2HIV-2HIV-2HIV-2型免疫印迹型免疫印迹型免疫印迹型免疫印迹试剂再做试剂再做试剂再做试剂再做HIV-2HIV-2HIV-2HIV-2的抗体确认试验，呈阴性反应，的抗体确认试验，呈阴性反应，的抗体确认试验，呈阴性反应，的抗体确认试验，呈阴性反应，报告报告报告报告HIV-2HIV-2HIV-2HIV-2抗体阴性；呈阳性反应则报告抗体阴性；呈阳性反应则报告抗体阴性；呈阳性反应则报告抗体阴性；呈阳性反应则报告HIV-2HIV-2HIV-2HIV-2抗体血清学阳性抗体血清学阳性抗体血清学阳性抗体血清学阳性,并将样品送国家参比实验室进并将样品送国家参比实验室进并将样品送国家参比实验室进并将样品送国家参比实验室进行核酸序列分析。行核酸序列分析。行核酸序列分析。行核酸序列分析。HIV抗体确认检测流程免疫印迹法（WB，HIV-1/2混合型）HIV-1阳性反应不确定反应 出现HIV-2指示条带报告HIV-1阳性不确定反应阳性反应阴性反应报告阴性每3个月随访1次，共2次，仍属可疑，则报告阴性；如随访期间HIV抗体出现阳性反应则报告阳性。随访期间可根据需要，检测病毒核酸和或P24抗原，作为辅助诊断。阴性反应报告阴性筛查试验阳性反应样品报告HIV-2血清学阳性免疫印迹法（WBHIV-2）艾滋病实验室诊断确认试验艾滋病实验室诊断确认试验艾滋病实验室诊断确认试验艾滋病实验室诊断确认试验(蛋白印迹蛋白印迹蛋白印迹蛋白印迹Western-Blot)Western-Blot)试验试验试验试验n n原理原理 病毒裂解物抗原经病毒裂解物抗原经SDSSDS聚丙烯酰胺凝胶电泳聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)(PAGE)分离分离,然后将分离后的抗原转移然后将分离后的抗原转移(印迹印迹)到硝酸纤到硝酸纤维薄膜上维薄膜上,采用类似采用类似ELISAELISA的技术的技术,当样品中含有当样品中含有HIVHIV抗抗体时体时,它和印迹在硝酸纤维薄膜上的病毒抗原相结合它和印迹在硝酸纤维薄膜上的病毒抗原相结合呈现肉眼可见的特异性带型呈现肉眼可见的特异性带型.n nHIV-1HIV-1型主要基因有型主要基因有:核蛋白带核蛋白带 gag(p17/18,p24,p55),gag(p17/18,p24,p55),酶蛋白带酶蛋白带 pol(p31,p51,p66),pol(p31,p51,p66),外膜蛋白带外膜蛋白带 env(gp41,gp120,gp160)env(gp41,gp120,gp160)确认试验结果的判定确认试验结果的判定下面是我国使用下面是我国使用下面是我国使用下面是我国使用WBWBWBWB确认确认确认确认HIVHIVHIVHIV感染的判定标准和判定结果的基本原则。在实际工感染的判定标准和判定结果的基本原则。在实际工感染的判定标准和判定结果的基本原则。在实际工感染的判定标准和判定结果的基本原则。在实际工作中还应参照所用试剂盒说明书综合判定，遇疑难情况应报上级实验室解决。作中还应参照所用试剂盒说明书综合判定，遇疑难情况应报上级实验室解决。作中还应参照所用试剂盒说明书综合判定，遇疑难情况应报上级实验室解决。作中还应参照所用试剂盒说明书综合判定，遇疑难情况应报上级实验室解决。&HIV-1HIV-1HIV-1HIV-1抗体阳性（抗体阳性（抗体阳性（抗体阳性（+）至少有至少有至少有至少有2 2 2 2条条条条envenvenvenv带（带（带（带（gp41gp41gp41gp41和和和和gp160/gp120gp160/gp120gp160/gp120gp160/gp120）出现，或至少）出现，或至少）出现，或至少）出现，或至少1 1 1 1条条条条envenvenvenv带和带和带和带和p24p24p24p24带同时出现。带同时出现。带同时出现。带同时出现。&HIV-2 HIV-2 HIV-2 HIV-2抗体血清学阳性（抗体血清学阳性（抗体血清学阳性（抗体血清学阳性（+）同时符合以下同时符合以下同时符合以下同时符合以下2 2 2 2条标准可判为条标准可判为条标准可判为条标准可判为HIV-2HIV-2HIV-2HIV-2抗体血清学阳性：抗体血清学阳性：抗体血清学阳性：抗体血清学阳性：（1 1 1 1）符合）符合）符合）符合WHOWHOWHOWHO阳性判定标准，即出现至少阳性判定标准，即出现至少阳性判定标准，即出现至少阳性判定标准，即出现至少2 2 2 2条条条条envenvenvenv带（带（带（带（gp36gp36gp36gp36和和和和gp140/gp105gp140/gp105gp140/gp105gp140/gp105）。）。）。）。（2 2 2 2）符合试剂盒提供的阳性判定标准。）符合试剂盒提供的阳性判定标准。）符合试剂盒提供的阳性判定标准。）符合试剂盒提供的阳性判定标准。&HIV HIV HIV HIV抗体阴性（抗体阴性（抗体阴性（抗体阴性（-）无无无无HIVHIVHIVHIV抗体特异带出现。抗体特异带出现。抗体特异带出现。抗体特异带出现。&HIV HIV HIV HIV抗体不确定（抗体不确定（抗体不确定（抗体不确定（）出现出现出现出现HIVHIVHIVHIV抗体特异带，但不足以判定阳性。抗体特异带，但不足以判定阳性。抗体特异带，但不足以判定阳性。抗体特异带，但不足以判定阳性。HIV-1 HIV-1抗体特异带包括：抗体特异带包括：envenv带带 gp160/gp120gp160/gp120、gp41gp41；gaggag带带 p55p55、p24p24、p17p17（或（或p18p18）；）；polpol带带 p66p66（或（或p65p65）、）、p51p51、p31p31。HIV-2 HIV-2抗体特异条带包括：抗体特异条带包括：envenv带带 gp140/gp105gp140/gp105、gp36gp36；gaggag带带 p56p56、p26p26、p16p16；polpol带带 p68p68、p53p53、p34p34。（由于使用的毒株不同，（由于使用的毒株不同，HIV-2 envHIV-2 env带也带也可为可为gp125/gp80gp125/gp80、gp36gp36）。）。HIVHIV抗体确认试验结果报告抗体确认试验结果报告 确认试验由确认实验室根据检测结果出具确认试验由确认实验室根据检测结果出具确认试验由确认实验室根据检测结果出具确认试验由确认实验室根据检测结果出具“HIVHIVHIVHIV抗抗抗抗体确认检测报告单体确认检测报告单体确认检测报告单体确认检测报告单”（附表（附表（附表（附表3 3 3 3），报告），报告），报告），报告HIVHIVHIVHIV抗体阳性抗体阳性抗体阳性抗体阳性（+）、）、）、）、HIVHIVHIVHIV抗体阴性（抗体阴性（抗体阴性（抗体阴性（-）及）及）及）及HIVHIVHIVHIV抗体不确定（抗体不确定（抗体不确定（抗体不确定（）。）。）。）。符合符合符合符合HIV-1HIV-1HIV-1HIV-1抗体阳性判断标准，报告抗体阳性判断标准，报告抗体阳性判断标准，报告抗体阳性判断标准，报告“HIV-1HIV-1HIV-1HIV-1抗体抗体抗体抗体阳性（阳性（阳性（阳性（+）”，并按规定做好检测后咨询、保密和疫，并按规定做好检测后咨询、保密和疫，并按规定做好检测后咨询、保密和疫，并按规定做好检测后咨询、保密和疫情报告工作。情报告工作。情报告工作。情报告工作。符合符合符合符合HIVHIVHIVHIV抗体阴性判断标准，报告抗体阴性判断标准，报告抗体阴性判断标准，报告抗体阴性判断标准，报告“HIVHIVHIVHIV抗体阴性抗体阴性抗体阴性抗体阴性（-）”。如果近期有高危行为，如性乱、注射毒品。如果近期有高危行为，如性乱、注射毒品。如果近期有高危行为，如性乱、注射毒品。如果近期有高危行为，如性乱、注射毒品等，或有急性流感样症状等情况，为排除因等，或有急性流感样症状等情况，为排除因等，或有急性流感样症状等情况，为排除因等，或有急性流感样症状等情况，为排除因“窗口期窗口期窗口期窗口期”而出现的假阴性结果，建议高危行为后而出现的假阴性结果，建议高危行为后而出现的假阴性结果，建议高危行为后而出现的假阴性结果，建议高危行为后3 3 3 3个月时再个月时再个月时再个月时再做抗体检测。也可进行做抗体检测。也可进行做抗体检测。也可进行做抗体检测。也可进行HIV-1 P24HIV-1 P24HIV-1 P24HIV-1 P24抗原或抗原或抗原或抗原或HIVHIVHIVHIV核酸检测，核酸检测，核酸检测，核酸检测，作为辅助诊断。作为辅助诊断。作为辅助诊断。作为辅助诊断。符合符合符合符合HIVHIVHIVHIV抗体不确定判断标准，报告抗体不确定判断标准，报告抗体不确定判断标准，报告抗体不确定判断标准，报告“HIVHIVHIVHIV抗体不确抗体不确抗体不确抗体不确定（定（定（定（）”，在备注中应注明，在备注中应注明，在备注中应注明，在备注中应注明“3 3 3 3个月后复检个月后复检个月后复检个月后复检”，同，同，同，同时进行以下处理：时进行以下处理：时进行以下处理：时进行以下处理：(1)(1)(1)(1)随访复检：每随访复检：每随访复检：每随访复检：每3 3 3 3个月随访复检个月随访复检个月随访复检个月随访复检1 1 1 1次，连续次，连续次，连续次，连续2 2 2 2次，次，次，次，共共共共6 6 6 6个月。如果检测时暴露时间已超过个月。如果检测时暴露时间已超过个月。如果检测时暴露时间已超过个月。如果检测时暴露时间已超过3 3 3 3个月，则在个月，则在个月，则在个月，则在3 3 3 3个月后随访个月后随访个月后随访个月后随访1 1 1 1次即可。将前后次即可。将前后次即可。将前后次即可。将前后2 2 2 2份样品同时检测，仍呈份样品同时检测，仍呈份样品同时检测，仍呈份样品同时检测，仍呈不确定或阴性则报告不确定或阴性则报告不确定或阴性则报告不确定或阴性则报告HIVHIVHIVHIV抗体阴性，如果在随访期间抗体阴性，如果在随访期间抗体阴性，如果在随访期间抗体阴性，如果在随访期间发生带型进展，符合发生带型进展，符合发生带型进展，符合发生带型进展，符合HIVHIVHIVHIV抗体阳性判定标准则报告抗体阳性判定标准则报告抗体阳性判定标准则报告抗体阳性判定标准则报告HIV-1HIV-1HIV-1HIV-1或或或或HIV-2HIV-2HIV-2HIV-2抗体阳性。抗体阳性。抗体阳性。抗体阳性。(2)(2)(2)(2)必要时可做必要时可做必要时可做必要时可做HIV-1 P24HIV-1 P24HIV-1 P24HIV-1 P24抗原或抗原或抗原或抗原或HIVHIVHIVHIV核酸测定，但核酸测定，但核酸测定，但核酸测定，但检测结果只能作为辅助诊断依据，确认报告要依据血检测结果只能作为辅助诊断依据，确认报告要依据血检测结果只能作为辅助诊断依据，确认报告要依据血检测结果只能作为辅助诊断依据，确认报告要依据血清学随访结果。清学随访结果。清学随访结果。清学随访结果。发出确认报告的同时要做好检测后咨询。发出确认报告的同时要做好检测后咨询。发出确认报告的同时要做好检测后咨询。发出确认报告的同时要做好检测后咨询。HIVHIVHIVHIV抗体确认报告由抗体确认报告由抗体确认报告由抗体确认报告由1 1 1 1名具有高级卫生技术职称名具有高级卫生技术职称名具有高级卫生技术职称名具有高级卫生技术职称的人员复核签字，按原送检程序反馈。如确认对象的人员复核签字，按原送检程序反馈。如确认对象的人员复核签字，按原送检程序反馈。如确认对象的人员复核签字，按原送检程序反馈。如确认对象户口不属于本辖区，确认报告应同时抄送户口不属于本辖区，确认报告应同时抄送户口不属于本辖区，确认报告应同时抄送户口不属于本辖区，确认报告应同时抄送HIVHIVHIVHIV感染者感染者感染者感染者户口所在地的省艾滋病确认中心实验室。其它系统户口所在地的省艾滋病确认中心实验室。其它系统户口所在地的省艾滋病确认中心实验室。其它系统户口所在地的省艾滋病确认中心实验室。其它系统确认的地方人员（包括本地和外地），也应及时向确认的地方人员（包括本地和外地），也应及时向确认的地方人员（包括本地和外地），也应及时向确认的地方人员（包括本地和外地），也应及时向当地卫生行政部门和省艾滋病确认中心实验室报告。当地卫生行政部门和省艾滋病确认中心实验室报告。当地卫生行政部门和省艾滋病确认中心实验室报告。当地卫生行政部门和省艾滋病确认中心实验室报告。省艾滋病确认中心实验室难以确认的样品，送省艾滋病确认中心实验室难以确认的样品，送省艾滋病确认中心实验室难以确认的样品，送省艾滋病确认中心实验室难以确认的样品，送国家艾滋病参比实验室确认。同一受检对象的样品国家艾滋病参比实验室确认。同一受检对象的样品国家艾滋病参比实验室确认。同一受检对象的样品国家艾滋病参比实验室确认。同一受检对象的样品在不同实验室得到不一致的确认结果时，由国家艾在不同实验室得到不一致的确认结果时，由国家艾在不同实验室得到不一致的确认结果时，由国家艾在不同实验室得到不一致的确认结果时，由国家艾滋病参比实验室和艾滋病确认实验室审评及技术指滋病参比实验室和艾滋病确认实验室审评及技术指滋病参比实验室和艾滋病确认实验室审评及技术指滋病参比实验室和艾滋病确认实验室审评及技术指导专家组予以仲裁。导专家组予以仲裁。导专家组予以仲裁。导专家组予以仲裁。HIV检测的规范操作要求检测的规范操作要求 HIV检测不同于其他病原微生物检测，要求十分严格，任何错误的诊断，包括假阳性或假阴性，都会对被检者产生十分重要的影响。因此，HIV检测，必须严格按照国家制定的检测工作规范进行，整个实验过程应有严格的质量保证体系。HIV抗体检测的规范操作要求标本的采集标本的采集 血清样品的采集 用注射器抽出一定量静脉血，室温下自然放置12小时，待血液凝固后再用3000rpm离心15分钟，吸出血清备用。抗凝血标本的采集 用加抗凝剂的真空采血管或用消毒注射器抽取静脉血，转移至加有抗凝剂的试管，反复轻摇，分离血浆和血细胞。根据实验要求选用适当的抗凝剂（常用EDTA），如需进行病毒RNA测定，应在48小时以内分离标本。应按临床采血技术规范要求，做好个人防护。HIV抗体检测的规范操作要求样品的保存样品的保存 用于抗体检测的血清或血浆样品应存放于用于抗体检测的血清或血浆样品应存放于2020以下，短期（以下，短期（1 1周）内进行检测的样品周）内进行检测的样品可存放于可存放于2-8 2-8。用于抗原和核酸检测的血浆和血细胞样品，用于抗原和核酸检测的血浆和血细胞样品，应冻存于应冻存于2020以下，长期保存（以下，长期保存（3 3个月以上）个月以上）应置于应置于7070。用于病毒载量测定的血浆标。用于病毒载量测定的血浆标本应于采血后本应于采血后4-84-8小时内置于小时内置于7070保存。保存。HIV抗体检测的规范操作要求样品的运送 实验室间传递的样品应为血清或血浆。除特实验室间传递的样品应为血清或血浆。除特殊需要外，不能用全血。殊需要外，不能用全血。管壁上有明显的标记（编号或姓名），并附管壁上有明显的标记（编号或姓名），并附有阳性送检单。送检单应与标本分开，不能混放。有阳性送检单。送检单应与标本分开，不能混放。标本应