LC-IT-TOF及其应用 中国药科大学.pdf

LC-IT-TOF及其应用及其应用中国药科大学中国药科大学中国药科大学中国药科大学盛龙生盛龙生南京 童家巷24号 210009南京 童家巷24号 210009Shgl hhShgl hhShShenengl gls shhyayah 主要内容主要内容主要内容主要内容?仪器的设计理念 离子阱与飞行时间质谱仪的杂交仪的杂交?LC-IT-TOF的结构和性能特点?应用领域代学究平?代谢组学研究平台仪器设计的理念仪器设计的理念仪仪器器设计理念设计理念仪仪器器设计理念设计理念?Time of Flight analyzer?Quadrupole ion trap?High mass accuracy?High resolution?MSncapability?High resolution g?High sensitivitygprecursor isolation LCLC-ITIT-TOFMSTOFMS常规离子阱常规离子阱常规离子阱常规离子阱三维（3D）四极离子阱截面图维四极离子阱截面图离子的冷却离子的冷却离子的冷却离子的冷却?在离子阱的缓冲气作用下，离子经碰撞丢失动能，聚焦在离子阱的中心，这个过程称ion colling?此时，离子的动能约0.1 eV，运动范围小于1 mm三维四极离子阱稳定图及扫描方式三维四极离子阱稳定图及扫描方式4eV220=mrqz=z/2共振激发共振激发共振激发共振激发?在特定离子的轴向特征频率下，在端蓋上，加以几百mV的辅助振荡电位，使该特定离子振荡，离开离子阱中称离子被阱电场进步加速达中心，称 tickling，离子被阱电场进一步加速，可达几十 eV的动能，用于：?扩大离子阱量程?除去不需要的离子，如选择前体离子等?除去不需要的离子，如选择前体离子等?增加离子动能，即活化前体离子，进行CID=z/2zIT-TOFMS中的离子阱中的离子阱OS中的离子阱中的离子阱存由离输的离?贮存由离子源输入的离子?聚焦离子阱中的离子，输入TOF进行质量分析?选择和活化前体离子，经CID，生成产物离子，输入TOF进行质量分析（MSn）TOF进行质量分析（MS）飞行时间质谱仪飞行时间质谱仪飞行时间质谱仪飞行时间质谱仪LzeVmLTOF212=?离子经推斥电压脉冲推入飞行管，理论上，如漂移区长度离子经推斥电压脉冲推入飞行管，理论上，如漂移区长度离子经推斥电压脉冲推入飞行管，理论上，如漂移区长度离子经推斥电压脉冲推入飞行管，理论上，如漂移区长度L L和和加速电压加速电压和和加速电压加速电压V V已知，测定离子的飞行时间可计算其质荷（已知，测定离子的飞行时间可计算其质荷（已知，测定离子的飞行时间可计算其质荷（已知，测定离子的飞行时间可计算其质荷（m/zm/z）。）。）。）。?实际上，和其它仪器相似，用标准物质用经验公式校正质量坐实际上，和其它仪器相似，用标准物质用经验公式校正质量坐标：标：实际上，和其它仪器相似，用标准物质用经验公式校正质量坐实际上，和其它仪器相似，用标准物质用经验公式校正质量坐标：标：m/z=atm/z=at2 2+b+b，用标标准物质产生的已知用标标准物质产生的已知，用标标准物质产生的已知用标标准物质产生的已知m/zm/z离子确定式中离子确定式中离子确定式中离子确定式中的的的的a,ba,b。仪与扫描质谱仪不它平行记录所TOF仪器与扫描质谱仪不同，它平行记录所有离子，所以其有效周期（duty cycle）较扫描仪大得多但是是以脉冲方式作仪器大得多，但是，TOF MS是以脉冲方式工作的，所以，连续离子源，如ESI产生的连续离子高有流需经调制器用高频脉冲电压引出，故有效周期降低。这是因为为了避免质谱重叠，下一推斥脉冲只有在最慢的离子到达检测器后才能开始冲只有在最慢的离子到达检测器后才能开始。TOFMS是最快的质量分析器。oa-ESI-TOFoa ESI TOF温度对温度对TOF MS准确质量测定的影响准确质量测定的影响测定质量的漂移常常是由于温度改变造成的温度对温度对TOF MS准确质量测定的影响准确质量测定的影响TOF MS测定质量的漂移常常是由于温度改变造成的，因为电源输出和飞行管的长度与温度相关。一般温度改变1 C电源变化约25 ppm而不锈钢的温度系数是18 ppm/C，电源变化约25 ppm，而不锈钢的温度系数是18 ppm/C。所以，测定待测物质的准确质量宜用内标，或者用双ESI喷口，将样品和校正物质分别喷入离子源，以免将样品喷将样品和校物质分别喷离子源以免将样品和内标加在一起，导致可能的相互抑制。现在，有采用低膨胀系数合金制成飞行管道的仪器问世，或采取将高压电源及飞行管道恒温等措施，减少了环境温度的影响，稳定仪器的质量坐标。准确质量测定的意义准确质量测定的意义准确质量测定的意义准确质量测定的意义测定待测物质的元素组成测定待测物质的元素组成（分子式分子式）测定待测物质的元素组成测定待测物质的元素组成（分子式分子式）测定待测物质的元素组成测定待测物质的元素组成（分子式分子式）测定待测物质的元素组成测定待测物质的元素组成（分子式分子式）利血平利血平(C H N O)的质子加合阳离子的准确质量的质子加合阳离子的准确质量609 28066利血平利血平(C33H40N2O9)的质子加合阳离子的准确质量的质子加合阳离子的准确质量：609.28066u质量测定误差质量测定误差 0.1u，则相对误差为，则相对误差为165 ppm以以 C H ON计算可能的分子式计算可能的分子式：以以 C,H,O,N计算可能的分子式计算可能的分子式：相对误差相对误差(ppm)质量测定误差质量测定误差(u)可能分子式的数目可能分子式的数目相对误差相对误差(ppm)质量测定误差质量测定误差(u)可能分子式的数目可能分子式的数目1650.1209100.0611350.030730.0018420 00122准确质量测定增加了分子式确定的可信度准确质量测定增加了分子式确定的可信度准确质量测定增加了分子式确定的可信度准确质量测定增加了分子式确定的可信度20.00122准确质量测定增加了分子式确定的可信度准确质量测定增加了分子式确定的可信度准确质量测定增加了分子式确定的可信度准确质量测定增加了分子式确定的可信度TOFMS数据采集数据采集TOFMS数据采集数据采集?TDC（时间数字转换）（时间数字转换）:?记录离子到达的时间记录离子到达的时间?记录离子到达的时间记录离子到达的时间如如2个或多个离子同时到达检测器，个或多个离子同时到达检测器，TDC只记录只记录1个离子；如个离子；如2个离子先后到达检测器，但相差个离子先后到达检测器，但相差5ns，TDC只记录先到的离子（饱和现只记录先到的离子（饱和现象象死时间问题死时间问题）因此因此记录所得的质谱峰的记录所得的质谱峰的/值和強度均低值和強度均低象象，死时间问题死时间问题），因此因此，记录所得的质谱峰的记录所得的质谱峰的m/z值和強度均低值和強度均低于实际值，需用数学方法校正于实际值，需用数学方法校正?较好的质谱峰形和信噪比较好的质谱峰形和信噪比?动力学范围较窄，可用适当的技术扩展动力学范围较窄，可用适当的技术扩展?ADC:?ADC:?峰形和信噪比不如峰形和信噪比不如TDC?通常能记录离子的全部信号通常能记录离子的全部信号?具有较宽的动力学范围具有较宽的动力学范围LC-IT-TOFLC-IT-TOF的结构的结构、性能特点性能特点的结构的结构、性能特点性能特点ESI-IT-TOF结构示意图结构示意图八极杆八极杆ESI源源Q-阵列阵列八极杆八极杆二级反射器二级反射器ESI源源TOF飞行管飞行管离子阱离子阱ESI-IT-TOF的离子通路CDLDQarrayDual Stage ReflectronyOctopole lensQITSprayerLensMCPThermostatic FLTSkimmer离子的导离子的导入入离子的导离子的导?ESI产生的离子通常以连续离子流的方式导入常规离子阱。取决于加在ESI产生的离子通常以连续离子流的方式导入常规离子阱。取决于加在环电极上的射频环电极上的射频（RFRF）的电压及频率的电压及频率，被离子阱捕获的离子是有限的被离子阱捕获的离子是有限的。环电极上的射频环电极上的射频（RFRF）的电压及频率的电压及频率，被离子阱捕获的离子是有限的被离子阱捕获的离子是有限的。?IT-TOF在其用于离子传输的八极的末端涂了电阻材料，从而形成一电位梯度，与其邻近电极的电压配合，将ESI连续离子流转变为脉冲离子IT-TOF在其用于离子传输的八极的末端涂了电阻材料，从而形成一电位梯度，与其邻近电极的电压配合，将ESI连续离子流转变为脉冲离子流流流流。Entrance Endcap Ring Electrode Exit Endcap OctopoleConductiveResistiveConductiveResistiveQ-array ion guideDifferentially pumped quadrupole ion trap离子导入离子导入-skimmer open,lens close-ions enter the octopole for a user-defined time(accumulation time)VLens 1(+60 V)Skimmer(+8 V)OpenLens 1Skimmer离子导入离子导入 聚焦聚焦-ions in the octopole are focussed at the exit end in a potential wellVLens 1(+60 V)Skimmer(-30 V)ClosedLens 1Skimmer离子导入离子导入 lens 1 open-the focussed packet of ions is rapidly pulsed into the ion trapVLens 1(-80 V)Skimmer(-30 V)ClosedSkimmerLens 1离子的捕获离子的捕获octopole-V0 V0 VLens 1Ion trap离子的捕获离子的捕获octopole-V0 V0 VLens 1Ion trap离子的捕获离子的捕获octopole-V0 V0 VLens 1Ion trap离子的捕获离子的捕获octopole0 V0 VLens 1Ion trapTOF 分析分析+kV-kV0 VDetectorReflectronRing electrode set to 0V and rapid application of high voltages to endcapsTOF 分析分析+kV-kV0 VDetectorReflectron?Ring electrode set to 0V and rapid application of high voltages to endcaps?All ions are extracted simultaneously into the TOF mass analyser(no scanning)TOF 分析分析+kV-kV0 VDetectorReflectronf?Ring electrode set to 0V and rapid application of high voltages to endcaps?All ions are extracted simultaneously into the TOF mass analyser(no scanning)scanning)TOF 分析分析+kV-kV0 VReflectronf?Ring electrode set to 0V and rapid application of high voltages to endcaps?All ions are extracted simultaneously into the TOF mass analyser(no scanning)scanning)离子的冷却离子的冷却常规离子阱用常规离子阱用He(氦气氦气)冷却离子冷却离子此处离子用此处离子用Ar(氩气氩气)冷却冷却能得到更好的分辨率能得到更好的分辨率此处离子用此处离子用Ar(氩气氩气)冷却冷却，能得到更好的分辨率能得到更好的分辨率Inten.(x100,000)Inten.(x100,000)Inten.(x100,000)Inten.(x100,000)1.11.21.31.41.51.61.7(b)1.11.21.31.41.51.61.7(b)Ar cooling1.501.752.00(a)1.501.752.00(a)He cooling0 30.40.50.60.70.80.91.00 30.40.50.60.70.80.91.00.500.751.001.250.500.751.001.25954.500 954.750 955.000 955.250 955.500 955.750 956.000 956.250 956.500 956.750 957.000 957.250 957.500 957.750 958.000 958.250 958.500 958.750m/z0.00.10.20.3954.500 954.750 955.000 955.250 955.500 955.750 956.000 956.250 956.500 956.750 957.000 957.250 957.500 957.750 958.000 958.250 958.500 958.750m/z0.00.10.20.3954.750 955.000 955.250 955.500 955.750 956.000 956.250 956.500 956.750 957.000 957.250 957.500 957.750 958.000 958.250 958.500 958.750m/z0.000.25954.750 955.000 955.250 955.500 955.750 956.000 956.250 956.500 956.750 957.000 957.250 957.500 957.750 958.000 958.250 958.500 958.750m/z0.000.25牛胰岛素牛胰岛素(m/z 956;M+6H6+)牛胰岛素牛胰岛素(m/z 956;M+6H6+)牛胰岛素(Mw5733u)的质谱牛胰岛素(Mw5733u)的质谱2.93.0Inten.(x100,000)956.60362.32.42.52.62.72.8956.7720-5 3036-6.5ppm956.4352-7.8ppm1.81.92.02.12.22.35.3ppm956.2711-4.5ppm956.9392-5.3ppm1.31.41.51.61.7956.1957.1028-7.9ppmFWHM:0.08 uRl ti12 0000.80.91.01.11.2040-4.3ppmm957.2682-9.9ppmResolution:12,0000.30.40.50.60.7955.9421+2.5p957.4355-9.9ppm957.5969-955.250955.500955.750956.000956.250956.500956.750957.000957.250957.500957.750958.000958.250m/z0.00.10.2pm1 6 ppm1 Mass脉冲Ar CID?The LC-IT-TOFMS system is equipped with a pulse gas valve,which injects a short pulse of Argon immediately prior to the CID waveform being appliedshort pulse of Argon immediately prior to the CID waveform being applied.?The pulsed Argon works as to prevent the parent ions from being lost before fragmentation takes place.With pulsed ArWithout pulsed ArWith pulsed ArWithout pulsed ArI titi tift i(/1110)ddt i(/838)f N TFAIntensity variation of parent ion(m/z1110)and product ion(m/z 838)of NaTFA严格的温控以保证质量测定的稳定性严格的温控以保证质量测定的稳定性严格的温控以保证质量测定的稳定性严格的温控以保证质量测定的稳定性Flight Tube(Representative Point of Temperature)High oltage s itch(Ion Trap EC Ring)High voltage switch(Ion Trap EC,Ring)High voltage P/S(Ion Trap,Flight Tube,Reflectron)RF oscillator(Ion Trap)Ctl RPTt 40+/0 3 dControl RPT at 40+/-0.3 deg.TOF MS准确质量测定的实现准确质量测定的实现TOF MS准确质量测定的实现准确质量测定的实现?足够的质量分辨率，分离名义质量相同而准确质量不同足够的质量分辨率，分离名义质量相同而准确质量不同的离子的离子的离子的离子?稳定的质量坐标，测定质量的漂移常常是由于温度改变稳定的质量坐标，测定质量的漂移常常是由于温度改变造成的造成的因为电源输出和飞行管的长度与温度相关因为电源输出和飞行管的长度与温度相关所所造成的造成的，因为电源输出和飞行管的长度与温度相关因为电源输出和飞行管的长度与温度相关。所所以，仪器高压电源及飞行管应控温，必要时要采用内标以，仪器高压电源及飞行管应控温，必要时要采用内标适当的信号強度适当的信号強度太強会使质谱检测器饱和太強会使质谱检测器饱和太弱统计太弱统计?适当的信号強度适当的信号強度，太強会使质谱检测器饱和太強会使质谱检测器饱和，太弱统计太弱统计数字不足，还会受背景干扰数字不足，还会受背景干扰对样品进行适当的预处理对样品进行适当的预处理尤其是具复杂基质的样品尤其是具复杂基质的样品?对样品进行适当的预处理对样品进行适当的预处理，尤其是具复杂基质的样品尤其是具复杂基质的样品，并使用高分辨色谱仪将干扰物和待测成分分离，并使用高分辨色谱仪将干扰物和待测成分分离性能指标性能指标性能指标性能指标?M?Mass rangeMS:m/z 50-5000MSn:m/z 50-3000?MSncapacity:n=10?MS capacity:n 10?Resolution:O10000/1000Over 10000m/z1000?Mass accuracy:error 5 ppm?Polarity switching rate:100 ms?Measurement speed:10 spec/sec?Measurement speed:10 spec/sec质谱信息及解析质谱信息及解析质谱信息及解析质谱信息及解析（一）质谱提供的信息一）质谱提供的信息1.1.分子量信息单同位素分子量由分子中各元素中丰度最高的同位素的（相对）原子量计算所得。2.元素组成如果离子质量测定的准确度足够高，则可以得到该离子确定的元素组成。同位素丰度3.3.同位素丰度由于元素的同位素的存在，所以质谱峰呈现为同位素峰簇，是各种元素及其同位素组成的表现，他们提供了另一重要性息现，他们提供了另重要性息4.4.不饱和度如果分子或碎片的元素组成己知，可计算其不饱和度，包括环、双健和叁键，故又称双键相等数（double bond equivalents,DBE）。5.“氮规律”含奇数氮的离子，如为奇电子离子，其质量应为奇数，如为偶电子离子，其质量应为偶数。（二）质谱解析（二）质谱解析-基本的偶电子离子裂解反应单键裂解伴随电荷的迁移单键裂解伴随电荷的迁移CH3-CH2-OH2+CH3-CH2+H2O键的裂解伴随环化及电荷的迁移键的裂解伴随环化及电荷的迁移环状离子断裂两个键，电荷保留两个键的断裂，伴随着重排酯经过类似的反应生成相当于质子化酸的碎片离子如烷链较长，通过六元环的位氢重排为优势过程，这是发生在偶电子离子上的McLafferty重排LC-IT-TOFMS的应用领域的应用领域LC IT TOFMS的应用领域的应用领域LCMS-IT-TOF的应用领域的应用领域LCMS IT TOF的应用领域的应用领域具色谱在线分离及准确质量测定功能是成?LC-IT-TOFMS具色谱在线分离，MSn及准确质量测定功能是成份分析的强有力的武器应用范围十分广泛，如：药物?药物?毒物农药?农药?食品（功能成份，有害成份）化学化工?化学、化工?生命科学境?环境?其它合成药物结构鉴定及杂质分析合成药物结构鉴定及杂质分析合成药物结构鉴定及杂质分析合成药物结构鉴定及杂质分析?纯度较高的化合物可制成一定浓度的溶液后直接?纯度较高的化合物可制成定浓度的溶液后直接进样分析（输注或流动进样，LC/MS，LC/MSn）杂质分析通常用LC/MS 方法?杂质分析通常用LC/MSn方法。缬沙坦的结构确证缬沙坦的结构确证缬沙坦的结构确证缬沙坦的结构确证ONCH3CH3OH3CCOOHCH3NNNNHValsartan缬沙坦的正离子质谱缬沙坦的正离子质谱缬沙坦的负离子质谱测定值对计算值的误差为310-6缬沙坦的MS2谱缬沙坦的MS2谱选择m/z434为前体离子进行MS2分析，产物离子m/z为350.1636，经计算其元素组成为C19H20N5O2。以m/z350为前体离子进行MS3分析，得m/z250.1065离子和m/z116.0518离子，经计算其元素组成分别为C14H12N5和C5H10NO2。子，经计算其元素组成分别为C14H12N5和C5H10NO2。推定的裂解反应为：推定的裂解反应为：NCH3OH3CHHCH3HNCOOHCH3NN-C5H8OHNCOOHCH3NNNNHm/z 434 2215NNNNHm/z 434.2215m/z 350.1636CHCOOHHNH2HH2NCH3CH3m/z 116.0518NNNNH Hm/z 250.1065抗生素的分析抗生素的分析抗生素的分析抗生素的分析生?半合成抗生素常常不纯，需用LC/MS，LC/MSn进行主成份及杂质分析。行成份杂质分析?发酵得到的抗生素，含多种活性成份及杂质，常用LC/MSLC/MSn进行成份及杂质分析常用LC/MS，LC/MSn进行成份及杂质分析。头孢唑林钠头孢唑林钠NaOONNNSSOONNNCH3SNHHNNH头孢唑林钠的一级、二级和三级质谱头孢唑林钠的一级、二级和三级质谱4.05.0Inten.(x1,000,000)455.0369477.01811.02.03.0323.0537369.1966250300350400450500m/z0.03699667.5Inten.(x100,000)2.55.0323.0529175.0200.0225.0250.0275.0300.0325.0350.0375.0400.0m/z0.0252.04181.25Inten.(x100,000)0.500.751.00156.0107100150200250300m/z0.000.25肽和蛋白质的分子量及氨基酸序列分析肽和蛋白质的分子量及氨基酸序列分析肽和蛋白质的分子量及氨基酸序列分析肽和蛋白质的分子量及氨基酸序列分析寡肽氨酸序析含酸?寡肽的分子量和氨基酸序列分析可用含0.1%甲酸的乙腈/水溶液直接进样分析。腈 水溶液接样分析?蛋白质的分子量测定也直接进样分析。如为样品不纯用LC/MS分析不纯，用LC/MS分析。?蛋白质的氨基酸序列分析（一级结构），酶解后，用LC/MSn分析。Leu-Pro-Asn-Ile-Thr-Ile-Leu-Ala-Thr-Gly-Gly-Thr-Ile-Ala-Gly-Gly-Thr-Ile-Ala-Gly-GlT重组重组L-天门冬酰胺酶的一级结构天门冬酰胺酶的一级结构T1y-Gly-Asp-Ser-Ala-Thr-Lys-Ser-Asn-Tyr-Thr-Val-Gly-Lys-Val-Gly-Val-Glu-Asn-Leu-Val-T2T3Asn-Ala-Val-Pro-Gln-Leu-Lys-Asp-Ile-Ala-Asn-Val-Lys-Gly-Glu-Gln-Val-Val-Asn-Ile-GlyT4T5-Ser-Gln-Asp-Met-Asn-Asp-Asn-Val-Trp-Leu-Thr-Leu-Ala-Lys-Lys-Ile-Asn-Thr-Asp-Cys-T6T7Asp-Lys-Thr-Asp-Gly-Phe-Val-Ile-Thr-His-Gly-Thr-Asp-Thr-Met-Glu-Glu-Thr-Ala-Tyr-PheT8-Leu-Asp-Leu-Thr-Val-Lys-Cys-Asp-Lys-Pro-Val-Val-Met-Val-Gly-Ala-Met-Arg-Pro-Ser-Leu Asp Leu Thr Val Lys Cys Asp Lys Pro Val Val Met Val Gly Ala Met Arg Pro SerT9T10T11Thr-Ser-Met-Ser-Ala-Asp-Gly-Pro-Phe-Asn-Leu-Tyr-Asn-Ala-Val-Val-Thr-Ala-Ala-Asp-Lys-Ala-Ser-Ala-Asn-Arg-Gly-Val-Leu-Val-Val-Met-Asn-Asp-Thr-Val-Leu-Asp-Gly-Arg-Asp-TTTT12T13T14Val-Thr-Lys-Thr-Asn-Thr-Thr-Asp-Val-Ala-Thr-Phe-Lys-Ser-Val-Asn-Tyr-Gly-Pro-Leu-GlyT15T16-Tyr-Ile-His-Asn-Gly-Lys-Ile-Asp-Tyr-Gln-Arg-Thr-Pro-Ala-Arg-Lys-His-Thr-Ser-Asp-T17T18T19Thr-Pro-Phe-Asp-Val-Ser-Lys-Leu-Asn-Glu-Leu-Pro-Lys-Val-Gly-Ile-Val-Tyr-Asn-Tyr-AlT20T21T22a-Asn-Ala-Ser-Asp-Leu-Pro-Ala-Ala-Lys-Ala-Leu-Val-Asp-Ala-Gly-Tyr-Asp-Gly-Ile-Val-T23Ser-Ala-Gly-Val-Gly-Asn-Gly-Asn-Leu-Tyr-Lys-Ser-Val-Phe-Asp-Thr-Leu-Ala-Thr-Ala-AlyyyyypT24a-Lys-Thr-Gly-Thr-Ala-Val-Val-Arg-Ser-Ser-Arg-Val-Pro-Thr-Gly-Ala-Thr-Thr-Gln-AspT25T26T27-Ala-Glu-Val-Asp-Asp-Ala-Lys-Tyr-Gly-Phe-Val-Ala-Ser-Gly-Thr-Leu-Asn-Pro-Gln-Lys-T T28Ala-Arg-Val-Leu-Leu-Gln-Leu-Ala-Thr-Gln-Thr-Lys-Asp-Pro-Gln-Gln-Ile-Gln-Gln-Ile-PheT29T30T31-Asn-Gln-Tyr-分子量测定分子量测定分子量测定分子量测定质量肽图谱测定（胰蛋白酶解）质量肽图谱测定（胰蛋白酶解）重组重组L-天门冬酰胺酶的序列分析天门冬酰胺酶的序列分析rHuEPO的一级结构的一级结构rHuEPO的的Glu-C酶解溶液的肽图谱酶解溶液的肽图谱83位点的氮连接寡糖肽段的位点的氮连接寡糖肽段的LC/ESI MSLC/ESI MSrHuEPO寡糖苷的（负离子）寡糖苷的（负离子）MALDITOFMS中药分析中药分析中药分析中药分析?中药是个复杂体系需用LC/MSn分析?中药是个复杂体系，需用LC/MSn分析。白首乌中白首乌中C21甾体皂苷甾体皂苷白首乌中白首乌中C21甾体皂苷甾体皂苷Pg-2和和Pg5的的IT-TOFMSg和和 g 的的Pg-2的的MSnPg-2的一级质谱中m/z 1413.7078 为基峰。在二级质谱中可以观察到母离子(m/z 1413.7078)CID裂解后的产物离子/1285 6260(N)1123 5628(Y)961 5152(Y)817 4336(Y)CID裂解后的产物离子m/z 1285.6260(N)、1123.5628(Y5)、961.5152(Y4)、817.4336(Y3)，其中N离子丰度最强。以Y5为母离子产生了C、B、A三个系列的碎片离子。Pg-5的的MSnPg-5的一级质谱中m/z 1531.7479 为基峰。在二级质谱中可以观察到母离子(m/z 1531.7479)CID裂解后产生子离子O(m/z 1383.6976)。母离子(m/z 1531.7479)与O离子之间相差148 Da，说明母离子失去了一分子cinnamic acid以O为母离子产生了YBA三个系列的碎片离子离子失去了分子cinnamic acid。以O为母离子产生了Y、B、A三个系列的碎片离子。Na+OOOHOHOHO Na+OOHOH3COCH3OOH3COCH3OOHOHOOHOHOH3COOCH3OOCH3OCH3OHOOOHOHOHOm/z=1413.7078OOHOHOH3COCH3OOH3COCH3OOHOHOOHOHOH3COOOOCH3OCH3OHOOOHOH-ikemamic acidN m/z=1285.62603CH3OC3 Na+OHOHOOOH3COCH3OOH3COCH3OOH3COOCHOOCH3OCH3OHOHOOHOH Na+-Glc-(aglycone+Glc)OOHOH3COCH3OOH3COCH3OOH3COOCH3OOCH3OCH3OHOHOOHOH Na+O3CH33Y5 m/z=1123.5728C6-B1 m/z=779.3250 Na+-Cym0,1A5-B1=605.24242,4A5-B1=549.2230OOHOHOHOH3COCHOOH3COHOOO-GlcY4m/z=961.5012OOH3COCH3OOH3COOCH3OOCH3OCH3OHOHOOHOHC5-B1 m/z=635.2537B5-B1 m/z=617.240451 Na+-GlcOCH3OCH3OOH3COCH3OCH3OCH3 Na+OHOHO-CymOH Na+-DigB5-B2 m/z=455.2171OOH3COCH3OOH3COHOCH3OOCH3OCH3NaGlcOOHOH3COCH3OOH3COCH3HOOOCH3OCH3Y3 m/z=817.4336C4-B1 m/z=491.1735OOH3COCH3OOH3COOCH3OHOHOOHOHB4-B1 m/z=473.1985 Na+OOOOHOHOHOOH3COOOOm/z=1531.7479OH3COOOOH3COOHOHOOHOHOHOH3COCH3OH3COCH3-cinnamic acidOHOOH3COCH3OCH3OOH Na+OHOHOHOOH3COH3COOHO Na+-Glc-aglyconeO m/z=1383.69762,4A7=951.4056OOH3COHOOH3COOCH3OH3COOCH3OH3COHOOH3COOCH3O3OCH3OOHOHOOHOHOHOH CH CH COH Na+O-CymY6 m/z=1221.6520B6 m/z=891.3815-(Dit+Cym)OOHOHOH3COHOCH3OH3COOCH3OH3COHOOH3COOCH3OH3COCH3O Na+OHOOH3COHOOH3COOCH3OH3COOCH3OH3COHOOH3COOCH3OH3COCH3OOHOHOOHOH3COHOOOOH3COOH3COHOOH Na+Y5 m/z=1077.5660OOHOHOH3COHOOH3COOCH3OH3COHOOH3COOCH3OH3COCH3HO Na+OHOOB5 m/z=747.3019OH3COOCH3O3OHOOH3COOCH3OOCH3OOHOHOOH-GlcO Na+OH3COHOCH3OH3COOCHOH3COHOOH3COOCH3OH3COCH3O-CymY4 m/z=933.4818-DitOOHOHOHOH3COHOOH3COOCH3OH3COHOOH3COHOCH3 Na+OHOB6-B1 m/z=729.33293CH3CH3OB4 m/z=617.2436OH3COOCH3OH3COOCH3OH3COCH3OOHOHOOHOH Na+-Glc Na+Y3 m/z=789.4032OOHOHOHOH3COHOOH3COOCH3OH3COHHO-Cym Na+OOB5-B1 m/z=585.2541OH3COHOCH3OH3COHOOH3COOCH3OH3COCH3O-DitOOH COOOH3COOHOHOOHOH Na+-CymY2 m/z=659.3424OOHOHOHOH3COHOOH3COHOCH3-DitB3 m/z=473.1986H3COCH3OCH3OHOB5-B2 m/z=441.1704OH3COHOOH3COOCH3OH3COCH3HONa+五味子的多成份同时定性定量分析五味子的多成份同时定性定量分析五味子的多成份同时定性定量分析五味子的多成份同时定性定量分析y=2E+06x+3E+06400000000?用LC-IT-TOFMS分离分析了75个化合物，多数化合物确或用推定yR2=0.9932250000000300000000350000000已确证或用MSn推定?对其中的24个化合物进行了定量100000000150000000200000000定量?线性范围约2.5数量级050000000100000000050100150200250050100150200250四极质谱法与飞行时间质谱法定量分析的比较四极质谱法与飞行时间质谱法定量分析的比较四极质谱法与飞行时间质谱法定量分析的比较四极质谱法与飞行时间质谱法定量分析的比较极质谱法极质谱法行时间质谱法行时间质谱法四四极质谱法极质谱法飞飞行时间质谱法行时间质谱法1 用SIM,SRM等方法采用提取离子流2 随着选择监测的离子种类提取多种离子检测灵敏度的增加检测灵敏度下降不受影响的增加，检测灵敏度下降不受影响3 为提高专属性，需同时记提供待测成分的全谱、准录“定性离子确质量实验式不饱录“定性离子”确质量、实验式、不饱和度、同位素丰度比等信息药物代谢和药物发现研究药物代谢和药物发现研究药物动力学究药效动力学究?药物动力学研究、药效动力学研究?毒代动力学研究?药物代谢物鉴定?药物发现研究?药物发现研究代谢物的鉴定代谢物的鉴定代谢物的鉴定代谢物的鉴定治疗肝炎新药NO.103一级质谱图Inten.(x10,000,000)511.0649治疗肝炎新药.级质谱图0 751.00509.06680.500.750.25505.0507.5510.0512.5515.0517.5m/z0.00513.0631原原原原药药的的的的分子分子式确式确认认认认分子式应为:C21H22N4O3FSBr 代谢物代谢物的一级的一级质谱质谱图图代谢物质谱代谢物质谱1.50Inten.(x1,000,000)483.0317481.03271 001.2550