全自动固相萃取-超高效液相...种大环内酯类抗生素的残留量_侯锦英.pdf

：全自动固相萃取超高效液相色谱串联质谱法同时测定药企周边地表水中种大环内酯类抗生素的残留量侯锦英，孙志洪，卢冠宇（河北省沧州生态环境监测中心，沧州 ；国电联合动力技术有限公司，北京 ）摘要：提出了全自动固相萃取超高效液相色谱串联质谱法（）同时测定药企周边地表水中泰乐菌素、交沙霉素、螺旋霉素、北里霉素和罗红霉素等种大环内酯类抗生素残留的方法。随机采集药企周边地表水样品，冷藏储存；取地表水样品 ，调节酸度为中性，将上述水样以 的流量过已活化的 固相萃取柱，用 丙酮洗脱。收集洗脱液，将洗脱液氮吹至近干，用甲醇溶解并定容至，所得溶液中种大环内酯类抗生素在 色谱柱上分离，以不同体积比的甲醇（体积分数）甲酸溶液的混合液为流动相进行梯度洗脱，质谱分析采用多反应监测模式。结果表明，种大环内酯类抗生素的质量浓度在 内与对应的峰面积呈线性关系，检出限（）为 。按照标准加入法进行回收试验，回收率为 。制备份 加标水样，测定值的相对标准偏差均小于。关键词：全自动固相萃取；超高效液相色谱串联质谱法（）；地表水；大环内酯类抗生素中图分类号：文献标志码：文章编号：（）泰乐菌素、交沙霉素、螺旋霉素、北里霉素和罗红霉素均属于大环内酯类抗生素，主要用于治疗需氧革兰氏阳性球菌和阴性球菌、支原体、衣原体等，在我国抗生素类药品使用和生产中占比较高。在药品生产过程中，一些企业为提高经济效益，偷排漏排三废，污染土壤、空气，土壤和空气中的污染物随着雨水等循环，大部分进入到企业周边地表水或地下水中，经食物链的传递，最终严重影响自然环境和人类健康。因此，对药企周边地表水中泰乐菌素、交沙霉素、螺旋霉素、北里霉素和罗红霉素等大环内酯类抗生素进行监测，有利于查找源头，可以有效防止地表水污染，进而避免对环境和人类健康等的影响。目前，关于地表水中抗生素残留的检测，主要集中在氯霉素类、磺胺类和喹诺酮类等药品 。经收稿日期：作者简介：侯锦英，高级工程师，从事环境监测工作通信联系人。查阅文献，关于地表水中大环内酯类抗生素 残留的研究报道较少，且研究种类偏少，仅测定了泰乐霉素和罗红霉素的含量。本工作采用全自动固相萃取法净化、富集、洗脱药企周边地表水中的泰乐菌素、交沙霉素、螺旋霉素、北里霉素和罗红霉素等种大环内酯类抗生素，以超高效液相色谱串联质谱法（）测定其含量。试验部分仪器与试剂岛津 型液相色谱仪；型三重四极杆质谱仪；型全自动固相萃取仪；型电子天平；型水浴氮吹仪；固 相 萃 取 柱（）；型超纯水系统。单标准储备溶液：准确称取泰乐霉素标准物质 ，加甲醇溶解，并定容至 容量瓶中，摇匀；分取 上述溶液，置于 容量瓶中，加甲醇定容，摇匀，得 的泰乐霉侯锦英，等：全自动固相萃取超高效液相色谱串联质谱法同时测定药企周边地表水中种大环内酯类抗生素的残留量素标准储备溶液；同法配制交沙霉素、螺旋霉素、北里霉素和罗红霉素标准储备溶液。混合标准溶液系列：分别取单标准储备溶液适量，用甲醇逐级稀释，配制成质量浓度分别为 ，的混合标准溶液系列。泰乐霉素标准物质，编号 ，规格 瓶，纯度；交沙霉素标准物质，编号 ，规格 瓶，纯度；螺旋霉素标准物质，编号 ，规格 瓶，纯 度 ；北 里 霉 素 标 准 物 质，编 号 ，规格 瓶，纯度；罗红霉素标准物质，编号 ，规格 瓶，纯度；甲醇、乙腈为色谱纯；甲酸为分析纯；试验用水为超纯水。仪器工作条件色谱条件 色 谱柱（，）；柱 温 ；流 量 ；进样量；流动相 为（体积分数）甲 酸 溶 液，为 甲 醇。梯 度 洗 脱 程 序：时，由 升 至，保 持 ；时，由 升至，保持 ；时，由 跳 转至，保 持 。质谱条件电喷雾离子（）源，正离子（）模式；喷雾电压 ；离 子 源 温 度 ；辅 助 气 压 力 ；离 子 传 输 管 温 度 ；气 帘 气 压 力 ；碰撞气为氮气；多反应监测（）模式。其他质谱参数见表，其中“”代表定量子离子的碰撞电压。表质谱参数 待测物质荷比（）母离子定量子离子定性子离子去簇电压碰撞电压泰乐霉素 ，交沙霉素 ，螺旋霉素 ，北里霉素 ，罗红霉素 ，试验方法样品的采集随机采集药企周边地表水样品，去除肉眼可见异物，滤纸过滤，弃去初滤液，续滤液置于棕色量瓶中，冷藏储存。样品的前处理取上述地表水样品 ，加 氢氧化钠溶液或 盐酸溶液，调节酸度为中性（）。取 固相萃取柱，分别用 水、丙酮和 环己烷进行活 化。活 化 完 毕 后，设 定 程 序，将 上 述 水 样 以 的流量过柱，用 丙酮洗脱，收集洗脱液。将洗脱液于 氮吹至近干，用甲醇溶解并定容至，涡旋混匀，按照仪器工作条件测定。结果与讨论色谱行为按照优化的仪器工作条件进行测定，混合标准溶液的色谱图见图。图混合标准溶液的色谱图 提取、净化方法的选择高效率的前处理步骤对分析结果的准确可靠和方法灵敏度具有决定性的作用。关于大环内酯类抗生素的前处理方法主要针对动物源性食品、饲料等基质，对于地表水中的抗生素，由于水体的干扰物质不同，测定水样中的大环内酯类抗生素时要在尽可能保证抗生素萃取率的前提下，最大程度去除基质中的干扰物质。大环内酯类抗生素残留监测的提取、净化方法主要有凝胶净化色谱法、法和全自动固相萃取法等。凝胶净化色谱法前处理色谱条件需要优化，操作步骤繁琐，试剂耗用量大，且仪器价格较高，方法适用性较差；法提取、净化效率高，处理速率快，但效果一般，且操作侯锦英，等：全自动固相萃取超高效液相色谱串联质谱法同时测定药企周边地表水中种大环内酯类抗生素的残留量过程易造成待测物的损失，因此检测准确度较低；固相萃取法集富集、净化于一体，操作简单，净化效果好，且准确度较高，方法更易推广使用。试验取泰乐菌素、交沙霉素、螺旋霉素、北里霉素和罗红霉素质量浓度均为 的加标样品，分别采用上述方法进行提取、净化，考察了不同方法对待测物回收率的影响，结果见表。表不同方法下待测物回收率的比较 待测物回收率凝胶净化色谱法 法 全自动固相萃取法泰乐霉素 交沙霉素 螺旋霉素 北里霉素 罗红霉素 结果显示，法回收率明显低于其他方法，结合固相萃取方法的优势，最终选择全自动固相萃取法作为提取、净化方法。萃取柱的选择对于地表水中抗生素药物残留的前处理方法多采用固相萃取法，选择适合的固相萃取柱，可以有效提高检测结果的准确度、降低基质干扰等。试验选择规格一致（规格均为 ）的 固相萃取柱、固相萃取柱、氨基固相萃取柱和 固相萃取柱，分别对泰乐菌素、交沙霉素、螺旋霉素、北里霉素和罗红霉素质量浓度均为 的加标样品进行富集、净化，考察了不同萃取柱对待测物回收率的影响，结果见表。表不同固相萃取柱净化下待测物回收率的比较 待测物回收率 固相萃取柱 固相萃取柱氨基固相萃取柱 固相萃取柱泰乐霉素 交沙霉素 螺旋霉素 北里霉素 罗红霉素 由表可知，选择 固相萃取柱时，种待测物的回收率均较好。因此，试验选择 固相萃取柱。质谱条件的选择取 泰乐霉素标准溶液，选择质谱扫描模式为全扫描（），找到泰乐霉素分子离子；再选择质谱扫描模式为产物离子扫描（），找到泰乐霉素分子离子对应的子离子；选择丰度较高的两个子离子，其中一个作为定性离子，另外一个作为定量离子，最后优化去簇电压和碰撞电压，建立泰乐霉素方法；同法建立交沙霉素、螺旋霉素、北里霉素和罗红霉素方法。具体质谱条件见节。标准曲线及检出限按照仪器工作条件测定混合标准溶液系列，以待测物的质量浓度为横坐标，对应的峰面积为纵坐标绘制标准曲线。结果表明，待测物的质量浓度在 内与对应的峰面积呈线性关系，线性回归方程和相关系数见表。按照倍信噪比（）计算检出限（），结果见表。表线性参数及检出限 待测物线性回归方程相关系数检出限（）泰乐霉素.交沙霉素.螺旋霉素.北里霉素.罗红霉素.回收试验取药企周边地表水阴性样品，进行 ，等个浓度水平的加标回收试验，平行制备份，按仪器工作条件测定，计算回收率，结果见表。精密度试验取药企周边地表水阴性样品，分别加入适量的单标准储备溶液，再按试验方法进行前处理，制备 的加标溶液，平行制备份，按仪器工作条件测定，计算测定值的相对标准偏差（）。结果表明，泰乐菌素、交沙霉素、螺旋霉素、北里霉素和罗红霉素测定值的 分别为，说明方法精密度良好。侯锦英，等：全自动固相萃取超高效液相色谱串联质谱法同时测定药企周边地表水中种大环内酯类抗生素的残留量表回收试验结果 待测物回收率加标量 加标量 加标量 泰乐霉素 交沙霉素 螺旋霉素 北里霉素 罗红霉素 样品分析随机取药企周边地表水样品，按照试验方法进行测定，结果见表。表样品分析结果 待测物测定值（）样品样品样品样品样品泰乐霉素交沙霉素 螺旋霉素 北里霉素罗红霉素 本工作采用全自动固相萃取法提取、净化药企周边地表水中泰乐菌素、交沙霉素、螺旋霉素、北里霉素 和 罗 红 霉 素种 大 环 内 酯 类 抗 生 素，以 测定其含量。方法操作简单，检测结果准确、可靠，适用于药企周边地表水中极微量大环内酯类抗生素残留的监测。参考文献：王琪，郭嘉雯，员月明，等我国制药企业赴非本地化生产的现状、问题和对策 中国药物经济学，（）：胡延臣 药品连续生产及全球监管趋势 中国新药杂志，（）：汤雨晴，叶倩，郑维义 抗生素类药物的研究现状和进展 国外医药（抗生素分册），（）：杨奕，张峰，毕小玲大环内酯类抗生素抗菌机制及构效关系研究现状 药学进展，（）：葛旭制药企业药品研发阶段质量管理存在的问题及对策 化工设计通讯，（）：邹向阳，何秋月 药品生产企业质量管理理念发展中国社区医师，（）：胡颖廉 改革开放 年中国食品安全监管体制和机构演进中国食品药品监管，（）：陈强，邴乃慈，谢洪勇，等 不同环境介质中抗生素的污染现状及其检测方法研究进展环境监控与预警，（）：谭韬，唐倩，伍彬，等水体和动物源性食品中残留抗生素的新型检测技术研究进展重庆医学，（）：颉亚玮，於驰晟，李菲菲，等某市污水厂抗生素和抗生素抗性基因的 分 布 特 征 环境科学，（）：付晓燕固相萃取超高效液相色谱串联质谱法测定地表水中种磺胺类抗生素环境保护与循环经济，（）：董恒涛，姚劲挺，郝红元，等超高效液相色谱三重四极杆质谱联用法测定地表水中 种喹诺酮类抗生素残留环境化学，（）：李清雪，孙王茹，汪庆 测定水中内酰胺类、喹诺 酮 类、磺 胺 类 抗 生 素 中 国 给 水 排 水，（）：尹燕敏，沈颖青，朱月芳，等 超高效液相色谱串联质谱法同时测定水和沉积物中磺胺类、喹诺酮类和氯霉素类抗生素残留 分析 科 学学报，（）：闾幸 生猪养殖废水及地表水中兽用抗生素污染现状与处理技术研究上海：上海师范大学，侯锦英，等：全自动固相萃取超高效液相色谱串联质谱法同时测定药企周边地表水中种大环内酯类抗生素的残留量 ，（.，；.，.，）：，（），（），（），（），（）：；（）；