动物细胞工程3.pptx

二、动物细胞融合与单克隆抗体细胞融合是正常的生命活动两个细胞正在融合 受精作用人工条件下，如何促成动物体细胞的融合？（一）动物细胞融合（一）动物细胞融合细胞融合诱导剂：细胞融合诱导剂：灭活的病毒、灭活的病毒、（其它物理化学手段同植（其它物理化学手段同植物体细胞杂交）物体细胞杂交）灭活的病毒灭活的病毒有丝分裂应用：应用：主要用于制备单克隆主要用于制备单克隆抗体抗体 如果患者想知道自己是否得了乙型肝炎，一般如果患者想知道自己是否得了乙型肝炎，一般是先检查血液里是否有病毒的蛋白质，也就是病毒是先检查血液里是否有病毒的蛋白质，也就是病毒的抗原等的抗原等 2 1ABC血清中的抗体血清中的抗体有时患者体内无乙肝病毒，但是用血清抗体进行检验有时患者体内无乙肝病毒，但是用血清抗体进行检验时，会出现相应的免疫反应（即假阳性）。时，会出现相应的免疫反应（即假阳性）。如何得到单一的抗体如何得到单一的抗体A A或或B B？单克隆抗体制备的原理及流程单克隆抗体制备的原理及流程（二）单克隆抗体（二）单克隆抗体1）注射特定抗原）注射特定抗原4）筛选杂交瘤细胞）筛选杂交瘤细胞3）杂交瘤细胞特点）杂交瘤细胞特点1 制备过程：制备过程：5）细胞培养（克隆）细胞培养（克隆）6）提取单克隆抗体）提取单克隆抗体2 单克隆抗体的优点：单克隆抗体的优点：特异性强、灵敏度高特异性强、灵敏度高2）效应）效应B细胞细胞+骨髓骨髓瘤细胞瘤细胞杂交瘤细胞杂交瘤细胞1 1）作为体外诊断试剂）作为体外诊断试剂3 3 应用应用结合药物的单克隆抗体结合药物的单克隆抗体2 2）运载药物）运载药物 如制备生物导弹如制备生物导弹鼠源性的嵌合的 用于治疗是很受限制的。原因是：用于治疗是很受限制的。原因是：人源性的对鼠源化抗体进行改造对鼠源化抗体进行改造-蛋白质工程蛋白质工程直接生产人源化抗体直接生产人源化抗体-基因工程基因工程 细胞合成细胞合成DNADNA有有D D和和S S两条途径，其中两条途径，其中D D途径能途径能被氨基嘌呤阻断。被氨基嘌呤阻断。淋巴细胞中有这两种淋巴细胞中有这两种DNADNA的合成途径，但不能的合成途径，但不能在体外无限增殖；骨髓瘤细胞中只有在体外无限增殖；骨髓瘤细胞中只有D D途径，可途径，可以在体外无限增殖。以在体外无限增殖。将这两种细胞在试管中混合，可以获得两两将这两种细胞在试管中混合，可以获得两两融合的细胞。融合的细胞。如何从融合的细胞中分离出杂交瘤细胞？如何从融合的细胞中分离出杂交瘤细胞？HATHAT培养基培养基 筛选杂交瘤细胞 将杂交瘤细胞在细胞培养板上培养。测定时，加入相应的抗原等物质，检测各孔的上清液中细胞分泌的抗体，产生有色反应的为阳性。酶联免疫吸附试验 筛选特定的杂交瘤细胞 2 1有限稀释法有限稀释法 分离单一的杂交瘤细胞 阳性孔中的细胞还不能保证是来自单个细胞，挑选阳性孔的细胞继续进行有限稀释，一般需进行34次，直至确信每个孔中增殖的细胞为单克隆细胞。该过程即为杂交瘤细胞的克隆化培养。