1、2-基因工程的基本操作程序.doc

1、2 基因工程的基本操作程序

课标要求
简述基因工程的原理和技术
能力要求
（1）通过对书中插图、照片等的观察，学会科学的观察方法，培养观察能力。
（2）通过对基因工程的基本操作程序的学习，使学生在理解步骤的同时，举一反三，对于其他基因工程操作实例做到能理解、能介绍，从而培养学生对相关知识的理解能力及良好的语言表达能力。
（3）通过引导学生在网上的探究活动，引导学生主动参与，乐于探究，培养学生收集和处理科学信息的能力、获取新知识的能力、分析和解决问题的能力及交流与合作的能力。
知识网络体系
目的基因：指编码蛋白质结构基因
　　 　　基因文库
　　　　从基因文库中获取 基因组文库
目的基因的获取 方法 　 　 部分基因文库
　　　　　　　　　　　　人工合成
PCR：是一项在生物体外复制特定
　　　　　　　　　　　　　　　DNA片段的核酸合成技术。
利用PCR技术扩增目的基因 目的：获取大量的目的基因
原理：DNA复制
过程

目的：使目的基因在受体细胞中稳定存在，并可以遗传给下一代，
基因表达载体的构建 并使目的基因能够表达和发挥作用。
（基因工程的核心） 目的基因：
基因表达载体的组成： 启动子：
终止子：
标记基因：

转化：目的基因进入受体细胞内并在受体细胞内维持稳定
和表达的过程
农杆菌转化法
导入植物细胞的方法： 基因枪法
将目的基因导入受体细胞 方法： 花粉通道法
导入动物细胞的方法： 显微注射技术
导入微生物的方法：
检测转基因生物的染色体上是否插入了目的基因
检测： 方法：分子杂交技术（DNA探针+转基因生物DNA）
目的基因的检测和鉴定 检测目的基因是否转录
方法：分子杂交技术（DNA探针+转基因生物mRNA）
检测目的基因是否翻译成蛋白质
抗原—抗体杂交
鉴定：对生物进行个体水平的鉴定
重难热点归纳
提取目的基因的方法
目的基因导入受体细胞的途径。
知识拓展

1．外显子与内含子
一般来说，结构基因都是由外显子和内含子组成，但是，外显子和内含子的关系不是完全固定不变的。有时同一条DNA链上的某一段DNA序列，当它作为编码某多肽链的基因时是外显子，而作为编码另一多肽链的基因时，则是内含子，结果是同一基因可以同时转录为两种或两种以上的mRNA。
2．原核细胞的基因结构与真核细胞的基因结构的异同点

原核细胞的基因
真核细胞的基因
不同点
编码区连续；结构简单
编码区有间隔，不连续；结构复杂
相同点
都有编码区和非编码区；编码区都有调控遗传信息表达的核苷酸序列；编码区上游都有与RNA聚合酶结合的位点

3．获取目的基因的方法
从基因文库中获取
鸟枪法
人工合成

3．目的基因与运载体结合（以质粒为运载体）

4．将目的基因导入受体细胞
受体细胞：细菌
↓氯化钙
细胞壁的通透性增大
↓
重组质粒进入受体细胞
↓
目的基因随受体细胞的繁殖而复制

经典例题剖析
［例1］下列有关基因工程技术的正确叙述是
A．重组DNA技术所用的工具酶是限制酶、连接酶和运载体
B．所有的限制酶都只能识别同一种特定的核苷酸序列
C．选用细菌作为重组质粒的受体细胞是因为细菌繁殖快
D．只要目的基因进入了受体细胞就能成功实现表达
【解析】 基因操作的工具有限制酶、连接酶，一种限制酶只能识别特定的核苷酸序列。运载体是基因的运输工具，目的基因进入受体细胞后，受体细胞表现出特定的性状，才说明目的基因完成了表达，基因工程的结果是让目的基因完成表达，生产出目的基因的产物，选择受体细胞的重要条件就是能够快速繁殖。
【答案】 C
［例2］应用基因工程技术诊断疾病的过程中必须使用基因探针才能达到探测疾病的目的。基因探针是指
A．用于检测疾病的医疗器械
B．用放射性同位素或荧光分子等标记的DNA分子
C．合成β—球蛋白的DNA
D．合成苯丙羟化酶DNA片段
【解析】 基因诊断是用放射性同位素、荧光分子等标记的DNA作探针，利用DNA分子杂交原理，鉴定被检测标本上的遗传信息，达到检测疾病的目的。

基础试题训练
1、构建基因组DNA文库时，首先雷分离细胞的
A、染色体DNA   B、线粒体DNA   C、总mRNA   D、tRNA  
2．在基因工程中，把选出的目的基因（共1000个脱氧核苷酸对，其中腺嘌岭脱氧核苷酸是460个）放入DNA扩增仪中扩增4代，那么，在扩增仪中应放入胞嘧啶脱氧核苷酸的个数是( )
A.540个 B.8100个 C.17280个 D.7560个
2．在基因工程中，科学家常用细菌、酵母菌等微生物作为受体细胞，原因是（ ）
A.结构简单，操作方便 B.遗传物质含量少
C. 繁殖速度快 D.性状稳定，变异少
3．因工程的操作步骤：①使目的基因与运载体相结合，②将目的基因导入受体细胞，③检测目的基因的表达是否符合特定性状要求，④提取目的基因，正确的操作顺序是（　）
　　A．③②④① 　　B.②④①③ 　C．④①②③ 　D．③④①②
4．工程是在DNA分子水平上进行设计施工的，在基因操作的基本步骤中，不进行碱基互补配对的步骤是 （　）
　　A．人工合成基因 　　　　 　B．目的基因与运载体结合
　　C．将目的基因导入受体细胞 D．目的基因的检测和表达
5．就分于结构而论，质粒是
　　A、环状双链DNA分子   B、环状单链DNA分于
C、环状单链RNA分子   D、线状双链DNA分子
6．聚合酶链反应可表示为
A、PEC   B、PER   C、PDR   D、PCR
7．在已知序列信息的情况下，获取目的基因的最方便方法是
　　A、化学合成法    B、基因组文库法
C、CDNA文库法   D、聚合酶链反应
8．有关基因工程的叙述正确的是 （　 ）
　　A.限制性内切酶只在获得目的基因时才用
　　B.重组质粒的形成在细胞内完成
　　C.质粒都可作运载体
　　D.蛋白质的结构可为合成目的基因提供资料
9．不属于目的基因与运载体结合过程的是 （ ）
A．用一定的限制酶切割质粒露出黏性末端
B．用同种限制酶切割目的基因露出黏性末端
　　C. 将重组DNA导入受体细胞中进行扩增
　　D．将切下的目的基因插入到质粒切口处
10．科学家通过基因工程的方法，能使马铃薯块茎含有人奶蛋白。以下有关该基因工程的叙述错误的是
A．采用反转录的方法得到的目的基因
B．基因非编码区对于目的基因在块茎中的表达是不可缺少的
C．马铃薯的叶肉细胞可作为受体细胞
D．用不同种限制酶处理质粒和含有目的基因的DNA，可产生黏性末端而形成重组DNA
分子

11．基因工程常用的受体细胞有
①大肠杆菌 ②枯草杆菌 ③支原体 ④动植物细胞
A．①②③④ B．①②③
C．②③④ D．①②④
12．用DNA探针检测饮用水中病毒的具体方法是
A．与被检测病毒的DNA碱基序列进行比较
B．与被检测病毒的DNA碱基序列进行组合
C．与被检测病毒的DNA碱基序列进行杂交
D．A、B、C三种方法均可
13．1976年，美国的H.Boyer教授首次将人的生长抑制素释放因子的基因转移到大肠杆菌，并获得表达，此文中的“表达”是指该基因在大肠杆菌( )
A．能进行DNA复制 B.能传递给细菌后代
C. 能合成生长抑制素释放因子 D.能合成人的生长素
14．在遗传工程技术中，限制性内切酶主要用于 （ ）
A．目的基因的提取和导入
B．目的基因的导入和检测
C．目的基因与运载体结合和导入
D．目的基因的提取和与运载体结合
15、（05广东）以下有关基因工程的叙述，正确的是
A. 基因工程是细胞水平上的生物工程
B．基因工程的产物对人类全部是有益的
C．基因工程产生的变异属于人工诱变
D．基因工程育种的优点之一是目的性强

16．（多选）一个基因表达载体的构建应包括（ ）
A．目的基因 B．启动子 C．终止子 D．标记基因

创新应用训练
1、在药品生产中，有些药品如干扰素，白细胞介素，凝血因子等，以前主要是从生物体的组织、细胞或血液中提取的，由于受原料来源限制，价价十分昂贵，而且产量低，临床供应明显不足。自70年代遗传工程发展起来以后，人们逐步地在人体内发现了相应的目的基因，使之与质粒形成重组DNA，并以重组DNA引入大肠杆菌，最后利用这些工程菌，可以高效率地生产出上述各种高质量低成本的药品，请分析回答：
（1）在基因工程中，质粒是一种最常用的 ，它广泛地存在于细菌细胞中，是一种很小的环状 分子。
（2）在用目的基因与质粒形成重组DNA过程中，一般要用到的工具酶是
和 。
（3）将含有“某激素基因”的质粒导入细菌细胞后，能在细菌细胞内直接合成“某激素”，则该激素在细菌体内的合成包括 和 两个阶段。
（4）在将质粒导入细菌时，一般要用 处理细菌，以增大 。
2、下图是将人类的生长激素基因导入细菌B细胞内制造“工程菌”的示意图，所用的载体为质粒A。已知细菌B细胞内不含质粒A，也不含质粒A上的基因，质粒导入细菌B后，其上的基因能得到表达。请回答下列问题：（注：质粒中的a点即是四环素抗性基因的存在位置，又是与目的基因的结合点；斜线部分为抗氨苄青霉素基因）

（1）人工合成目的基因的途径一般有哪两条？

（2）如何将目的基因和质粒结合成重组质粒？

（3）目前把重组质粒导入细菌细胞时，效率还不高，导入完成后得到的细菌，实际上有的根本没有导入质粒，有的导入的是普通质粒A，只有极少数导入的是重组质粒。可通过以下步骤鉴别得到的细菌是否导入了质粒A或重组质粒；将得到的细菌涂布在一个含有氨苄青霉素的培养基上，能够生长的就是导入了质粒A和重组质粒的细菌，反之则没导入。使用这种方法鉴别的原因是什么？

（4）若把通过鉴定证明导入了普通质粒A或重组质粒的细菌放在含有四环素的培养基上培养，发生的现象是什么？

（5）导入细菌B细胞的目的基因成功表达的标志是什么？

３、科学家通过基因工程培育抗虫棉时，需要从苏云金芽孢杆菌中提取出抗虫基因，“放入”棉花的细胞中与棉花的DNA结合起来并发挥作用，请回答下列有关问题：
　　（1）从苏云金芽孢杆菌中切割抗虫基因所用的工具是　　　　　　，此工具主要存在于　　　　　　　　中，其特点是　　　　　　　　　。
　　（2）苏云金芽孢秆菌一个DNA分子上有许多基因，获得抗虫基因常采用的方法是“鸟枪法”。具体做法是：用　　　　　　　　酶将苏云金芽孢杆菌的　　　　　切成许多片段，然后将这些片段　　　，再通过　  　转入不同的受体细胞，让它们在各个受体细胞中大量　　　　　　，从中找出含有目的基因的细胞，再用一定的方法把　　　　　　分离出来。
　　（3）进行基因操作一般要经过的四个步骤是　　 、　　 、 　、 　　 。