超高效液相色谱-三重串联四极杆质谱分析喹诺酮类抗生素残留量检测方法.docx

超高效液相色谱-三重串联四极杆质谱分析喹诺酮类抗生素残留量的检测方法
李建中，宋越

三重串联四极杆质谱是复杂基质中痕量组分定量分析的重要手段，通过多重反应监控模式（MRM）能够提供高选择性和高灵敏度的检测。建立在亚二微米粒径填料基础上的超高效快速液相色谱（RRLC）已得到广泛的应用，和QQQ联用能够提供高通量和高灵敏度的分离分析。本文运用UHPLC-QQQ对动物源性食品中的14种喹诺酮类抗生素进行定量分析，通过对重复性、线形关系等方法学参数进行考察，所建立的方法能在7.0分钟内对14种目标化合物完成快速、高灵敏度的检测分析。本方法采用Agilent 6460QQQ系统，利用Jet Stream鞘流气技术大大提高了去溶剂效果，同时减少了喷雾造成的离子扩散损失，显著的提高了离子化效率，从而大大提高了灵敏度。本方法采用Agilent特有动态多反应监测（Dynamic MRM）模式对多残留化合物进行监测，实现了自动最大化分配驻留时间(Dwell time)的功能，兼顾了灵敏度及采样点数，实现了有机完美的统一，有效简化了方法的开发。本方法完全满足了国内外对喹诺酮类抗生素药物日益严格的残留限量监测要求。

1 实验部分

1.1 仪器与试剂
美国安捷伦公司6460 QQQ质谱仪；美国安捷伦公司1260 UHPLC。

1.2 液相和质谱条件
液相色谱柱为安捷伦Zobax Eclipse Plus C18（2.1 x 50mm, 1.8 um）；流动相A为水（含0.1%体积比的甲酸+2mM乙酸铵），B为乙腈（含0.1%体积比的甲酸），梯度（B%/min）：8/0，10/1.0，15/4.0，50/5.0，80/5.5，8/5.8，8/7.0；柱温45oC；进样量5µL，流速为0.5 mL/min。
QQQ质谱参数（ESI+模式）：干燥气温度（Gas Temp）325 oC，干燥气流量（Gas Flow）5mL/min，雾化器压力（Nebulizer）50psi，鞘流气温度（Sheath Gas Temp）400 oC，鞘流气流量（Sheath Gas Flow）12mL/min，毛细管电压（Capillary）3000V，MRM参数见表1，安捷伦MassHunter软件用于定性（Qualitative）和定量（Quantitative）分析。

2 结果与讨论
图1为14种喹诺酮类抗生素的MRM叠加谱图。本文对MS和LC条件进行优化，对线形关系（R2）、检测限（LOQ）、峰面积重复性（RSD）等方法学进行了考察（见表2）。所建立的RRLC-QQQ能够对14种喹诺酮类抗生素进行高灵敏度和高通量的定量分析。

表1. 14种喹诺酮类抗生素DMRM参数
Compound
Name
Precursor
Ion
Product
Ion
Fragmentor
Collision
Energy
Ret Time
(min)
Delta Ret Time
Difloxacin
400.2
382.1
138
20
4.25
1
Difloxacin
400.2
356.2
138
16
4.25
1
Orbifloxacin
396.2
352.2
128
16
3.54
1
Orbifloxacin
396.2
295.2
128
24
3.54
1
Sarafloxacin
386.1
368.1
128
16
4.08
1
Sarafloxacin
386.1
299.1
128
24
4.08
1
Marbofloxacin
363.2
345.2
123
16
1.9
1
Marbofloxacin
363.2
320.1
123
8
1.9
1
Ofloxacin
362.2
318.2
133
16
2.33
1
Ofloxacin
362.2
261.2
133
28
2.33
1
Enrofloxacin
360.2
342.2
123
20
3.36
1
Enrofloxacin
360.2
316.3
123
16
3.36
1
Danofloxacin
358.2
340.2
138
20
3.13
1
Danofloxacin
358.2
255.1
138
40
3.13
1
Lomefloxacin
352.2
308.2
133
12
2.94
1
Lomefloxacin
352.2
265.1
133
20
2.94
1
Pefloxacin
334.2
316.2
133
20
2.43
1
Pefloxacin
334.2
290.2
133
16
2.43
1
Ciprofloxacin
332.1
314.1
138
16
2.52
1
Ciprofloxacin
332.1
231
138
36
2.52
1
Enoxacin
321.1
303.2
123
20
2.06
1
Enoxacin
321.1
232.1
123
36
2.06
1
Norfloxacin
320.1
302.2
128
16
2.25
1
Norfloxacin
320.1
276.2
128
12
2.25
1
Oxolinic acid
262.1
244.2
94
16
5.34
1
Oxolinic acid
262.1
216
94
15
5.34
1
Flumequine
262.1
202.1
99
36
5.85
1
Flumequine
262.1
244.1
99
12
5.85
1

图1. 14种喹诺酮类抗生素的MRM谱图

表2. 14种喹诺酮类抗生素线性方程，相关系数，重复性及测定低限
Compound
Linear
0.01ng/mL-100ng/mL
Correlation
R2
Reproducibility
RSD(%)
n=10
LOQ
（以S/N=10计算）
pg/mL
Marbofloxacin
Y=8744x-1249
0.99998
1.22
9.5
Enoxacin
Y=15803x-5009
0.99988
1.85
26.8
Norfloxacin
Y=14863x-5755
0.99983
1.44
6.2
Ofloxacin
Y=11686x-3658
0.99991
0.87
2.5
Pefloxacin
Y=9025x-3408
0.99985
2.04
11.5
Ciprofloxacin
Y=8366x-3154
0.99984
1.54
5.0
Lomefloxacin
Y=19389x-1971
0.99999
1.78
27.3
Danofloxacin
Y=6789x-3335
0.99972
1.35
7.4
Enrofloxacin
Y=10741x-4126
0.99981
0.65
10
Orbifloxacin
Y=36100x+961
0.99999
1.68
5.5
Sarafloxacin
Y=8832x-3365
0.99983
1.04
12
Difloxacin
Y=15662x-5665
0.99986
1.52
2.7
Oxolinic acid
Y=15284x-4308
0.99992
1.75
5.7
Flumequine
Y=72154x+12691
0.99993
0.82
1.3

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