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基因工程的基本操作程序教学案【实用文档】doc
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１。2 基因工程的基本操作程序
【课标要求】
1.简述基因工程基本操作程序的四个步骤
2．尝试设计某一转基因生物的研制过程。
【本节重难点】
重点：基因工程基本操作程序的四个步骤
难点：（1）从基因文库中获取目的基因
　　 (2)利用PCＲ技术扩增目的基因
【学习过程】
一、基因工程的基本操作程序简述
①目的基因的；
②的构建;
③将目的基因；
④目的基因的。
二、基因工程的基本操作程序
(一)目的基因的获取
1．目的基因:主要是指的基因,也可以是一些具有作用的因子。
2.原核细胞和真核细胞的基因结构
（１)原核细胞的基因结构

（2）真核细胞的基因结构

3．目的基因的获取
目的基因可以从中分离出来，也可以用合成。
常用的方法有以下几种：
（1）从基因文库中获取目的基因
①基因组文库和部分基因文库（如ｃDＮＡ文库）

　　 　 　基因组文库 　 　　 　 cDNA文库
文库类型
cDNA文库
基因组文库
文库大小

基因中启动子

基因中内含子

基因多少

物种间的基因交流

②从基因文库中得到目的基因，可以根据一些信息，如根据基因的、
基因的、基因在染色体上的、基因的,以及基因的等特性。
（2）利用PCR技术扩增目的基因
①PCR是＿__________＿___＿__＿________＿__＿__＿＿＿技术，是的缩写。
②原理：______＿__＿＿_____＿__＿。,
③前提：有一段已知目的基因的核苷酸序列，以便根据这一序列合成__＿__＿＿__.
④条件:DNＡ模板、。
⑤扩增过程：

a．变性(℃):目的基因DＮA受热变性后接连为单链
b.退火（℃）：与单链相应互补序列结合
c．延伸（℃):在的作用下进行延伸
Taｑ酶的特点是。
PCR技术与DNA复制的比较：

PCＲ技术
ＤNＡ复制
相
同
点
原理

原料

条件

不
同
点
解旋方式

场所

酶

结果

（3)化学法直接合成
适用于基因比较,核苷酸序列又。
(二）——基因工程的核心
１。基因表达载体的构建，其目的是使目的基因在受体细胞中能，并且可以,同时，使目的基因能够.
２．基因表达载体＝+++

（1）启动子：是一段有特殊结构的,位于基因的,它是
识别和结合的部位，有了它才能驱动基因，最终获得所需要的蛋白质。
（2)终止子:也是一段有特殊结构的，位于基因的，相当于一盏红色信号灯，使在所需要的地方停止下来。
(3）标记基因：作用是为了，从而将含有目的基因的细胞出来,如基因。
３．构建基因表达载体的过程:用（同、不同）种限制酶去切目的基因与运载体，再用使其连接，形成重组DNA分子。
(三）将目的基因导入受体细胞
将目的基因受体细胞，并且在受体细胞内和的过程，称为转化.
(1）将目的基因导入植物细胞
①农杆菌转化法

②法
③法
（２)将目的基因导入动物细胞
①技术是将目的基因导入受体细胞的最有效方法.
②操作程序：将含有目的基因的表达载体→→获得→显微注射→胚胎→胚胎→发育成具有新性状的动物
（3）将目的基因导入微生物细胞
①原核生物作为基因工程受体细胞的优点：。
②大肠杆菌细胞最常用的方法:
a.用处理细胞，使细胞处于一种的生理状态，这种细胞称为细胞；
b．将分子溶于缓冲液与感受态细胞混合，在一定的温度下促进感受态细胞吸收ＤNＡ分子.
(四)目的基因的检测与鉴定
（1）检测转基因生物的上是否插入了目的基因
检测方法:技术，即将转基因生物的基因组DNＡ提取出来，在含有目的基因的DNＡ片段上用放射性同位素等作标记,以此作为，使探针与基因组ＤNＡ杂交，如果出现，就表明目的基因已插入染色体DNA中。
(2）检测目的基因是否
检测方法:技术
（3）检测目的基因是否
检测方法:，从转基因生物中提取蛋白质，用相应的抗体进行检测，若有出现,表明目的基因已形成蛋白质产品。
(４）进行水平的鉴定

【巩固练习】
1.下列正确表示基因操作“四部曲”的是 　 　 　 ( 　)
Ａ.提取目的基因→目的基因导入受体细胞→基因表达载体的构建→目的基因的检测和鉴定
B．目的基因的检测和鉴定→提取目的基因→基因表达载体的构建→目的基因导入受体细胞
C．提取目的基因→基因表达载体的构建→目的基因导入受体细胞→目的基因的检测和鉴定
D．基因表达载体的构建→提取目的基因→目的基因导入受体细胞→目的基因的检测和鉴定
２。下列不属于获得目的基因的方法的是 　 　 　 　　 　 　 （　 ）
A。利用ＤNＡ连接酶复制目的基因　 B．利用DＮＡ聚合酶复制目的基因
C．从基因文库中获取目的基因　 　　 D。利用PCR技术扩增目的基因
3。PCR技术扩增DNＡ，需要的条件是( 　 ）
①目的基因 ②ＡTP ③四种脱氧核苷酸 　④ＤNA聚合酶等 ⑤mRＮA　　⑥核糖体
A。①②③④　 B．②③④⑤ 　 Ｃ。①③④⑤　　 Ｄ．①②③⑥
4.根据ｍＲNA的信息推出获取目的基因的方法是（　 ）
Ａ．用DNA探针测出目的基因　 　 Ｂ．用mＲNA探针测出目的基因
C。用mRＮA反转录形成目的基因 　 D．用PCR技术扩增mRＮA
５。在已知某小片段基因碱基序列的情况下，获得该基因的最佳方法是( 　 ）
A．用mRNＡ为模板逆转录合成ＤＮＡ
Ｂ.以4种脱氧核苷酸为原料人工合成
Ｃ。由蛋白质的氨基酸序列推测mRNA
Ｄ.将供体DNＡ片段转入受体细胞中，再进一步筛选
６。下列不属于目的基因与运载体结合过程的是（ 　 )
A.用一定的限制酶切割质粒露出黏性末端
B．用同种限制酶切割目的基因露出黏性末端
C．将切下的目的基因的片段插入到质粒切口处
D.将重组DNA导入受体细胞中进行扩增
7.下列哪项不是基因表达载体的组成成分（ )
A．启动子 　　B。终止密码子　 C．标记基因 　 Ｄ．复制原点
8。在基因表达载体的构建中，所需要的酶是( 　)
①限制酶 ②DNＡ连接酶 ③解旋酶 　 ④DNA聚合酶
A.①② 　 B．①②③ 　　　 　Ｃ．①②④　　 　　 D．①②③④
９.植物学家在培育抗虫棉时,对目的基因作适当修饰，使目的基因在棉花植株的整个生长发育期都表达,以防止害虫侵害,这种对目的基因所作的修饰发生在(）
A.终止子 　 Ｂ.引物 　 C．标记基因　 　　 　Ｄ.启动子
10．下列哪项不是将目的基因导入植物细胞的方法（　 ）
Ａ。基因枪法 　 B。显微注射法 Ｃ.农杆菌转化法 　 D．花粉管通道法
11．在基因工程操作的基本步骤中，不进行碱基互补配对的是（ 　）
A．人工合成目的基因 　 　　 　 　B.目的基因与载体结合
C．将目的基因导入受体细胞 Ｄ。目的基因的检测与鉴定
12．将目的基因导入微生物细胞之前，要用Cａ2+处理细胞，处理过的细胞叫（　 ）
A．感受态细胞 　　B。敏感性细胞 C。吸收性细胞 Ｄ．接受细胞
13．农杆菌转化法转移目的基因进入受体细胞,目的基因的最终位置是（ ）
A．Ｔｉ质粒上 　B．受体细胞染色体上 C.裸露细胞核中　 D。存在细胞质中
14。目的基因导入受体细胞后，是否可以稳定维持和表达其遗传特性,只有通过鉴定和检测才能知道。下列属于目的基因检测和鉴定的是( 　　 ）
①检测受体细胞是否有目的基因  ②检测受体细胞是否有致病基因 　
③检测目的基因是否转录mRＮA   ④检测目的基因是否翻译蛋白质
    A．①②③   　B．②③④    C．①③④     Ｄ．①②④
15.要检测目的基因是否成功地插入了受体DNA中,需要用基因探针，基因探针是指( )
A。用于检测疾病的医疗器械
B．用放射性同位素或荧光分子等标记的ＤNA分子
C．合成β－球蛋白的DＮA
D．合成苯丙羟化酶的DNA片段
16．(多选)用基因工程技术可使大肠杆菌合成人的蛋白质。下列叙述正确的是（　 　 ）
A．常用相同的限制性核酸内切酶处理目的基因和质粒
B．ＤＮA连接酶和RNA聚合酶是构建重组质粒必须的工具酶
C。可用含抗生素的培养基检测大肠杆菌中是否导入了重组质粒
D.导入大肠杆菌的目的基因不一定能成功表达
17．（多选)我国科学家运用基因工程技术将苏云金芽孢杆菌的抗虫基因导入棉花细胞并成功表达，培育出了抗虫棉。下列叙述正确的是( 　 ）
A.基因非编码区对于抗虫基因在棉花细胞中的表达不可缺少
B.重组DＮA分子中增加一个碱基对,可能导致毒蛋白的毒性丧失
Ｃ．抗虫棉的抗虫基因可通过花粉传递至近缘作物，从而造成基因污染
D．转基因棉花是否具有抗虫特性是可以通过检测棉花对抗生素抗性来确定的
18．（多选）科学家通过基因工程的方法，能使马铃薯块茎内含有人奶主要蛋白。以下有关该基因工程的叙述，正确的是 　 　 　 　　 　 ( ）
A。采用反转录的方法得到目的基因有内含子
B．基因非编码区对于目的基因在块茎中表达是不可缺少的
C。马铃薯的叶肉细胞可作为受体细胞
D．用同一种限制性内切酶,分别处理质粒和含目的基因的DNA,可产生黏性末端而形成重组DNA分子
19.资料显示，近十年来，ＰＣR技术（DNA聚合酶链式反应技术)成为分子生物实验的一种常规手段,其原理是利用DNA半保留复制的特性，在试管中进行DＮＡ的人工复制(如下图),在很短的时间内，将ＤNA扩增几百万倍甚至几十亿倍,使分子生物实验所需的遗传物质不再受限于活的生物体。请据图回答：

（1）加热至9４℃的目的是使DNA样品中的_______键断裂，该过程在生物体细胞内是通过＿_____＿___酶的作用完成的。分析可知新合成DNA分子中A=T，C=G，这说明ＤＮＡ分子的合成遵循___＿________________＿_.
(2)与细胞内DNＡ复制相比，PCR技术所需要的ＤNA聚合酶的最适温度比较_＿＿＿______＿_(高、低)。
（3)通过ＰCＲ技术使DNA分子大量复制时,若将一个用1５N标记的模板DＮA分子(第一代)放入试管中，以14Ｎ标记的脱氧核苷酸为原料，连续复制到第五代时,含1５N标记的DNA分子单链数占全部DNA总单链数的比例为。
（4）PCR技术不仅为遗传病的诊断带来了便利，而且改进了检测细菌和病毒的方法.若要检测一个人是否感染了艾滋病病毒，你认为可以用PＣR扩增血液中的（ ）
A。白细胞DＮA B.病毒蛋白质 　 C．血浆抗体 D.病毒核酸
20.下表中列出了几种限制酶识别序列及其切割位点，请回答下列问题:

（1)一个图１所示的质粒经ＳmaⅠ切割前后，分别含有个游离的磷酸基团。
（2）若对图中质粒进行改造，插入的SｍaⅠ酶切位点越多，其热稳定性越.
（3）用图中的质粒和外源DNA构建重组质粒，不能使用SｍaⅠ切割，原因是
。
（4）与只使用EcoＲ I相比较,使用BamＨ Ⅰ和Ｈind Ⅲ两种限制酶同时处理质粒、外源DNA的优点在于可以防止。
（５）为了获取重组质粒，将切割后的质粒与目的基因片段混合，并加入酶。
(6)重组质粒中抗生素抗性基因的作用是为了。
(7）为了从ｃDNA文库中分离获取蔗糖转运蛋白基因,将重组质粒导入丧失吸收蔗糖能力的大肠杆菌突变体,然后在的培养基中培养，以完成目的基因表达的初步检测。
1．2 　基因工程的基本操作程序答案
ＣAAＣB ＤBＡDB ＣABCB AＣD ＡBC 　ＢCＤ
19(1）氢 解旋 　 碱基互补配对原则 　 （2）高 (３）1／1６ （4） D
20（１）0、2
（2）高
（3）SmaⅠ会破坏质粒的抗性基因、外源ＤNA中的目的基因
（4）质粒和含目的基因的外源DＮA片段自身环化
(５）ＤNA连接
（6)鉴别和筛选含有目的基因的细胞
（7）蔗糖为唯一含碳营养物质

第2节 基因工程及其应用
孝义三中 高一生物组 张文
一、 教材内容分析
基因工程是现代四大生物工程之一。《基因工程及其应用》是人教版高中生物必修2第6章第2节内容。本节内容主要包括三个方面,分两课时讲授。第1课时简要介绍“基因工程的原理”，第2课时介绍　“基因工程的应用”及“转基因生物和转基因食品安全性”。 本节内容是对前面所学育种内容的补充，是即贴近生活又远离生活的微观内容.由于在选修3中还有基因工程的介绍，因此本节的要求相对简单一些。
二、 学情分析
对于基因操作的工具和基本步骤,内容抽象和复杂,学生接触少，会出现掌握不好，甚至理解错误的情况。虽然经过必修1的学习，学生的生物基础知识较扎实,思维的目的性、连续性和逻辑性已初步建立。但基因工程一节对学生来说难点较多，如果处理不好，会变成简单的死记硬背。因此在教学过程中,尽量通过生活化打比喻的方式和模型建构活动及采用多媒体动画形象化教学，并在教师引导下适时加强学生解决问题和运用图解等生物学语言归纳结论等方面的能力.切记不可讲的太多.
三、　教学目标
1、简述基因工程的基本概念；
2、简述基因工程的基本工具;
3、简述基因工程的基本操作步骤；
4、通过基因工程的简介，鼓励学生积极探索新知和科学创新,树立一分为二的辩证唯物主义思想;
四、教学重点、难点分析
教学重点: 基因工程的基本原理(概念、工具、操作步骤)
教学难点:　基因工程的基本原理
五、　教学思路
本节课主要解决如下几个问题：１）什么是基因工程？2）基因工程的主要原理是什么?3）基因工程的操作过程如何?4）基因工程有哪些方面的应用？如何看待转基因食品?由于本节内容和前面的育种内容联系比较紧密,因此可以让学生回顾前面几种育种方法的成果，再通过情景展现传统育种方法所不能达到的地方，进而引出基因工程,通过列举生活中的转基因成果让学生知道基因工程就在我们身边。而后通过与学生们所熟知的器官移植做对比，让学生理解基因工程的本质和操作过程。通过对转基因食品的讨论让学生树立辩证唯物主义观念。
六.教学策略及教学媒体
根据激趣原则，通过展示色彩绚丽的转基因生物图片入手，引出基因工程的概念,采取“引导-互动-探究"模式，即采用师生互动探究式教学，借助老师生活化打比喻和多媒体动画并安排学生制作模型活动从而使抽象的课程内容具体化，直观化和形象化。
七、 教学设计流程图   第1课时  　 “基因工程的原理”

引入新课：展示常规育种的成果和色彩绚丽的转基因生物、导入

设疑,讨论，简单介绍“抗虫棉”的产生

引出“基因工程”的概念

师生活动：探讨培育“抗虫棉"的具体过程并归纳出培育“抗虫棉"的关键步骤（生活化设喻）
,并引出并用类比方法介绍基因工程的基本工具：剪刀、针线、运载体

师生活动:通过动画课件展示基因工程操作的基本步骤，师生归纳基因工程操作的“四步曲”，并引导学生分析如何获得“抗虫棉”的过程，加强基因工程操作过程的理解应用

总结再现本节课的知识并布置学生课外收集基因工程的应用相关资料

课堂练习和作业布置（课外探究）

八、教学过程 

教学过程预设
教学步骤环节
教师的组织和引导
（教学内容的呈现)
学生活动
（学习活动的设计）
设计意图
一、情境导入

二、新课讲授
（一）基因工程的概念

（二)基因工程操作的基本工具
1.基因剪刀(分子手术刀）-—限制性核酸内切酶（简称：限制酶)

 2。“基因针线"——DＮA连接酶

3。“基因运输工具”　—— 运载体

(三)基因工程操作的基本步骤

(四）结课
回顾:常规育种有哪些成果?
情景:虫害会严重影响棉花的产量,但自然界的棉花都不具备抗虫的特性，请你设计一种育种方法解决这一问题。
多媒体逐一出示色彩绚丽的转基因生物图片
设问:在生活中大家亲眼见过这些生物吗?
其实前面大家看到的生物可以通过基因工程实现，基因工程给科学插上想象的翅膀，引出课题-—《第2节 基因工程及其应用》
问题：什么叫基因工程?
（从原理、操作水平、产生结果方面理解概念）(打比方)
取出优秀基因
“剪切”
“拼接”　
表达　
甲生物
新类型
新的生物产品　

乙生物

就像器官移植一样，只不过一个是从个体到个体,另一个是从细胞到细胞.
要实现这一目标,应该解决哪些问题？
展示问题:(１）如何获得目的基因?
（2)如何将目的基因导入受体细胞？
（3）目的基因是否表达?
基因工程操作的基本工具:
1．在生物学上作为获取目的基因的“剪刀”是什么？
【教师讲解】限制酶主要来自细菌等微生物体。因为微生物容易受到外源ＤNA的干扰，而限制酶可以切除这些外源DＮA，使其失活,是对自身生存的一种保护。EｃoRⅠ只是已知多种限制酶中的一种。ＥcoRⅠ是一种从细菌中发现的能在特定位置上切割DNＡ分子的酶，其特定的识别序列是ＧAAＴTＣ，特定的切点是在Ｇ和A之间。
探究１：限制酶的功能特点中指出两个“特定”,　这两个“特定”指什么?

探究2:限制酶切割DＮＡ分子后产生什么结果？ 
探究3：用同种限制酶切割的ＤNA末端需要用什么酶连接缝合呢?
2．“基因针线”-—DＮA连接酶
思考:DＮＡ连接酶连接的是两个脱氧核苷酸分子的什么部位? 
连接的部位:磷酸二酯键（梯子的扶手)，不是氢键(梯子的踏板）。
结果:两个相同的黏性未端的连接
过渡:通过讨论，我们知道基因剪刀—限制酶切割目的基因，并通过基因针线-—DNA连接酶将来源不同的两个基因连接起来，但是目的基因(如人的胰岛素基因）怎样才能导入受体细胞(如大肠杆菌细胞)？
3。“基因运输工具” ——　运载体
提问：常用的运载体有哪些?

展示质粒的结构模式图,介绍
探究4：充当运载体应该具有什么特点？
作用：将外源基因送入受体细胞.
具备的条件:能在宿主细胞内复制并稳定地保存;具有多个限制酶切点；具有某些标记基因。　种类:质粒、噬菌体和动植物病毒。
问题：那么基因工程具体是如何进行操作的呢？
播放基因工程操作的基本步骤的动画
归纳基因工程操作的基本步骤（四步曲):
（1）提取目的基因ﻫ   目的基因的提取途径：两条，一条是从供体细胞的DNA中直接分离基因；另一种是人工合成基因。ﻫ  （2)目的基因与运载体结合（以质粒为运载体）。ﻫ      目的基因与运载体结合的结果可能有三种情况：目的基因与目的基因结合，质粒与质粒结合，目的基因与质粒结合. ﻫ  （3）将目的基因导入受体细胞。ﻫ    导入方法：借鉴细菌或病毒侵染细胞的途径。ﻫ   　导入过程：运载体为质粒,受体细胞为细菌。ﻫ  (4）目的基因的检测和表达ﻫ      检测：通过检测标记基因的有无，来判断目的基因是否导入.
表达:通过特定性状的产生与否来确定目的基因是否表达.
探究５：请大家根据基因工程操作的基本步骤（四步曲），设计如何获得“抗虫棉”？ 
设问:请一位同学总结今天的课堂内容。
设疑:基因工程在实际应用领域中有何发展前景?请大家在课外查阅或上网收集基因工程的应用相关资料.

反馈练习
布置作业
个别提问 回答.
讨论，疑问？
学生欣赏，惊讶

学生思考总结“抗虫棉”是怎样产的?”

阅读教材，寻找答案，回答

相互讨论、交流用基因工程关键步骤和需要的工具

阅读课文，回答并举例说明。

思考回答

学生观察，理解

学生动手实践,展示成果

学生回答

学生思考，回答

 培养学生的分析能力

利用课外资料吸引学生的注意力,引起学生的兴趣,同时培养学生的观察能力和总结能力。

 通过展示问题‘引导学生讨论、交流从而培养学生分析问题的能力和归纳总结能力。

打比方使内容通俗化、形象化，利于学生理解

通过展示问题‘引导学生讨论、交流从而培养学生分析问题的能力和归纳总结能力.

通过学生自己动手,激起学生的兴趣,同时更加直观的了解知识,加深对知识的理解。
利用插图，结合阅读课本，归纳载体必须具备条件的认识，培养学生归纳总结能力,从而加深学生的记忆。
激发学生的兴趣，活跃课堂气氛，体现基础知识的准确运用，在运用中加深对基础知识的深层次理解,同时加强学生的合作精神

九、板书设计
第6章   第2节    基因工程及其应用—基因工程的原理（第１课时）
(一）基因工程的概念（原理、操作水平、产生结果)
（二）基因工程的操作工具
   1.基因剪刀-限制酶
   2.基因针线—DNＡ连接酶
   3。 基因运载工具—运载体
(三) 基因工程操作步骤（四步曲）
十、教学评价：
１） 巧妙布置预习作业,化“复杂”为“简约”。由于基因工程内容上的“高”与“新”,处理不好,会提高学习难度，令学生视高科技为畏途，致使教学流于形式。所以在课前以学生较为熟悉的转基因抗虫棉的培育过程案例为预习作业,使学生首先从整体上了解基因工程的四个步骤，起到了突破难点及培养自学能力的目的.
2)巧妙运用插图及多媒体技术，化“抽象”为“形象".对于基因工程，学生接触得少，只运用文字来教学会感到很抽象。如在讲授如何构建基因文库时，教师会提供一幅非常形象的插图，结合图文提出相应问题，诱导学生思考，从而把学习的注意力从简单的死记硬背引导到分析、批判、创新等有利于学生终身发展的能力上来。
3）巧妙利用概念图串联知识，化“部分”为“整体"。概念不可能单独存在,每个概念都必须根据与之有关的其他概念间的关系才能确定其准确的含义。通过分步探讨，学生已经对基因工程每一步操作的原理、方法和过程做到了理解，但并未从整体上把握到基因工程的全过程,教师可以指导学生构建概念图，将零散的知识进行归纳，把已掌握的知识显性化、可视化，实现新课程有效教与学的策略。

1.1基因工程的基本工具练习题
一、选择题
1、在基因工程中使用的限制性核酸内切酶，其作用是( 　 )
　Ａ、将目的基因从染色体上切割出来 Ｂ、识别并切割特定的DＮA核苷酸序列
Ｃ、将目的基因与运载体结合D、将目的基因导入受体细胞
2、下列四条ＤＮA分子,彼此间具有粘性末端的一组是　( 　 )
T A G G
C C A T
T A C C

G G T A

①②

③④

A．①② 　　Ｂ．②③　　 C。③④　　　Ｄ．②④
3、基因工程是DNA分子水平的操作,下列有关基因工程的叙述中,错误的是（ 　 　）
　A、限制酶只用于切割获取目的基因、载体与目的基因必须用同一种限制酶处理
C、基因工程所用的工具酶是限制酶,DNA连接酶
D、带有目的基因的载体是否进入受体细胞需检测
４、下列有关基因工程的叙述,正确的是：（ )
A．ＤNA连接酶的作用是将两个黏性末端的碱基连接起来
B．目的基因导入受体细胞后，受体细胞即发生基因突变
C.目的基因与运载体结合的过程发生在细胞外
Ｄ．常使用的运载体有大肠杆菌、噬菌体和动植物病毒等
5、下列关于ＤＮA连接酶的叙述中,正确的是 （　　 ）
Ａ.　DNA连接酶连接的是两条链碱基对之间的氢键
B. DＮA连接酶连接的是黏性末端两条链主链上的磷酸和脱氧核糖
C。 ＤNA连接酶连接的是黏性末端两条链主链上的磷酸和核糖
D。 同一种DNA连接酶可以切出不同的黏性末端
６、实施基因工程第一步的一种方法是把所需的基因从供体细胞内分离出来,这要利用限制性内切酶。从大肠杆菌中提取的一种限制性内切酶EcｏｒI，能识别DNA分子中的GAATＴＣ序列,切点在G与A之间.这是应用了酶的 　　 　 　 　　 （　　 ）
Ａ.高效性 　B.专一性 Ｃ.多样性 　 Ｄ。催化活性受外界条件影响
7、下列有关质粒的叙述，正确的是　　 　 　 　 　 　 （ 　　)
A.质粒是广泛存在于细菌细胞中的一种颗粒状细胞器
B．质粒是细菌细胞质中能自主复制的小型环状DＮＡ分子
Ｃ．质粒只有在侵入宿主细胞后才能在宿主细胞内复制
D.细菌质粒的复制过程一定是在宿主细胞外独立进行的
8、右图所示为限制酶切割某DNA分子的过程，从图中可知，该限制酶能识别的碱基序列及切点是 　 A.ＣTTAAG,切点在C和T之间 　 B。CTTＡAG，切点在G和Ａ之间　 　C.GAAＴTＣ,切点在G和Ａ之间 D。GＡAＴＴC，切点在C和Ｔ之间

９、关于右图DNA分子片段的说法正确的是( 　 ）
①
G
C
A
T
A
T
G
C
A
T
A
T
15N
14N
②
③
…
…
…
…
…
A。限制性内切酶可作用于①部位，解旋酶作用于③部位
Ｂ。②处的碱基缺失导致染色体结构的变异
Ｃ.把此DNＡ放在含15N的培养液中复
制2代,子代中含15Ｎ的ＤNA占3/4
Ｄ.该DNA的特异性表现在碱基种类和(A+T）/(G+C)的比例上
１0、下列关于各种酶作用的叙述，不正确的是
Ａ．DNA连接酶能使不同脱氧核苷酸的磷酸与脱氧核糖连接
Ｂ。RNA聚合酶能与基因的特定位点结合，催化遗传信息的转录
Ｃ.一种DNA限制酶能识别多种核苷酸序列，切割出多种目的基因
Ｄ．胰蛋白酶能作用于离体的动物组织,使其分散成单个细胞
11、与“限制性内切酶”作用部位完全相同的酶是：（　）
Ａ．反转录酶        B.ＲNＡ聚合酶        　C．DNＡ连接酶      D.解旋酶
12、除下列哪一项外，转基因工程的运载体必须具备的条件是：( )
A。能在宿主细胞中复制并保存         B。具有多个限制酶切点，以便与外源基因连接
Ｃ.具有标记基因，便于进行筛选       D。是环状形态的DＮA分子
1３、下列黏性未端属于同一限制酶切割而成的是

Ａ．①②B。①③C。①④D．②③
１4、基因工程中可用作载体的是

①质粒②噬菌体③病毒④动物细胞核
A．①②③Ｂ.①②④C．②③④D.①③④
１５.关于限制酶的说法中，正确的是
A。限制酶是一种酶，只识别ＧAＡTＴC碱基序列
Ｂ.EcoRI切割的是G—Ａ之间的氢键
C．限制酶一般不切割自身的DＮA分子，只切割外源ＤＮA
D．限制酶只存在于原核生物中
16．限制酶是一种核酸切割酶,可辨识并切割DNＡ分子上特定的核苷酸碱基序列.下图为四种限制酶BamHI，EcoRＩ，ＨiｎdⅢ以及ＢglⅡ的辨识序列。箭头表示每一种限制酶的特定切割部位，其中哪两种限制酶所切割出来的DNA片段末端可以互补黏合？其正确的末端互补序列为何?

A．BaｍHI和EcoＲＩ;末端互补序列—AATT—
B.ＢａmHＩ和HiｎdⅢ；末端互补序列—GATC-
C.EcｏRI和HindⅢ;末端互补序列-ＡATT—
D．BamHI和BglII；末端互补序列—GATC-
　 １7．镰刀型细胞贫血症的病因是血红蛋白基因的碱基序列发生了改变.检测这种碱基序列改变必须使用的酶是（）
A。解旋酶B。ＤＮA连接酶C.限制性内切酶D.RＮA聚合酶
1８.DNA连接酶催化的反应是
Ａ.DNA复制时母链与子链之间形成氢键Ｂ。黏性末端碱基之间形成氢键
C。两个DＮA片段黏性末端之间的缝隙的连接 Ｄ.A、B、C都不正确
19．在受体细胞中能检测出目的基因是因为
A．目的基因上有标记Ｂ．质粒具有某些标记基因
C．重组质粒能够复制D。以上都不正确
20．关于质粒的叙述正确的是
A.质粒是能够自我复制的环状DNA分子 B.质粒是唯一的载体
C.重组质粒是目的基因Ｄ。质粒可在宿主外单独复制
二、非选择题
２１.下图为DNＡ分子的切割和连接过程。
（1)EcoRI是一种     酶，它识别的序列
是          ，切割位点是     
与      之间的              键。
切割结果产生的DNA片段末端形式为        .
（2）不同来源ＤNＡ片段结合，在这里需要的酶应
是        酶,此酶的作用是在       
与        之间形成       键。
有一种能连接平末端的ＤNA连接酶是   。
22.番茄在运输和贮藏过程中，由于过早成熟而易腐烂。
应用基因工程技术，通过抑制某种促进果实成熟激素的
合成，可使番茄贮藏时间延长，培育成耐贮藏的番茄新品
种.这种转基因番茄已于19９3年在美国上市,请回答：　　
(１）促进果实成熟的重要激素是    。
（２）在培育转基因番茄的操作中，所用的基因的“剪刀”是　,基因的“针线”是,基因的“运输工具”是。
（3）与杂交育种、诱变育种相比，通过基因工程来培育新品种的主要优点是、
23。下图是利用基因工程办法生产人白细胞干扰素的基本过程图，据图回答:

(1）①过程需要__＿_______＿_＿__酶的参与。
(２)②物质是从大肠杆菌分离出的＿＿＿＿__＿____＿_____。其化学本质是____＿____＿_＿_＿＿_,它必须能在宿主细胞中______＿＿＿＿＿______＿____＿___.
（３）③过程表明目的基因＿_______＿______＿_________。

答案:１-５ＢＤＡCB 　 　 ６—-１0BBCAC 　　　１1－——15 ＣDBAC

　 １６-－20DCDBA

2１、(１）限制酶   GAAＴTC  鸟嘌呤脱氧核苷酸  腺嘌呤脱氧核苷酸  磷酸二酯  黏性末端 

（2）DNA连接 鸟嘌呤脱氧核苷酸  腺嘌呤脱氧核苷酸   磷酸二酯 　Ｔ4ＤＮA连接酶

22、 (１)乙烯　 　（2）限制酶 DNA连接酶　 运载体 　(３)定向改变生物的遗传性状 　　克服远缘杂交不亲和的障碍

2３.（8分)（１）限制性内切酶(2分)　 （２）质粒（1分)DＮA（１分)复制并

稳定地保存（2分) 　 (３）在大肠杆菌内表达(2分)

Excel表格的基本操作
目 录
技巧1、单元格内强制换行
技巧2、锁定标题行
技巧3、打印标题行
技巧4、查找重复值
技巧5、删除重复值
技巧6、快速输入对号√
技巧7、万元显示
技巧8、隐藏0值
技巧9、隐藏单元格所有值。
技巧10、单元格中输入00001
技巧11、按月填充日期
技巧12、合并多个单元格内容
技巧13、防止重复录入
技巧14、公式转数值
技巧15、小数变整数
技巧16、快速插入多行
技巧17、两列互换
技巧18、批量设置求和公式
技巧19、同时查看一个excel文件的两个工作表。
技巧20：同时修改多个工作表
技巧21：恢复未保存文件
技巧22、给excel文件添加打开密码
技巧23、快速关闭所有excel文件
技巧24、制作下拉菜单
技巧25、二级联动下拉
技巧27、删除空白行
技巧28、表格只能填写不能修改
技巧29、文字跨列居中显示
技巧30、批注添加图片
技巧31、批量隐藏和显示批注
技巧32、解决数字不能求和
技巧33、隔行插入空行
技巧34、快速调整最适合列宽
技巧35、快速复制公式
技巧36、合并单元格筛选
技巧1、单元格内强制换行
在单元格中某个字符后按alt+回车键，即可强制把光标换到下一行中。

技巧2、锁定标题行
选取第2行，视图 - 冻结窗格 - 冻结首行（或选取第2行 - 冻结窗格）冻结后再向下翻看时标题行始终显示在最上面。

技巧3、打印标题行
如果想在打印时每一页都显示标题，页面布局 - 打印标题 - 首端标题行：选取要显示的行

技巧4、查找重复值
选取数据区域 - 开始 - 条件格式 - 突出显示单元格规则 - 重复值。
显示效果：

技巧5、删除重复值
选取含重复值的单元格区域，数据 - 删除重复值。

技巧6、快速输入对号√
在excel中输入符号最快的方式就是利用 alt+数字 的方式，比如输入√，你可以：
按alt不松，然后按小键盘的数字键： 41420
技巧7、万元显示
在一个空单元格输入10000（建议设置数字格式和边框） - 复制它 - 选择性粘贴 - 运算：除

转换后

技巧8、隐藏0值
表格中的0值如果不想显示，可以通过：文件 - excel选项 - 高级 - 在具有零值的单元格

技巧9、隐藏单元格所有值。
如果要隐藏单元格的值，选取该区域，右键 - 设置单元格格式 - 数字 - 自定义 - 右侧文本框中输入三个分号 ;;;

技巧10、单元格中输入00001
如果在单元格中输入以0开头的数字，可以输入前把格式设置成文本格式，如果想固定位数（如5位）不足用0补齐，可以：
选取该区域，右键 - 设置单元格格式 - 数字 - 自定义 - 右侧文本框中输入 00000
输入1即可显示00001

技巧11、按月填充日期
日期所在单元格向下拖动复制后，打开粘贴列表，选取“以月填充”

技巧12、合并多个单元格内容
把列宽调整成能容易合并后字符，然后选取合并的区域 - 开始 - 填充 - 两端对齐

合并后：

技巧13、防止重复录入
选取要防止重复录入的单元格区域，数据 - 有效性 - 自定义 - 公式：

如果重复录入，会提示错误并清除录入内容

技巧14、公式转数值
选取公式所在区域，复制 - 粘贴 - 粘贴为数值

技巧15、小数变整数
选取数字区域，ctrl+h打开替换窗口，查找 .* ，替换留空 然后点全部替换即可。

技巧16、快速插入多行
当你选取行并把光标放在右下角，按下shift键时，你会发现光标会变成如下图所示形状。

这时你可以向拖拉

你会发现你拖多少行，就会插入多少个空行。这种插入方法比选取一定数量的行再插入更加灵活。
技巧17、两列互换
在下面的表中，选取C列，光标放在边线处，按shift同时按下鼠标左键不松，拖动到B列前面，当B列前出现虚线时，松开鼠标左键即完成互换。
放在边线

按左键不松拖动到B列前

完成

技巧18、批量设置求和公式
选取包括黄色行列的区域，按alt 和 = (按alt键不松再按等号)即可完成求和公式的输入。

技巧19、同时查看一个e