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尿液检测方法学的评价

　　【关键词】 尿液检测
　　近年来，尿液分析在临床疾病诊断和治疗中越来越受到重视，特别在肾脏疾病、泌尿系统疾病、感染性疾病、循环系统疾病、肝胆系统、内分泌等疾病进行预防诊断疗效观察及预后判断尤为重要。实验方法更应及早推广标准化，更好地为临床提供准确的参考数据。现介绍如下。
　　1 标准化的前提是尿标本的要求
　　留尿时间 住院病人尿常规最好留取清晨第一次尿，也可在7：00~8：00留取尿液作为第二次晨尿。门诊或急诊患者可随时留取，但在标本容器上必须注明留取时间。
　　容器 使用清洁一次性有盖尿标本容器，改变目前敞开无盖的尿杯。容器上应贴有病人姓名、验联号(或条码)及注明标本留取时间的标签。
　　送检时间 尿标本留取后(至少30 ml)，应及时送检，以免细菌繁殖及有形成分破坏。凡留尿超过2 h、未注明留尿时间及尿量不够的标本应拒收。检验科收到合格的尿标本后应签收，在送验单上注明收到时间，并应及时检查。
　　2 实验方法
　　干化学分析法
　　检测原理 尿蛋白检测原理：采用pH指示剂，蛋白质误差法，即在pH 条件下，溴酚兰产生的阴离子与带阳离子的蛋白质结合发生颜色反应。红细胞检测原理：Hb类过氧化物酶法，Hb类过氧化物酶催化试剂块中的过氧化氢烯钴和色素原四甲替联苯胺或邻甲苯胺，后者脱氢氧化而呈色，红色深浅与血红蛋白和红细胞含量成正比。白细胞检测原理：白细胞酯酶法，白细胞试剂块中主要含有吲哚酚酯，重氮盐及其他物质，粒细胞中存在酯酶可作用于吲哚酚酯产生吲哚酚，再与重氮盐发生反应形成紫色缩合物，颜色深浅与白细胞含量成正比。亚硝酸盐检测原理：采用亚硝酸盐还原法，试剂膜块中的对氨基苯砷酸，N萘基乙二胺物质与尿中的细菌反应可将硝酸盐还原为亚硝酸盐并呈色，颜色深浅与亚硝酸盐含量成正比。
　　干化学分析存在的问题 许多因素干扰干化学特别引起假阴性，如尿液中含有大量维生素C，可使红细胞呈假阴性，大剂量应用青霉素干扰尿蛋白的检测，大量尿蛋白和胆红质及庆大霉素，先锋霉素的存在使白细胞的检测假阴性。干化学白细胞检测只对粒细胞敏感，而对淋巴细胞无反应，肾移植病人，发生排异反应尿液中，以淋巴细胞为主时，假阴性。尿蛋白检测对球蛋白敏感仅为白蛋白1%~2%，对本周蛋白不反应。葡萄糖膜块只对葡萄糖产生反应，对乳糖、半乳糖、果糖及蔗糖不反应。酮体膜块对乙酰乙酸最敏感、丙酮次之，对β羟丁酸不反应。尿液在膀胱存留时间长或标本放置时间延长，导致白细胞破坏酯酶释放到尿液中，造成假阳性，而镜检阴性；肾病患者红细胞在肾脏或泌尿道破坏或尿比重过低，尿pH偏高均易造成红细胞破坏，血红蛋白释放到尿液中，造成假阳性，而镜检阴性［1］。标本要新鲜，变质尿液pH改变超过试剂缓冲能力，尿蛋白检测假阳性；标本久置，产生细菌亚硝酸盐检测假阳性，尿液污染，高浓度胆红素或使用呋喃妥因等药物时呈假阳性。
　　尿沉渣检查的标准化和自动化尿沉渣的检查内容 细胞成分：红细胞、白细胞、吞噬细胞、上皮细胞等。上皮细胞包括：小圆上皮、扁平上皮、肾小管上皮细胞、移行上皮细胞、鳞状上皮细胞、多核巨细胞等。管型：透明管型、细胞管型、颗粒管型、蜡样管型、细菌管型、结晶管型、脂肪管型、混合管型、肾功能不全管型等。结晶：无定形结晶、磷酸盐结晶、草酸钙结晶、尿酸结晶等。细菌、寄生虫、酵母菌、精子、黏液丝以及临床医生的特殊要求。
　　普通离心法 尿液倒入玻璃试管，离心，弃去上清夜，将试管底部尿沉渣混均，倾倒在玻片上，低倍计数管型，以××个/Lp报告高倍计数红细胞，白细胞以××个/HP报告，缺点：主观判断，变动性大，结果误差大，无可比性，缺乏标准化。目前许多医院仍在应用，此方法应淘汰。
　　标准镜检法 10 ml尿液离心1 500 r/min 离心5 min，弃去上清液取 ml沉渣混均后吸20 μl在尿沉渣计数板上计数红细胞，白细胞上皮细胞，细菌以××个/μl报告。但速度慢，辨认受主观因素影响，不适用于工作量大的医院不能在2 h内完成大量尿沉渣检测。
　　尿沉渣工作站 就是将UDS流式自动染色尿沉渣仪，射像显微镜，沉渣计数板，电脑组成一体。包括标准定量流动计数室，自动染色进样全程键盘控制，自动强制清洗，带盖尿杯水平离心机，图像电脑打印。但要强调标本最好晨尿，女性留后段尿，离心力，离心时间，沉渣留取量标准化。方法：尿液倒入专用刻度离心管10 ml离心，1 500 r/min 离心5 min弃取上清夜，将沉渣混均。将工作软件装在电脑上，打开尿沉渣工作站后，依次打开外设射像显微镜。新建标本号，输入病案号。姓名，年龄、姓名、性别、确定。点击池1或池2，及架子位置号，自动吸样200 μl自动染色进入流动计数室，观看5个视野，激活射像系统，同时电脑显示屏出现视野图像如红细胞、白细胞、上皮细胞、管型、结晶可进行抓取图像。点击××/μl,换算。出报告时，可拷贝视野图片。优点：有形成分经染色(染料为阿利新蓝-中性红)后易于辨认，与标准镜检法比较受主观因素影响小；定量出报告并带图像，提高检验的可信度；便于专家研讨。显示屏图像，特别白细胞、吞噬细胞、上皮细胞、扁平上皮细胞、小圆上皮细胞、白细胞管型、胱氨酸结晶等着色明显，便于实习生、进修人员学习及教学；工作软件设储存信息，有诊断意义的视野图像，可及时拍摄，贮存电脑中，便于查询和论证。
　　尿沉渣分析自动化 UF-100/50，是日本东亚公司最新推出，按流式细胞仪原理设计一种新型尿沉渣分析仪，尿液不用离心，利用颗粒中DNA及细胞膜与两种染料结合，然后鞘流作用下，尿经液流聚焦使有形成分有序吸入测定管后，同时检测电阻抗，激光照射后发射的荧光强度和在前向角测定的散射激光强度以及脉冲时间，再用电脑加以综合分析。屏幕上显示各种散点图、直方图。由于各种细胞、管型细菌等的大小、形状、内部结构和结合荧光染料的多少不同。从而仪器可自动分析出红细胞、白细胞、管型。上皮细胞和细菌的定量参数。还可测定电导率，用以间接推算比重，同时可提示参数如病理管型、小圆上皮细胞酵母样菌、结晶、精子(提示应进行尿沉渣工作站镜检)及红细胞信息［2］。优点：该仪器使用简单，快速，不用离心，重复性好。而且可提供一般不为工作人员注意的细菌；能计算红细胞、白细胞数量外，还能给出红细胞均一性和非均一性的百分比等实用的参数，对泌尿系统疾病的诊断、鉴别诊断、疗效观察具有重要临床应用价值［3］。对鉴别血尿来源(肾小球，肾小管及下泌尿道)有参考价值［4，5］，避免使用相差显微镜鉴别主观影响；白细胞有助于诊断急慢性感染，白细胞大于60/μl为急性感染，白细胞大于10/μl为慢性感染；尿液的电导率反映渗透压的水平，从而能间接了解肾的功能状态；可作为疾病诊断和疗效观察的依据。可筛查一部分正常标本免于镜检，适用工作量较大的医院。缺点：若细菌较多，聚集易被误认为红细胞，标本收集严格可以避免(即尿液在非冷藏条件放置超过2 h，细菌增加，有形成分数量减少。不用于检测)。黏液丝易被认为管型；酵母菌易被认为红细胞。该仪器不能准确区分管型的类型，不能区分结晶和滴虫；对移行上皮细胞，肿瘤细胞的鉴别有困难。目前仍属于过筛仪器，不能完全取代镜检。
　　上述表明：干化学分析检测细胞内涵物来确定细胞的有无，适用于健康体检和一般病人常规检查，不能作为疾病诊断和疗效观察的依据。特别是肾脏及泌尿系统各类疾病诊断与疗效观察以镜检结果作为依据(如尿结晶，尿肿瘤细胞检查)的疾病必须镜检。UF100补充干化学分析的不足，作为疗效观察的依据，但假阳性率高。目前标准化尿液分析方法：干化学分过筛，白细胞及红细胞，亚硝酸盐，蛋白质均阴性［1］，UF100有形成分的过筛：红细胞，白细胞小于25/μl，管型，上皮细胞小于2/μl细菌小于4 000/μl时，可不用镜检。其他均进入尿沉渣工作站进行形态学确认。
　　参考文献：
　　［1］ 丛玉隆，马俊龙.尿液干化学分析与显微镜检查［J］.中华医学检验杂志，1997，20.
　　［2］ 朱忠勇.尿分析进展［J］.中华医学检验杂志，1999，22.
　　［3］ 金大鸣.UF100型尿沉渣全自动检测仪评价［J］.中华医学检验杂志，1998,21(3):190.
　　［4］ Muranka K. Clinic Uses of the UF100Tm for the Diagnosis of Urinary Tract Infection Sysmex［Ｊ］．J Intern， 1996，6：4648.
　　［5］ Mclenman J，Ross M，Hankins T，et　Microscopy［Ｊ］.Its Clinic Value Sysmex J Intern， 1996，6:4143.