动物细胞工程高三一轮复习.pptx

欢迎大家莅临指导动物细胞工程动物细胞工程许玉娟许玉娟2018.1.102018.1.10考试大纲考试大纲考点考点2016全国全国2014全国全国自主命题自主命题地区地区1.动物细胞动物细胞培养与体细培养与体细胞克隆。胞克隆。2.细胞融合细胞融合与与 单克隆抗单克隆抗体。体。3.生物技术生物技术中的伦理问中的伦理问题。题。动物细胞培动物细胞培养与体细胞养与体细胞克隆克隆（15%）2016全国全国，40,15分分动物细胞融动物细胞融合与单克隆合与单克隆抗体的制备。抗体的制备。（5%）2014全国全国，40,15分分2015江苏，江苏，3,2分分2014浙江，浙江，3,6分分2013浙江，浙江，6,6分分考点一考点一.动物细胞培养动物细胞培养单个细胞细胞悬液原代培养传代培养教材教材P444550代后细胞癌变2次胰蛋白酶次胰蛋白酶动物细胞培养原理：动物细胞培养原理：_。其过程所用培养基一般。其过程所用培养基一般是是_培养基。培养基。动物细胞培养时选用幼龄动物组织或胚胎进行细胞培养，因动物细胞培养时选用幼龄动物组织或胚胎进行细胞培养，因为为_._.动物细胞培养过程中两次用到动物细胞培养过程中两次用到_，第一次的作用，第一次的作用是是_；第二次是；第二次是_，目，目的是避免动物细胞的接触抑制。的是避免动物细胞的接触抑制。将动物细胞分散成单个细胞培养的原因：将动物细胞分散成单个细胞培养的原因：保证细胞所需要的营养供应。保证细胞所需要的营养供应。保证细胞内有害代谢产物的及时排出。保证细胞内有害代谢产物的及时排出。细胞增殖细胞增殖液体液体分化程度低，增殖能力强，更易于培养。分化程度低，增殖能力强，更易于培养。胰蛋白酶胰蛋白酶将剪碎的组织分散成单个细胞将剪碎的组织分散成单个细胞将贴壁细胞从瓶壁上分离下来将贴壁细胞从瓶壁上分离下来特特 别别 提提 醒醒 微量元素微量元素1.分析命题热图，明确答题要点分析命题热图，明确答题要点 如图，为动物细胞培养过程中细胞增殖情况的变化曲线，图中B、E两点表示经筛选、分装后继续培养。据图分析：(1)原代培养和传代培养的分界点是哪个？(3)E点后细胞大多数具有异倍体核型，这样的细胞有什么特点？E点后的细胞属于细胞系，能无限增殖。点后的细胞属于细胞系，能无限增殖。(2)AB段和DE段繁殖速度缓慢的原因是什么？B点之前的培养称为原代培养，之后的培养称为传代培养。点之前的培养称为原代培养，之后的培养称为传代培养。发生了接触抑制。发生了接触抑制。癌细胞癌细胞阅读题目阅读题目 圈出关键词圈出关键词 分析考点分析考点C过程过程条件条件培养过程过程中培养过程过程中细胞变化细胞变化阅读题目阅读题目 圈出关键词圈出关键词 分析考点分析考点难难易易结结果果选取10代以内的细胞，因为：_。一般能保持正常一般能保持正常的二倍体核型的二倍体核型学生活动：课本学生活动：课本P48图，完成学案填空图，完成学案填空重组细胞重组细胞重组胚胎重组胚胎1.(2016全全国国课课标标卷卷，40)下下图图表表示示通通过过核核移移植植等等技技术术获获得得某某种种克克隆隆哺哺乳乳动动物物(二倍体二倍体)的流程。的流程。回答下列问题：回答下列问题：(1)图图中中A表表示示正正常常细细胞胞核核，染染色色体体数数为为2n，则则其其性性染染色色体体的的组组成成可可为为_。过过程程表表示示去去除除细细胞胞核核，该该过过程程一一般般要要在在卵卵母母细细胞胞培培养养至至适适当当时期再进行，去核时常采用时期再进行，去核时常采用_的方法。的方法。XX或或XY显微操作去核法显微操作去核法(2)经过多次传代后，供体细胞中经过多次传代后，供体细胞中_的稳定性会降低。的稳定性会降低。因此，选材时必须关注传代次数。因此，选材时必须关注传代次数。(3)若获得的克隆动物与供体动物性状不完全相同，从遗传物质的角度分析其若获得的克隆动物与供体动物性状不完全相同，从遗传物质的角度分析其原因是原因是_。(4)与克隆羊与克隆羊“多莉多莉(利利)”培养成功一样，其他克隆动物的成功获得也证明了培养成功一样，其他克隆动物的成功获得也证明了 _遗传物质遗传物质（核型）（核型）卵母细胞的细胞质中的遗传物质会对克隆动物的性状产生影响卵母细胞的细胞质中的遗传物质会对克隆动物的性状产生影响已经分化的已经分化的动物体动物体细胞核细胞核具有全能性具有全能性供体供体性别性别选修三选修三 P49来源来源供体核供体核卵母卵母核移植技术核移植技术阅读题目阅读题目 圈出关键词圈出关键词 分析考点分析考点1.动物细胞融合动物细胞融合(1)原理：_ 。(2)融合方法：聚乙二醇(PEG)、_ 、电激等。(3)意义：突破了 的局限，使 成为可能，也为制造_开辟了新途径。细胞膜的流动性灭活的病毒有性杂交方法远缘杂交单克隆抗体考点三、动物细胞融合与单克隆抗体的制备抗抗 体体(1)优点：特异性强、，可大量制备。2.单克隆抗体单克隆抗体(1)制备过程杂交瘤细胞杂交瘤细胞能产生特异性抗体能产生特异性抗体灵敏度高灵敏度高 妙学妙记妙学妙记1 1、制备过程的、制备过程的 “122”一融合，二筛选，二培养一融合，二筛选，二培养2、单克隆抗体的优点、单克隆抗体的优点 可、特、灵可、特、灵3 3 3 3）、两次筛选）、两次筛选）、两次筛选）、两次筛选目的是什么目的是什么目的是什么目的是什么？第第1 1次次-杂交瘤细胞（多种）。杂交瘤细胞（多种）。第第2 2次次-能产生特异性抗体的杂交瘤细胞。能产生特异性抗体的杂交瘤细胞。问题强化：问题强化：1 1）、本过程利用了哪些原理？）、本过程利用了哪些原理？免疫原理，动物细胞融合和动物细胞培养原理免疫原理，动物细胞融合和动物细胞培养原理2 2）、为什么选用小鼠骨髓瘤细胞与）、为什么选用小鼠骨髓瘤细胞与B B细胞融合？细胞融合？继承了双亲细胞的遗传物质，能无限增殖又能分泌特异性抗体。继承了双亲细胞的遗传物质，能无限增殖又能分泌特异性抗体。4 4 4 4）、为什么细胞融合过程中使用病毒需要灭活？不灭活行吗？为什么细胞融合过程中使用病毒需要灭活？不灭活行吗？为什么细胞融合过程中使用病毒需要灭活？不灭活行吗？为什么细胞融合过程中使用病毒需要灭活？不灭活行吗？灭活的病毒能使细胞膜打开，细胞发生融合，不灭灭活的病毒能使细胞膜打开，细胞发生融合，不灭活的话会感染细胞，而不能诱导细胞融合。活的话会感染细胞，而不能诱导细胞融合。1.(20141.(2014课标卷课标卷，40)40)研究者用抗原研究者用抗原(A)(A)分别免疫分别免疫3 3只小鼠只小鼠(X(X、Y Y和和Z)Z)，每只，每只小鼠免疫小鼠免疫5 5次，每次免疫一周后测定各小鼠血清抗体的效价次，每次免疫一周后测定各小鼠血清抗体的效价(能检测出抗原抗能检测出抗原抗体反应的血清最大稀释倍数体反应的血清最大稀释倍数)，结果如下图所示。，结果如下图所示。制备杂交瘤细胞，取免疫后小鼠的制备杂交瘤细胞，取免疫后小鼠的B B淋巴细胞淋巴细胞(染色体数目染色体数目4040条条)与体外培养的骨髓瘤细与体外培养的骨髓瘤细胞胞(染色体数目染色体数目6060条条)按一定比例加入试管中，再加入按一定比例加入试管中，再加入PEGPEG诱导细胞融合，经筛选培养诱导细胞融合，经筛选培养及抗体检测，得到不断分泌抗及抗体检测，得到不断分泌抗A A抗体的杂交瘤细胞。抗体的杂交瘤细胞。(1)(1)制备融合所需的制备融合所需的B B淋巴细胞时，所用免疫小鼠的血清抗体效价需达到淋巴细胞时，所用免疫小鼠的血清抗体效价需达到1600016000以上，则以上，则小鼠最少需要经过小鼠最少需要经过_次免疫后才能有符合要求的。达到要求后的次免疫后才能有符合要求的。达到要求后的X X、Y Y、Z Z这这3 3只只免疫小鼠中，最适合用于制备免疫小鼠中，最适合用于制备B B淋巴细胞的是淋巴细胞的是_小鼠，小鼠，理由是理由是_。(2)(2)细胞融合实验完成后，融合体系中除含有未融合的细胞和杂交瘤细胞外，可能还有细胞融合实验完成后，融合体系中除含有未融合的细胞和杂交瘤细胞外，可能还有_，体系中出现多种类型细，体系中出现多种类型细胞的原因是胞的原因是_。(3)(3)未融合的未融合的B B淋巴细胞经多次传代培养后都不能存活，原因是淋巴细胞经多次传代培养后都不能存活，原因是_。4YY小鼠的抗体效价最高小鼠的抗体效价最高B淋巴细胞相互融合形成的细胞，骨髓瘤细胞相互融合形成的细胞淋巴细胞相互融合形成的细胞，骨髓瘤细胞相互融合形成的细胞细胞融合是随机的，且融合率达不到细胞融合是随机的，且融合率达不到100%正常细胞不能无限增殖正常细胞不能无限增殖融合融合2.2.（海南高考）单纯疱疹病毒（海南高考）单纯疱疹病毒型型(HSV)(HSV)可引起水泡性口唇炎。可引起水泡性口唇炎。利用杂交瘤技术制备出抗利用杂交瘤技术制备出抗HSVHSV的单克隆抗体可快速检测的单克隆抗体可快速检测HSVHSV。回答下列问题：。回答下列问题：(1)(1)在制备抗在制备抗HSVHSV的单克隆抗体的过程中，先给小鼠注射一种纯化的的单克隆抗体的过程中，先给小鼠注射一种纯化的HSVHSV蛋蛋白，一段时间后，若小鼠血清中抗白，一段时间后，若小鼠血清中抗_的抗体检测呈阳性，说明小鼠体的抗体检测呈阳性，说明小鼠体内产生了内产生了_反应，再从小鼠的反应，再从小鼠的_中获取中获取B B淋巴细胞。将该淋巴细胞。将该B B淋巴细胞与淋巴细胞与小鼠的小鼠的_细胞融合，再经过筛选、检测，最终可获得所需的杂交瘤细胞，细胞融合，再经过筛选、检测，最终可获得所需的杂交瘤细胞，该细胞具有的特点是该细胞具有的特点是_。(2)(2)若要大量制备抗该蛋白的单克隆抗体，可将该杂交瘤细胞注射到小鼠的若要大量制备抗该蛋白的单克隆抗体，可将该杂交瘤细胞注射到小鼠的_中使其增殖，再从中使其增殖，再从_中提取、纯化获得。中提取、纯化获得。(3)(3)通过上述方法得到的单克隆抗体可准确地识别这种通过上述方法得到的单克隆抗体可准确地识别这种HSVHSV蛋白，其原因是蛋白，其原因是该抗体具有该抗体具有_和和_等特性。等特性。HSV蛋白蛋白体液免疫体液免疫脾脏脾脏骨髓瘤骨髓瘤无限增殖且产生特异性抗体无限增殖且产生特异性抗体腹腔腹腔腹水腹水灵敏度高灵敏度高特异性强特异性强单克隆抗体单克隆抗体易错易错清零清零 易易错点错点1 1动物细胞培养时，动物细胞培养时，可可使用使用胰蛋白酶胰蛋白酶或或胃蛋白酶胃蛋白酶。胃蛋白酶适宜胃蛋白酶适宜pHpH约为约为1.81.8。胰蛋白酶为胰蛋白酶为7.27.27.87.8，而动物细胞培养的适宜，而动物细胞培养的适宜pHpH为为7.27.27.47.4。易易错点错点2 2动物细胞培养液中加入动物细胞培养液中加入5%CO5%CO2 2的目的是维持气体平衡或用于呼吸的目的是维持气体平衡或用于呼吸。目的是目的是“维持培养液的维持培养液的pHpH”。易易错点错点3 3选择选择MM末末期期的卵母细胞作核移植的受体细胞的卵母细胞作核移植的受体细胞。MM中期中期的卵母细胞，此时具备受精能力，细胞质中的物质能刺激融的卵母细胞，此时具备受精能力，细胞质中的物质能刺激融合后重组细胞进行分裂分化，形成重组胚胎。合后重组细胞进行分裂分化，形成重组胚胎。易易错点错点4 4混淆原代培养与传代培养混淆原代培养与传代培养(1)(1)原代培养：细胞悬液第一次在瓶中培养，没有分瓶前的细胞培养。原代培养：细胞悬液第一次在瓶中培养，没有分瓶前的细胞培养。(2)(2)传传代代培培养养：原原代代培培养养的的细细胞胞由由于于空空间间不不足足或或细细胞胞密密度度过过大大导导致致接接触触抑抑制制，需重新用胰蛋白酶处理，进行分瓶扩大培养，即传代培养。需重新用胰蛋白酶处理，进行分瓶扩大培养，即传代培养。动物细胞融合动物细胞融合单克隆抗体的制备单克隆抗体的制备动物细胞培养动物细胞培养动物体细胞核移植技术动物体细胞核移植技术胚胎工程胚胎工程动物细胞工程动物细胞工程小结小结谢谢大家