红细胞计数检验.pptx

第二章第二章/第一节红细胞检查第一节红细胞检查(jinch)(jinch)第一页，共四十五页。第二页，共四十五页。第三页，共四十五页。第四页，共四十五页。正常情况正常情况(qngkung)下，红细胞生成与破坏保持动态平衡，下，红细胞生成与破坏保持动态平衡，血液中红细胞血液中红细胞数量数量保持在相对恒定的范围。保持在相对恒定的范围。血液中红细胞数量可血液中红细胞数量可 通通过红细胞计数过红细胞计数(j sh)获得获得 第五页，共四十五页。红细胞计数红细胞计数(j sh)（red blood cell count,RBC）n测定单位测定单位(dnwi)(dnwi)体积血液中红细胞的数量体积血液中红细胞的数量n诊断贫血及红细胞增多的指标之一诊断贫血及红细胞增多的指标之一n红细胞计数的方法红细胞计数的方法 n显微镜计数法显微镜计数法 n血液血液(xuy)(xuy)分析仪法分析仪法第六页，共四十五页。n显微镜计数法（重点）显微镜计数法（重点）n用等渗液稀释血液后，滴入血用等渗液稀释血液后，滴入血细胞计数板，计数一定细胞计数板，计数一定(ydng)范范围内的红细胞，经换算得每升围内的红细胞，经换算得每升血液中的红细胞数。血液中的红细胞数。检测检测(jin c)原理原理 RBCRBC未排除未排除白细胞数量白细胞数量(shling)(shling)影响影响第七页，共四十五页。n10ul末梢血或末梢血或EDTA抗凝静脉血抗凝静脉血n加入加入2ml等渗液中，混匀等渗液中，混匀n混悬液充入混悬液充入改良牛鲍计数改良牛鲍计数(j sh)板板n高倍镜下计数中央大方格的四角及中央五个中高倍镜下计数中央大方格的四角及中央五个中方格内的红细胞总数方格内的红细胞总数A。n换算？换算？操作操作(cozu)RBC/L=（A/5)2510106200 =(A/100)1012第八页，共四十五页。Neubauer计数(j sh)盘第九页，共四十五页。血液血液(xuy)分析仪法分析仪法n采用电阻采用电阻(dinz)抗法或激光检测法抗法或激光检测法第十页，共四十五页。方法学评价方法学评价(pngji)方法方法 优点优点 缺点缺点 适用范围适用范围 显微镜显微镜计数法计数法 传统方法，设传统方法，设备简单，廉价备简单，廉价 费时费力，费时费力，精密度低精密度低 参考方法；分析参考方法；分析仪异常结果复核仪异常结果复核 血液分血液分析仪法析仪法操作便捷，操作便捷，易于标准化，易于标准化，精密度高精密度高 价贵；环境价贵；环境要求较高要求较高 健康人群普查；健康人群普查；大批量标本筛检大批量标本筛检 第十一页，共四十五页。质量保证（显微镜法）质量保证（显微镜法）n技术误差技术误差(wch)n仪器误差仪器误差n分布误差分布误差n显微镜法红细胞计数显微镜法红细胞计数(j sh)误差来源有三个误差来源有三个第十二页，共四十五页。稀释倍数不当稀释倍数不当2血液凝固血液凝固4采血部位不当采血部位不当3 1充液不当充液不当3 3技术技术(jsh)误差误差 第十三页，共四十五页。参考值参考值n成年男性成年男性：（：（4.095.74）1012/Ln成年女性成年女性(nxng)：（：（3.685.13）1012/Ln新生儿：（新生儿：（5.26.4）1012/Ln婴儿：婴儿：（4.04.3）1012/Ln儿童：儿童：（4.04.5）1012/LRBC存在年龄存在年龄与性别与性别(xngbi)的差的差异异第十四页，共四十五页。临床意义临床意义RBC参考值上限参考值上限(shngxin)，RBC增增多多RBC参考值下限，即贫血参考值下限，即贫血生理性生理性变化变化(binhu)病理性病理性变化变化(binhu)第十五页，共四十五页。生理性增多生理性增多(zn du)生理性缺氧(qu yn)引起第十六页，共四十五页。6个月-2岁婴儿(yng r)第十七页，共四十五页。n相对性增多相对性增多：见于呕吐：见于呕吐(u t)、高热等引起暂时性、高热等引起暂时性血液浓缩。血液浓缩。通过补液，血容量恢复正常，红细胞增多即消失。n绝对性增多绝对性增多：继发性增多，由继发性增多，由EPOEPO代偿性或代偿性或非代偿性增高非代偿性增高(znggo)(znggo)引引起。起。原发性增多，红细胞系统异常增殖性疾病。原发性增多，红细胞系统异常增殖性疾病。病理性增多病理性增多(zn du)第十八页，共四十五页。第十九页，共四十五页。第二十页，共四十五页。病理性减少病理性减少(jinsho)(jinsho)（贫血）（贫血）3 13 23 3生成生成(shn chn)减少减少 破坏破坏(phui)过过多多 血管丢失血管丢失 贫血：红细胞计数、血红蛋白测定或血细胞比容贫血：红细胞计数、血红蛋白测定或血细胞比容低于参考值下限。低于参考值下限。病因学分类病因学分类第二十一页，共四十五页。红细胞生成红细胞生成(shn chn)(shn chn)减减少少 n骨髓骨髓(su)造血功能减退或衰竭：再生障碍造血功能减退或衰竭：再生障碍性贫血。性贫血。n造血物质造血物质(wzh)缺乏或利用障碍：肾性贫血、缺乏或利用障碍：肾性贫血、缺铁性贫血，巨幼细胞性贫血。缺铁性贫血，巨幼细胞性贫血。第二十二页，共四十五页。n细胞内在缺陷细胞内在缺陷(quxin)（遗传性缺陷（遗传性缺陷(quxin)）膜缺陷、酶缺陷、血红蛋白异常致红细胞寿命缩短。膜缺陷、酶缺陷、血红蛋白异常致红细胞寿命缩短。n细胞外在异常（获得性因素）细胞外在异常（获得性因素）免疫性因素：输血血型不合、新生儿溶血病等。免疫性因素：输血血型不合、新生儿溶血病等。非免疫性因素：机械损伤、化学物理因素、寄生虫及脾亢非免疫性因素：机械损伤、化学物理因素、寄生虫及脾亢等等。红细胞破坏红细胞破坏(phui)过多过多第二十三页，共四十五页。血液血液(xuy)丢失：丢失：急、慢性失血性贫血急、慢性失血性贫血第二十四页，共四十五页。外伤外伤(wishng)引发的出血引发的出血第二十五页，共四十五页。血红蛋白血红蛋白(xuhng dnbi)（hemoglobin，Hb）n在有核红及网织红内合成在有核红及网织红内合成n是红细胞胞浆内的呼吸载体蛋白是红细胞胞浆内的呼吸载体蛋白nHb在成熟红细胞内分布特点（近胞膜处多，中在成熟红细胞内分布特点（近胞膜处多，中心部少）决定了红细胞的双凹圆盘形状心部少）决定了红细胞的双凹圆盘形状n合成速度合成速度(sd)受促红细胞生成素（受促红细胞生成素（EPO）与雄激素）与雄激素调节调节第二十六页，共四十五页。Hb（四聚体）（四聚体）珠蛋白珠蛋白血红素血红素2条条链链2条非条非链链原原卟啉卟啉铁原子铁原子(yunz)血红蛋白血红蛋白(xuhng dnbi)组成组成 第二十七页，共四十五页。第二十八页，共四十五页。第二十九页，共四十五页。血液中血红蛋白的存在血液中血红蛋白的存在(cnzi)(cnzi)形式形式 存在形式存在形式 所占比例所占比例还原血红蛋白（还原血红蛋白（Fe2+）正常成人正常成人(chng(chng rn)rn)99%99%氧合血红蛋白氧合血红蛋白碳氧血红蛋白碳氧血红蛋白硫化血红蛋白硫化血红蛋白高铁血红蛋白（高铁血红蛋白（Fe3+）1%1%Hb测定测定(cdng)即测定即测定(cdng)血液中血液中各种血红蛋白各种血红蛋白的总浓度。的总浓度。第三十页，共四十五页。n血液的物理特性：比重法，折射仪法血液的物理特性：比重法，折射仪法nHb的分子组成：全血铁法的分子组成：全血铁法nHb与与O2可逆性结合：血气可逆性结合：血气(xuq)分析法分析法nHb衍生物光谱特点：衍生物光谱特点：HiCN，SDS-Hb等等检测检测(jin c)原理原理 第三十一页，共四十五页。HiCN法检测法检测(jin c)原理原理n红细胞被溶血剂破坏后，高铁氰化钾可将各种红细胞被溶血剂破坏后，高铁氰化钾可将各种血红蛋白（血红蛋白（SHb除外）氧化为高铁血红蛋白除外）氧化为高铁血红蛋白（Hi），后者与试剂中的），后者与试剂中的 CN-结合生成棕红结合生成棕红色的氰化高铁血红蛋白（色的氰化高铁血红蛋白（HiCN）。在）。在540nm处测定处测定HiCN的吸光度，直接换算的吸光度，直接换算(hun sun)Hb浓度或在标准曲线上查得浓度或在标准曲线上查得Hb浓度。浓度。第三十二页，共四十五页。n20ul血液加入血液加入5ml转化液中，充分溶转化液中，充分溶血转化后，以转化液调零，测定标本血转化后，以转化液调零，测定标本(biobn)（HiCN）在）在540nm的吸光度的吸光度A。n计算计算操作操作(cozu)n直接计算（符合直接计算（符合WHO标准标准(biozhn)的分光光度计）的分光光度计）Hb A6445844000251A367.7n以以 HiCN参考液绘制标准曲线，利用吸光度参考液绘制标准曲线，利用吸光度 A在标准曲线上查出在标准曲线上查出Hb浓度浓度第三十三页，共四十五页。方法学评价方法学评价(pngji)n缺点：缺点：试剂试剂(shj)(shj)有毒、有毒、高高WBC造成试剂造成试剂混浊混浊、HbCO 转化慢、不能测转化慢、不能测SHb。HiCN测定法测定法（参考（参考(cnko)方法）方法）n优点：操作简单优点：操作简单，反应速度快，产物稳定，反应速度快，产物稳定，便于质控。便于质控。第三十四页，共四十五页。方法学评价方法学评价(pngji)n优点：优点：操作简单操作简单(jindn)，试剂无毒试剂无毒，结果准，结果准确，重复性好确，重复性好。n缺点：缺点：SDS质量差异大；消光系数未定，不能质量差异大；消光系数未定，不能直接直接(zhji)计算计算Hb浓度浓度；不能测定；不能测定SHb；SDS破破坏白细胞坏白细胞。SDS-Hb测定法测定法（HiCN替代方法）替代方法）第三十五页，共四十五页。方法学评价方法学评价(pngji)n优点：优点：试剂试剂(shj)简易无毒、呈色稳定、准简易无毒、呈色稳定、准确性与精密性较高。确性与精密性较高。n缺点：缺点：575nm波长波长(bchng)比色，比色，血液分析血液分析仪上应用受限，不能转化仪上应用受限，不能转化HbF。AHD575测定法测定法 第三十六页，共四十五页。方法学评价方法学评价(pngji)n优点优点(yudin)：准确度、精密度较高。准确度、精密度较高。n缺点：缺点：试剂试剂(shj)(shj)有毒、有毒、HbCO HbCO 转化慢。转化慢。HiN3测定法测定法第三十七页，共四十五页。方法学评价方法学评价(pngji)n优点：优点：溶血溶血(rn xu)强，不破坏白细胞，适强，不破坏白细胞，适用于血液分析仪。用于血液分析仪。n缺点缺点(qudin)：精密度、准确度低。精密度、准确度低。CATB测定法测定法 第三十八页，共四十五页。质量保证（比色法）质量保证（比色法）n标本：引起血清浊度增加的因素致标本：引起血清浊度增加的因素致Hb假性增高。假性增高。n器材及试剂：定期校准仪器器材及试剂：定期校准仪器(yq)(yq)，选用合格的微量，选用合格的微量采血管和刻度吸管，保证试剂质量。采血管和刻度吸管，保证试剂质量。n技术操作：控制技术误差。技术操作：控制技术误差。n废弃物：妥善处理废液。废弃物：妥善处理废液。第三十九页，共四十五页。参考值参考值n成年男性成年男性(nnxng)：131172 g/Ln成年女性：成年女性：113 151 g/Ln新生儿：新生儿：180190 g/Ln婴儿：婴儿：110120 g/Ln儿童：儿童：120140 g/Ln老年（老年（70岁）：男性岁）：男性 94122 g/L 女性女性 87112 g/L Hb存在年龄存在年龄与性别与性别(xngbi)的差的差异异第四十页，共四十五页。临床意义（同红细胞计数临床意义（同红细胞计数(j sh)）n判断贫血程度优于红细胞计数判断贫血程度优于红细胞计数n临床应用注意事项临床应用注意事项 nHb和和RBC不一定正确不一定正确(zhngqu)反应全身红细胞总容量反应全身红细胞总容量的变化。的变化。n某些贫血，某些贫血，Hb和和RBC减少程度可不一致，同减少程度可不一致，同时测定时测定Hb和和RBC，对诊断更有意义。，对诊断更有意义。第四十一页，共四十五页。贫血贫血(pnxu)程度的判定程度的判定分度分度 Hb含量含量 症状症状 轻度：轻度：91g/L正常值下限正常值下限 症状轻微症状轻微中度：中度：61g/L90g/L 活动后心悸活动后心悸(xnj)、气促、气促重度：重度：31g/L60g/L 休息时也有心悸、气促休息时也有心悸、气促极重度：极重度：30g/L 常合并贫血性心脏病常合并贫血性心脏病第四十二页，共四十五页。小结小结(xioji)HbHb测定方法学评价测定方法学评价(pngji)(pngji)RBCRBC显微镜计数法原理显微镜计数法原理(yunl)(yunl)RBCRBC计数的临床意义计数的临床意义HiCNHiCN测定法测定法原理原理第四十三页，共四十五页。第四十四页，共四十五页。内容(nirng)总结第二章/第一节红细胞检查。RBC/L=（A/5)2510106200。RBC参考值上限，RBC增多。继发性增多，由EPO代偿性或非代偿性增高引起。细胞内在缺陷(quxin)（遗传性缺陷(quxin)）。非免疫性因素：机械损伤、化学物理因素、寄生虫及脾亢等。Hb在成熟红细胞内分布特点（近胞膜处多，中心部少）决定了红细胞的双凹圆盘形状。Hb测定即测定血液中各种血红蛋白的总浓度。Hb衍生物光谱特点：HiCN，SDS-Hb等第四十五页，共四十五页。