一般毒性作用(2).ppt

第六章第六章一般一般毒性毒性(d xn)(d xn)(d xn)(d xn)作用作用Generaltoxiceffects 一一.概述概述 二二.急性毒性作用急性毒性作用 三三.局部局部(jb)(jb)毒性作用毒性作用 四四.短期、亚慢性和慢性毒性作用短期、亚慢性和慢性毒性作用 （蓄积性与耐受性）（蓄积性与耐受性）第一页，共八十八页。一般毒性：一般毒性：1.1.1.1.急性毒性急性毒性急性毒性急性毒性 （acute toxicityacute toxicityacute toxicityacute toxicity）2.2.2.2.局部局部局部局部(jb)(jb)(jb)(jb)毒性毒性毒性毒性 （localtoxicitylocaltoxicity）3.3.3.3.亚急性毒性亚急性毒性亚急性毒性亚急性毒性 （subacute toxicitysubacute toxicitysubacute toxicitysubacute toxicity）4.4.4.4.亚慢性毒性亚慢性毒性亚慢性毒性亚慢性毒性 （subchronic toxicitysubchronic toxicitysubchronic toxicitysubchronic toxicity）5.5.5.5.慢性毒性慢性毒性慢性毒性慢性毒性 （chronic toxicitychronic toxicitychronic toxicitychronic toxicity）重复重复(chngf)(chngf)暴暴露毒性露毒性 第二页，共八十八页。特殊特殊(tsh)(tsh)(tsh)(tsh)毒性：毒性：1.1.1.1.致癌致癌致癌致癌 （carcinogenicitycarcinogenicity）2.2.2.2.致突变致突变致突变致突变 （mutationmutation）如：小鼠微核试验（如：小鼠微核试验（如：小鼠微核试验（如：小鼠微核试验（mousemicronucleustestmousemicronucleustest）小鼠显性致死试验（小鼠显性致死试验（小鼠显性致死试验（小鼠显性致死试验（mousedominantlethaltestmousedominantlethaltest）大鼠染色体畸变试验（大鼠染色体畸变试验（大鼠染色体畸变试验（大鼠染色体畸变试验（ratchromosomeaberrationtestratchromosomeaberrationtest）3.3.3.3.致畸致畸致畸致畸 （teratogenesisteratogenesis）4.4.4.4.生殖发育毒性生殖发育毒性生殖发育毒性生殖发育毒性 （r r r reproductiveandeproductiveand developmentaltoxicitydevelopmentaltoxicity）5.5.5.5.药物依赖性药物依赖性药物依赖性药物依赖性 （drugdependencedrugdependence)第三页，共八十八页。一、一般毒性一、一般毒性(d xn)(d xn)作用概念和意义作用概念和意义 一般毒性评价主要目的：一般毒性评价主要目的：一般毒性评价主要目的：一般毒性评价主要目的：1.1.确定受试物毒作用表现与性质；确定受试物毒作用表现与性质；2.2.确定受试物毒作用的剂量与反应关系；确定受试物毒作用的剂量与反应关系；获得的参数有：获得的参数有：LDLD5050、LOAELLOAEL、NOAELNOAEL 3.3.确定毒作用靶器官；确定毒作用靶器官；4.4.评价毒性损害的可逆性；评价毒性损害的可逆性；5.5.了解化学药物毒作用的影响因素等。了解化学药物毒作用的影响因素等。第一节第一节概概述述第四页，共八十八页。二、一般毒性试验的动物选择二、一般毒性试验的动物选择 （一）实验动物选择（一）实验动物选择 1.1.物种物种 选择原则：选择原则：选择原则：选择原则：与人体生物学特征与人体生物学特征(tzhng)(tzhng)相似的动物；相似的动物；自然寿命不太长的动物；自然寿命不太长的动物；易于饲养与实验操作的动物；易于饲养与实验操作的动物；经济并易于获得的动物。经济并易于获得的动物。（一般选择两个物种进行试验）（一般选择两个物种进行试验）第五页，共八十八页。2.2.品系品系 一般在毒理学系列研究中应使用同一品系。一般在毒理学系列研究中应使用同一品系。3.3.级别级别(jbi)(jbi)（质量质量）级（清洁级）或级（清洁级）或级（级（SPFSPF级）的动物级）的动物 4.4.性别性别 受试物毒性如果有性别差异，应选择敏感的性别，若受试物毒性如果有性别差异，应选择敏感的性别，若没有应选择两种性别进行试验（没有应选择两种性别进行试验（/各半各半）。）。5.5.年龄与体重年龄与体重 急性试验急性试验-选择成年动物；慢性试验选择成年动物；慢性试验-刚断乳动物。同刚断乳动物。同一性别动物的起始体重差异一性别动物的起始体重差异平均体重平均体重平均体重平均体重20%20%20%20%。6.6.生理与健康状况生理与健康状况 不选择怀孕、哺乳其动物，须选择健康动物（不选择怀孕、哺乳其动物，须选择健康动物（健康观察期健康观察期健康观察期健康观察期5-75-75-75-7天天天天）。）。第六页，共八十八页。（二）染毒方式（二）染毒方式 选择原则：选择原则：选择原则：选择原则：一般选择受试物实际与人接触的途径。一般选择受试物实际与人接触的途径。一般选择受试物实际与人接触的途径。一般选择受试物实际与人接触的途径。1.1.呼吸道染毒呼吸道染毒 有：气管注入染毒有：气管注入染毒 吸入染毒（静式与动式两种）吸入染毒（静式与动式两种）2.2.消化道染毒消化道染毒 有：灌胃法、喂饲法和胶囊法。有：灌胃法、喂饲法和胶囊法。3.3.经皮染毒经皮染毒 有：表皮涂药、浸尾法。有：表皮涂药、浸尾法。4.4.注射途径注射途径 有：静脉、腹腔有：静脉、腹腔(fqing)(fqing)、肌肉、皮下、皮内等。、肌肉、皮下、皮内等。第七页，共八十八页。一、急性毒性概念一、急性毒性概念 是指是指1 1次接触或次接触或2424小时内多次接触外源化学物在小时内多次接触外源化学物在短期内所产生的健康损害作用和致死效应。短期内所产生的健康损害作用和致死效应。实验效应观察期：实验效应观察期：2 2周。周。2424小时多次染毒：小时多次染毒：毒性毒性(d xn)(d xn)很低或溶解度很低的受试物。很低或溶解度很低的受试物。一般规定：一般规定：3333次次次次/24/24/24/24小时，每次间隔小时，每次间隔小时，每次间隔小时，每次间隔4 4 4 4小时以上。小时以上。小时以上。小时以上。第二节第二节急性毒性作用急性毒性作用(zuyng)第八页，共八十八页。二、急性毒性试验的目的二、急性毒性试验的目的 1.1.评价急性毒性大小评价急性毒性大小 求出求出LDLD5050、LDLD100100、LDLD0101、LDLD0 0或或MTDMTD、LOAELLOAEL、NOAELNOAEL等。等。2.2.了解急性毒性特征（了解急性毒性特征（中毒症状与体征中毒症状与体征中毒症状与体征中毒症状与体征）3.3.为亚急性、亚慢性、慢性、致癌等试验提供剂为亚急性、亚慢性、慢性、致癌等试验提供剂量设置的依据。量设置的依据。4.4.为毒作用机制研究提供初步为毒作用机制研究提供初步(chb)(chb)线索。线索。第九页，共八十八页。用用LDLD5050作为剂量参考作为剂量参考(cnko)(cnko)依据的毒性试验依据的毒性试验 试验类别试验类别 剂量剂量(jling)(jling)设组要求设组要求 蓄积毒性试验蓄积毒性试验 1/20-1/5 1/20-1/5 LDLD5050范围设组范围设组 亚慢性试验亚慢性试验 1/20-1/5 1/20-1/5 LD LD5050作最高剂量作最高剂量 慢性慢性(致癌致癌)试验试验 1/10 1/10 LDLD5050作最高剂量作最高剂量第十页，共八十八页。三、急性毒性试验方法要点三、急性毒性试验方法要点(yodin)(yodin)（一）经典急性毒性试验（一）经典急性毒性试验 （即传统即传统即传统即传统LDLDLDLD50505050法法法法）基本要求基本要求基本要求基本要求:（OECDOECD）1.1.检疫观察检疫观察3-5d3-5d，成年健康动物（，成年健康动物（大鼠首选大鼠首选大鼠首选大鼠首选）；）；2.5-7 2.5-7个剂量组，每组个剂量组，每组1010只动物以上（只动物以上（/各半各半各半各半）；）；3.3.剂量组距合适，一般为等比级数；剂量组距合适，一般为等比级数；4.4.给药途径尽量与实际接触一致；给药途径尽量与实际接触一致；（隔夜禁食（隔夜禁食（12-14h12-14h），给药后再禁食），给药后再禁食3-43-4小时）小时）5.5.毒性毒性(d xn)(d xn)观察期至少观察期至少2 2周以上，每天观察周以上，每天观察1 1次。次。第十一页，共八十八页。LDLDLDLD50505050计算方法：计算方法：计算方法：计算方法：曲线拟合法曲线拟合法 （概率单位（概率单位(dnwi)(dnwi)法或法或BlissBliss法）法）插值法插值法 累积法累积法 寇氏法寇氏法寇氏法寇氏法 移动平均法移动平均法 霍恩霍恩霍恩霍恩(Horn)(Horn)(Horn)(Horn)法法法法-查表法查表法查表法查表法 WeilWeilWeilWeil查表法查表法查表法查表法等等第十二页，共八十八页。剂量设置依据：剂量设置依据：剂量设置依据：剂量设置依据：参考同系物或类似物的急性毒性资料；参考同系物或类似物的急性毒性资料；最大耐受致死量（最大耐受致死量（LDLD0 0）测定）测定(cdng)(cdng)；WHO WHO规定给药剂量：经口规定给药剂量：经口 5000mg/kg5000mg/kg5000mg/kg5000mg/kg 经呼吸道经呼吸道 5000ppm 5000ppm 经皮肤经皮肤 2000mg/kg 2000mg/kg 预试验测定致死剂量范围预试验测定致死剂量范围 即死亡率从即死亡率从0%0%100%100%（10%10%90%)90%)-Lork-Lork法（法（）-组距法组距法第十三页，共八十八页。改良改良改良改良LorkLorkLorkLork简化简化简化简化(jinhu)(jinhu)(jinhu)(jinhu)剂量设计方剂量设计方剂量设计方剂量设计方案案案案第十四页，共八十八页。公式：公式：i=i=（lgLDlgLD9090-lgLD-lgLD1010）/（n-1n-1）或或 i=i=（lgLDlgLD100100-lgLD-lgLD0 0）/（n-1n-1）式中：式中：i-i-为组距为组距 n-n-为设计为设计(shj)(shj)的剂量组数的剂量组数组距法确定组距法确定(qudng)(qudng)各组剂各组剂量量第十五页，共八十八页。假定某化学药物假定某化学药物(yow)(yow)LDLD100100为为2000mg/kg,LD2000mg/kg,LD0 0为为500mg/kg,500mg/kg,设设6 6个剂量组个剂量组，各染毒组的剂量是多少？，各染毒组的剂量是多少？1.1.按公式求出对数剂量组距（按公式求出对数剂量组距（I）公式：公式：I=I=（lgLDlgLD100100-lgLD-lgLD0 0）/（n-1)n-1)=（lg2000-lg500lg2000-lg500）/(6-1)/(6-1)=（3.3013.3013.3013.301-2.6992.6992.6992.699）/5/5 =0.120 =0.120 2.2.确定各组实际剂量（见下表）确定各组实际剂量（见下表）实例实例(shl)(shl)第十六页，共八十八页。某化学药物急性毒性试验剂量某化学药物急性毒性试验剂量(jling)(jling)设置设置 组别组别 剂量剂量(jling)(jling)对数对数 剂量剂量(jling)(jling)（mg/kgmg/kg）12.7012.701502.322.821662.232.941873.043.0611150.853.1811517.163.3013.3012000.02000.0注：剂量对数组距注：剂量对数组距=0.12=0.12，剂量组间的等比级数，剂量组间的等比级数=1.318=1.318第十七页，共八十八页。要求：要求：要求：要求：5 56 6个剂量组，每组动物数相等；个剂量组，每组动物数相等；死亡率呈正态分布；死亡率呈正态分布；最低剂量组死亡率最低剂量组死亡率20%20%；最高剂量组死亡率最高剂量组死亡率80%80%，各组剂量呈等比级数各组剂量呈等比级数（）。）。特点：特点：特点：特点：计算结果简便（按公式计算结果简便（按公式(gngsh)(gngsh)计算）计算）精确度高精确度高1.1.改良改良(giling)(giling)(giling)(giling)寇氏寇氏(Karber)(Karber)法法 点斜法点斜法LDLDLDLD5050(或或或或LCLCLCLC5050)计算计算(j(j(j(j sun)sun)sun)sun)第十八页，共八十八页。公式公式(gngsh)(gngsh)：lgLD lgLD5050XkXki(i(p p0.50.5)pq pq S Si i n n LDLD5050的的95%95%可信限可信限(LD(LD50501.96 S)1.96 S)LDLD5050计算公式：计算公式：式中：式中：m-lgLD m-lgLD5050;i-i-组间对数剂量差值；组间对数剂量差值；Xk-Xk-最大剂量的对数值最大剂量的对数值(shz)(shz)；q-q-存活率（存活率（q=1-pq=1-p）；）；p-p-各剂量组死亡率总和；各剂量组死亡率总和；n-n-每组动物数。每组动物数。第十九页，共八十八页。应用应用(yngyng)实例实例公式公式(gngsh)：lgLD50=1.4961-0.08(2.3-0.5)=1.3521lgLD50及其及其95%可信限为可信限为1.35211.35211.960.0213=1.31041.39381.31041.3938LD50及其及其95%可信限为可信限为22.5mg/kg22.5mg/kg（20.4424.76mg/kg）第二十页，共八十八页。要求：要求：要求：要求：4 4个剂量组，每组动物数相等个剂量组，每组动物数相等(xingdng)(xingdng)（4 4 4 4只或只或只或只或5 5 5 5只只只只）雌雄分开试验雌雄分开试验 每组剂量为固定倍数递增（每组剂量为固定倍数递增（2.152.152.152.15倍，倍，倍，倍，3.163.163.163.16倍倍倍倍）特点：特点：特点：特点：动物用量少动物用量少 结果查表可得（结果查表可得（查表可得查表可得查表可得查表可得LDLDLDLD50505050及及及及95%95%95%95%可信限范围可信限范围可信限范围可信限范围）精确度不高精确度不高2.2.霍恩霍恩(Horn)(Horn)法法 又称剂量又称剂量(jling)(jling)(jling)(jling)递递增法增法第二十一页，共八十八页。霍恩霍恩(Horn)(Horn)法查表法查表-2.15倍组距倍组距例如例如例如例如(lr)(lr)(lr)(lr)：全活：全活：全活：全活-全死剂量范围为全死剂量范围为全死剂量范围为全死剂量范围为200-1500mg/kg200-1500mg/kg200-1500mg/kg200-1500mg/kg 剂量组选择剂量组选择剂量组选择剂量组选择215,464,1000,2150(t=2)215,464,1000,2150(t=2)215,464,1000,2150(t=2)215,464,1000,2150(t=2)第二十二页，共八十八页。霍恩霍恩(Horn)(Horn)法查表法查表-3.16倍组距倍组距例如例如例如例如(lr)(lr)(lr)(lr)：全活：全活：全活：全活-全死剂量范围为全死剂量范围为全死剂量范围为全死剂量范围为180-3500mg/kg180-3500mg/kg180-3500mg/kg180-3500mg/kg 剂量组选择剂量组选择剂量组选择剂量组选择100,316,1000,3160(t=2)100,316,1000,3160(t=2)100,316,1000,3160(t=2)100,316,1000,3160(t=2)第二十三页，共八十八页。(二）急性毒性替代法二）急性毒性替代法 “3R”“3R”“3R”“3R”原则要求原则要求原则要求原则要求：替代（替代（Replacement）减少（减少（Reduction）优化（优化（Refinement）常见的替代法有：常见的替代法有：1.1.限量试验限量试验(shyn)(shyn)（limittest）2.2.固定计量法（固定计量法（fixeddosemethod）3.3.急性毒性分级法急性毒性分级法（acutetoxicclassmethod）4.4.上下法（上下法（upanddownprocedure）-序贯法序贯法第二十四页，共八十八页。使用条件：使用条件：使用条件：使用条件：受试物急性毒性很低时可采用此法。受试物急性毒性很低时可采用此法。方法要求方法要求：受试动物一般受试动物一般(ybn)(ybn)为为啮齿类动物啮齿类动物啮齿类动物啮齿类动物；24242424小时内多次小时内多次小时内多次小时内多次给予受试物；给予受试物；20202020只只只只动物，雌雄各半；动物，雌雄各半；给予最大剂量，一般为给予最大剂量，一般为10000mg/kg10000mg/kg10000mg/kg10000mg/kg；毒性观察期毒性观察期14141414天天天天；毒性评价：毒性评价：毒性评价：毒性评价：LD LD5050给药剂量（给药剂量（mg/kgmg/kgmg/kgmg/kg）1.1.1.1.限量限量限量限量(xinling)(xinling)(xinling)(xinling)试验试验试验试验第二十五页，共八十八页。方法要求：方法要求：方法要求：方法要求：（实际上是一种实际上是一种实际上是一种实际上是一种非死亡毒性评价非死亡毒性评价非死亡毒性评价非死亡毒性评价）固定剂量：固定剂量：5 5、50505050、300300300300、2000mg/kg2000mg/kg；预试验：用单性别预试验：用单性别1 1只动物只动物循序进行循序进行，接受试验前后的，接受试验前后的2 2只动只动物间隔物间隔2424小时。如一个剂量无中毒表现，其上个剂量动物死亡，小时。如一个剂量无中毒表现，其上个剂量动物死亡，需在中间需在中间(zhngjin)(zhngjin)插入剂量进行试验；插入剂量进行试验；正式试验：根据预结果，取正式试验：根据预结果，取5 5只动物进行试验；只动物进行试验；限量试验：如果限量试验：如果2000mg/kg2000mg/kg预试验和正式试验预试验和正式试验均不出现均不出现中毒表现中毒表现，试验终止，为未观察到毒性，试验终止，为未观察到毒性(U)(U)。若正式试验若正式试验5mg/kg5mg/kg出现中毒表现或死亡出现中毒表现或死亡出现中毒表现或死亡出现中毒表现或死亡，试验终止，可定，试验终止，可定为高度为高度(T+)(T+)(T+)(T+)。结果判断（结果判断（结果判断（结果判断（OECDOECDOECDOECD）：）：）：）：高毒高毒高毒高毒(T+)(T+)(T+)(T+)、有毒、有毒、有毒、有毒(T)(T)(T)(T)、有害、有害、有害、有害(H)(H)(H)(H)、未观察到毒性、未观察到毒性、未观察到毒性、未观察到毒性(U)(U)(U)(U)。2.2.2.2.固定固定固定固定(gdng)(gdng)(gdng)(gdng)剂量剂量剂量剂量法法法法第二十六页，共八十八页。FDFD法急性毒性分级法急性毒性分级(fn j)(fn j)选选定：定：第二十七页，共八十八页。3.3.3.3.急性毒性分级急性毒性分级急性毒性分级急性毒性分级(fn j)(fn j)(fn j)(fn j)法法法法注：按全球注：按全球(qunqi)(qunqi)化学品分类及标签协调制度（化学品分类及标签协调制度（GHSGHS）标准评价定级）标准评价定级第二十八页，共八十八页。要求：要求：要求：要求：先以一个剂量进行一个动物试验，如动物死亡，则以下一个较小剂先以一个剂量进行一个动物试验，如动物死亡，则以下一个较小剂量试探，若仍动物死亡则以下一个更小剂量试探；如动物存活量试探，若仍动物死亡则以下一个更小剂量试探；如动物存活(cn hu)(cn hu)，则以较大剂量试探，依次类推，最终按公式计算则以较大剂量试探，依次类推，最终按公式计算LDLD5050值。值。死亡观察为死亡观察为死亡观察为死亡观察为48484848小时，存活动物观察小时，存活动物观察小时，存活动物观察小时，存活动物观察14141414天。天。天。天。特点：特点：特点：特点：节省动物（节省动物（一般一般一般一般6-106-106-106-10只动物或以上只动物或以上只动物或以上只动物或以上）；）；适用于毒性反应快速的化学药物。适用于毒性反应快速的化学药物。4.4.4.4.序贯法（序贯法（序贯法（序贯法（-又称上又称上又称上又称上-下法）下法）下法）下法）第二十九页，共八十八页。序贯法实验序贯法实验(shyn)(shyn)计算公式：计算公式：式中：式中：n-n-使用使用(shyng)(shyng)动物总数；动物总数；x-x-每个剂量组的剂量；每个剂量组的剂量；f-f-每个剂量组动物数。每个剂量组动物数。第三十页，共八十八页。应用应用(yngyng)实例实例第三十一页，共八十八页。（三）急性毒作用观察（三）急性毒作用观察 观察记录内容：观察记录内容：中毒症状中毒症状（观察观察观察观察2 2 2 2周周周周，记录症状发生记录症状发生记录症状发生记录症状发生(fshng)(fshng)(fshng)(fshng)的时间、程度的时间、程度的时间、程度的时间、程度和持续时间等和持续时间等和持续时间等和持续时间等）；）；试验前后记录体重试验前后记录体重（每周至少称体重每周至少称体重每周至少称体重每周至少称体重1 1 1 1次次次次）；）；死亡记录死亡记录（死亡数用于计算死亡数用于计算死亡数用于计算死亡数用于计算LDLDLDLD50505050）；）；大体解剖与病理学检查等。大体解剖与病理学检查等。第三十二页，共八十八页。四、急性毒性分级四、急性毒性分级(fn(fn j)j)WHOWHOWHOWHO急性毒性分级急性毒性分级急性毒性分级急性毒性分级(fn j)(fn j)(fn j)(fn j)标准：标准：标准：标准：第三十三页，共八十八页。国内健康相关产品国内健康相关产品国内健康相关产品国内健康相关产品(chnpn)(chnpn)(chnpn)(chnpn)毒性分级毒性分级毒性分级毒性分级第三十四页，共八十八页。第三十五页，共八十八页。第三十六页，共八十八页。第三十七页，共八十八页。GHSGHS化学品急性毒性分级化学品急性毒性分级化学品急性毒性分级化学品急性毒性分级(fnj)(fnj)标准标准标准标准（20022002）第第第第4 4 4 4级上限值级上限值级上限值级上限值注：注：GHS-GHS-全球全球(qunqi)(qunqi)化学品分类及标签协调制度化学品分类及标签协调制度 （GloballyHarmonizedSystemofClassificationandLabelingofChemicals）第三十八页，共八十八页。LDLD5050评价问题评价问题 1.1.毒性大小比较毒性大小比较 LD LD5050值较大者的值较大者的95%95%可信限的下限可信限的下限LDLD5050值较小者的值较小者的95%95%可信限的上限。可信限的上限。前者的毒性小于后者前者的毒性小于后者前者的毒性小于后者前者的毒性小于后者。如果可信区间存在如果可信区间存在(cnzi)(cnzi)重叠，按公式进行重叠，按公式进行t t检验检验：公式：公式：2.2.剂量剂量-反应曲线斜率比较反应曲线斜率比较 （可分析毒性特征）（可分析毒性特征）（可分析毒性特征）（可分析毒性特征）3.LD 3.LD5050值表示值表示第三十九页，共八十八页。第四十页，共八十八页。表示表示表示表示LDLDLDLD50505050时应注意标明：时应注意标明：动物品系动物品系(pn x)(pn x)；染毒途径；染毒途径；95%95%可信限范围。可信限范围。LD LD50 50 1.96 S1.96 S 例如：异氰酸甲酯例如：异氰酸甲酯 大鼠大鼠经口经口 LD LD5050值为值为69mg/kg5.669mg/kg5.6 即即63.463.474.6mg/kg74.6mg/kg。第四十一页，共八十八页。概念：概念：局部毒性作用局部毒性作用局部毒性作用局部毒性作用又称局部损害作用，是指生物机体暴露于化学物后，又称局部损害作用，是指生物机体暴露于化学物后，在其在其接触或暴露部位接触或暴露部位接触或暴露部位接触或暴露部位造成的局部毒性损害作用，包括腐蚀性、刺激性造成的局部毒性损害作用，包括腐蚀性、刺激性与过敏性作用。与过敏性作用。目的：目的：1.1.评价化学物对眼睛、皮肤的刺激与腐蚀作用和皮肤的致敏作用及评价化学物对眼睛、皮肤的刺激与腐蚀作用和皮肤的致敏作用及其程度或等级；其程度或等级；2.2.为制定为制定(zhdng)(zhdng)化学物安全使用规范提供科学依据。化学物安全使用规范提供科学依据。第三节第三节局部局部(jb)毒性作用毒性作用第四十二页，共八十八页。一、眼睛刺激试验一、眼睛刺激试验 眼刺激性眼刺激性（eyeirritation）指眼球）指眼球(ynqi)(ynqi)表面接触受试物后所产表面接触受试物后所产生的可逆性炎性变化。生的可逆性炎性变化。眼腐蚀性眼腐蚀性（eyecorrosion）指眼球表面接触受试物后引起的）指眼球表面接触受试物后引起的不可逆性组织损伤不可逆性组织损伤 。试验方法：试验方法：Draize Draize 法（法（19441944年）年）常用动物：白兔常用动物：白兔第四十三页，共八十八页。Draize法：法：（自身对照原则）（自身对照原则）（自身对照原则）（自身对照原则）试验方法：试验方法：试验方法：试验方法：一般采用一般采用(ciyng)(ciyng)4 4只白兔，受试物以一次剂量滴入每只白兔，受试物以一次剂量滴入每只实验动物的一侧眼结膜囊内（只实验动物的一侧眼结膜囊内（0.1ml0.1ml），以生理盐水处理另一侧眼），以生理盐水处理另一侧眼作为自身对照。在规定的时间内观察对兔眼的刺激和腐蚀作用程度，作为自身对照。在规定的时间内观察对兔眼的刺激和腐蚀作用程度，并按规定的分级标准进行评分。并按规定的分级标准进行评分。观察指标：观察指标：观察指标：观察指标：结膜结膜(发红、球结膜水肿和分泌物发红、球结膜水肿和分泌物)，角膜角膜(混浊程混浊程度和范围度和范围)，虹膜虹膜(充血、肿胀和角膜周围充血充血、肿胀和角膜周围充血)。实验期限：实验期限：实验期限：实验期限：一般为一般为7 7天，必要时延长至天，必要时延长至2121天天(观察期能足已评价观察期能足已评价刺激是否存在可逆性刺激是否存在可逆性)。注意事项：注意事项：注意事项：注意事项：如如72h72h眼刺激反应仍不消退时，需另取眼刺激反应仍不消退时，需另取4 4只白兔观察洗眼效果，即滴入受试物后分别在只白兔观察洗眼效果，即滴入受试物后分别在4s4s和和30s30s时，用生理盐水洗眼时，用生理盐水洗眼5min5min，观察洗眼后的眼睛反应。（，观察洗眼后的眼睛反应。（洗眼效果试验洗眼效果试验洗眼效果试验洗眼效果试验）第四十四页，共八十八页。第四十五页，共八十八页。Draize Draize 法眼法眼(f yn)(f yn)损伤程度评分表：损伤程度评分表：第四十六页，共八十八页。（续表）（续表）（续表）（续表）第四十七页，共八十八页。第四十八页，共八十八页。第四十九页，共八十八页。眼睛刺激动物试验替代法眼睛刺激动物试验替代法眼睛刺激动物试验替代法眼睛刺激动物试验替代法：1.1.受精鸡卵尿囊绒膜试验受精鸡卵尿囊绒膜试验 利用尿囊绒膜与结膜结构相似性。利用尿囊绒膜与结膜结构相似性。利用尿囊绒膜与结膜结构相似性。利用尿囊绒膜与结膜结构相似性。2.2.细胞膜损伤溶血试验细胞膜损伤溶血试验 用分光光度计法测定溶血程度用分光光度计法测定溶血程度用分光光度计法测定溶血程度用分光光度计法测定溶血程度(chngd)(chngd)(chngd)(chngd)（HbHbHbHb从从从从RBCRBCRBCRBC漏出）。漏出）。漏出）。漏出）。3.3.血红蛋白变性试验（用酶标仪测定）血红蛋白变性试验（用酶标仪测定）因角膜透明度降低是化学物破坏了蛋白质构象。因角膜透明度降低是化学物破坏了蛋白质构象。因角膜透明度降低是化学物破坏了蛋白质构象。因角膜透明度降低是化学物破坏了蛋白质构象。4.4.细胞毒性试验细胞毒性试验 兔眼角膜上皮细胞兔眼角膜上皮细胞兔眼角膜上皮细胞兔眼角膜上皮细胞SIRCSIRCSIRCSIRC模型，观察细胞增殖、膜完整性等模型，观察细胞增殖、膜完整性等模型，观察细胞增殖、膜完整性等模型，观察细胞增殖、膜完整性等（中中中中性红不能沉积在死细胞内，用酶标仪测定性红不能沉积在死细胞内，用酶标仪测定性红不能沉积在死细胞内，用酶标仪测定性红不能沉积在死细胞内，用酶标仪测定）5.5.生物膜替代法等方法生物膜替代法等方法 受试物受试物受试物受试物+立体人类皮肤立体人类皮肤立体人类皮肤立体人类皮肤+MTT+MTT+MTT+MTT，用酶标仪测定提取液中的，用酶标仪测定提取液中的，用酶标仪测定提取液中的，用酶标仪测定提取液中的MTTMTTMTTMTT吸吸吸吸光度（光度（光度（光度（MTTMTTMTTMTT不能沉积在死细胞内不能沉积在死细胞内不能沉积在死细胞内不能沉积在死细胞内）第五十页，共八十八页。二、皮肤刺激试验二、皮肤刺激试验 皮肤刺激性皮肤刺激性皮肤刺激性皮肤刺激性（dermal irritationdermal irritation）指皮肤接触或涂敷受试物）指皮肤接触或涂敷受试物后，局部产生的可逆性炎性变化。后，局部产生的可逆性炎性变化。皮肤腐蚀性皮肤腐蚀性皮肤腐蚀性皮肤腐蚀性(dermal corrosion(dermal corrosion）指皮肤接触或涂敷受试物后，）指皮肤接触或涂敷受试物后，引起局部的不可逆性组织损伤引起局部的不可逆性组织损伤 。皮肤刺激试验类型：皮肤刺激试验类型：皮肤刺激试验类型：皮肤刺激试验类型：单次和多次皮肤刺激试验；单次和多次皮肤刺激试验；完整皮肤和破损皮肤刺激试验等。完整皮肤和破损皮肤刺激试验等。试验方法：试验方法：Draize Draize 法（法（19441944年）年）常用动物常用动物(dngw)(dngw)：家兔或豚鼠家兔或豚鼠 第五十一页，共八十八页。破损皮肤刺激试验破损皮肤刺激试验破损皮肤刺激试验破损皮肤刺激试验 是人为将动物皮肤某部位是人为将动物皮肤某部位(bwi)(bwi)擦伤（不能伤及真皮和产生擦伤（不能伤及真皮和产生出血），以比较受试物对完整皮肤及受损皮肤造成的刺激反应出血），以比较受试物对完整皮肤及受损皮肤造成的刺激反应的差异。的差异。伤口消毒药物一般都需要做破损皮肤刺激试验。伤口消毒药物一般都需要做破损皮肤刺激试验。伤口消毒药物一般都需要做破损皮肤刺激试验。伤口消毒药物一般都需要做破损皮肤刺激试验。第五十二页，共八十八页。皮肤刺激试验（皮肤刺激试验（Draize Draize 法）：法）：（自身对照原则）（自身对照原则）（自身对照原则）（自身对照原则）试验方法：试验方法：将受试物一次或多次涂敷于受试动物背部一侧皮肤上将受试物一次或多次涂敷于受试动物背部一侧皮肤上(0.5ml)(0.5ml)，涂敷持续时间涂敷持续时间一般一般(ybn)(ybn)为为4h4h4h4h，以生理盐水处理另一侧背部皮肤作，以生理盐水处理另一侧背部皮肤作自身对照。自身对照。观察指标：观察指标：观察指标：观察指标：皮肤反应常为红斑或紫红色斑、水肿等，损伤严重时可形成焦皮肤反应常为红斑或紫红色斑、水肿等，损伤严重时可形成焦痂，一般按痂，一般按红斑红斑和和水肿水肿的严重程度评分，并与自身对照比较，从而的严重程度评分，并与自身对照比较，从而评价受试物对皮肤的刺激作用。评价受试物对皮肤的刺激作用。实验观察期：实验观察期：实验观察期：实验观察期：一般为一般为1414天。天。第五十三页，共八十八页。皮肤皮肤皮肤皮肤(p f)(p f)(p f)(p f)刺激试验结果的影响因素：刺激试验结果的影响因素：刺激试验结果的影响因素：刺激试验结果的影响因素：1.1.皮肤的完整性（皮肤的完整性（皮肤受皮肤受损程度损程度损程度损程度）；）；2.2.固态受试物的物理状态与溶解度；固态受试物的物理状态与溶解度；3.3.受试动物年龄与性别；受试动物年龄与性别；4.4.实验人员主观因素（实验人员主观因素（存在判断差异存在判断差异）等。）等。无需做皮肤刺激试验条件：无需做皮肤刺激试验条件：无需做皮肤刺激试验条件：无需做皮肤刺激试验条件：受试物为强酸或强碱类腐蚀性物质（受试物为强酸或强碱类腐蚀性物质（pH2pH2或或11.511.5）受试物有很强的经皮吸收毒性，经皮受试物有很强的经皮吸收毒性，经皮LDLD5050小于小于200 mg/kg200 mg/kg体重；体重；急性经皮毒性试验中，受试物剂量达急性经皮毒性试验中，受试物剂量达2000mg/kg2000mg/kg体重仍体重仍未出现皮肤刺激性作用。未出现皮肤刺激性作用。第五十四页，共八十八页。皮肤刺激皮肤刺激皮肤刺激皮肤刺激/腐蚀的体外替代法：腐蚀的体外替代法：腐蚀的体外替代法：腐蚀的体外替代法：1.1.单层皮肤细胞培养模型单层皮肤细胞培养模型 单层细胞培养技术单层细胞培养技术单层细胞培养技术单层细胞培养技术 （如：皮肤角质形成细胞、皮肤黑色素细胞、皮肤成纤维细胞（如：皮肤角质形成细胞、皮肤黑色素细胞、皮肤成纤维细胞等）等）2.2.表皮组织培养模型表皮组织培养模型 EpidermEpidermEpidermEpidermTMTMTMTM重组重组重组重组(zhn z)(zhn z)(zhn z)(zhn z)人表皮模型（美国）人表皮模型（美国）人表皮模型（美国）人表皮模型（美国）3.3.器官型人工皮肤模型器官型人工皮肤模型 即体外构建的含表皮和真皮双层结构即体外构建的含表皮和真皮双层结构即体外构建的含表皮和真皮双层结构即体外构建的含表皮和真皮双层结构第五十五页，共八十八页。Draize法皮肤法皮肤(pf)损伤程度评分表：损伤程度评分表：第五十六页，共八十八页。第五十七页，共八十八页。第五十八页，共八十八页。三、皮肤变态反应试验三、皮肤变态反应试验 皮肤变态反应皮肤变态反应皮肤变态反应皮肤变态反应（skinsensitization）是皮肤对化学物产生的免疫源性皮肤反应，又称过敏性接触是皮肤对化学物产生的免疫源性皮肤反应，又称过敏性接触性皮炎或皮肤致敏反应。性皮炎或皮肤致敏反应。在人身上有瘙痒、红斑、丘疹在人身上有瘙痒、红斑、丘疹(qizhn)(qizhn)、水疱、融合水疱等，、水疱、融合水疱等，在实验动物身上，通常只能见到在实验动物身上，通常只能见到皮肤红斑和水肿皮肤红斑和水肿等反应。等反应。试验目的：试验目的：试验目的：试验目的：确定重复接触化学物是否可引起变态反应及其反确定重复接触化学物是否可引起变态反应及其反应程度。应程度。受试动物：受试动物：受试动物：受试动物：豚鼠，每组动物豚鼠，每组动物10102020只。只。实验设计：实验设计：实验设计：实验设计：需做阳性对照和阴性对照，阴性对照动物仅给予受需做阳性对照和阴性对照，阴性对照动物仅给予受试物激发接