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灵芝孢子油对化学性肝损伤的保护作用
【摘要】 目的 探讨灵芝孢子油对化学性肝损伤的保护作用。方法 对昆明种小鼠每日经口分别灌胃给予/kg、/kg和/kg的灵芝孢子油。30天后，以/10g BW的剂量一次性经腹腔注射给予%CCl4。结果 /kg和/kg剂量组的血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)水平降低，与CCl4对照组比较(P＜)；/kg剂量组发生肝细胞坏死的动物例数明显减少，病变程度减轻，坏死评分低于CCl4对照组(P＜)。结论 灵芝孢子油对CCl4化学性肝损伤具有保护作用。

【关键词】 灵芝孢子油 四氯化碳 肝损伤

【Abstract】 Objective To explore the protective effects of ganderoma lucium oil on chemical liver　KM mice were given ganderoma lucium oil orally at the dose of /kg，/kg and /kg　days later，/kg (%)CCl4 were intraperitoneally　(1)The serum ALT and AST levels of /kg and /kg group were significantly decreased compared with the CCl4 control group.(2)The animal amount of happening hepatic cell necrosis changes in /kg group was lowered，the degree of pathobiological changes was lightened，and the cell necrosis- changed evaluation had dramatical differences compared with the CCl4 control　Ganderoma lucium oil had protective effects on chemical liver injury.

【Key words】 ganderoma lucium oil CCl4 liver injury

生产和生活中接触化学性毒物(如CCl4)、酗酒和医源性药物损害是导致化学性肝损伤发生的主要途径。为了减少化学性肝损伤的发生率，有必要研究开发具有护肝作用的生物源性物质。灵芝孢子是灵芝的遗传“种子”，内藏灵芝生命遗传基因，富含萌发新生命所需的一切物质［1］。中国科学院的科学家们经多次研究实验，发现了蕴藏在灵芝孢子内的灵芝孢子油，是灵芝发挥抑制肿瘤、保健、治疗作用的“主力”［2］。本文以昆明种小鼠为研究对象，以CCl4为染毒物，探讨了灵芝孢子油对化学性肝损伤的保护作用。

1 材料与方法

　材料 样品灵芝孢子油为浅棕黄色油状物，软胶囊包装，品种为赤芝ganderoma lucium (Leyss，exFr.)Karst.由广州某生物工程公司采用科学萃取技术提取。各实验剂量组所需浓度均用玉米油稀释样品配成。清洁级昆明种雌性小白鼠，6～8周龄(体重：18～22g)，由广东省医学实验动物中心提供，实验动物生产许可证号：SCXK(粤)2003-0002。颗粒饲料由广东省医学实验动物中心提供。SPF级实验动物使用许可证号：SYXK(粤) 2003-011。室温(22±2)℃，湿度60%～80％。

　检测项目 血清谷丙转氨酶、谷草转氨酶及肝脏病理学检验。

　仪器及试剂 用日立7060全自动生化仪进行检测，试剂生产商为日本和光纯药工业株式会社。CCl4为分析纯、AR级，广州生化试剂厂生产。

　实验方法 实验动物在实验室条件下检疫1周后，随机分成空白对照组、CCl4对照组及低、中、高3个剂量组，分别为、、/kg，每组11～13只小鼠。3个剂量组每天分别按不同剂量灌胃给予样品，空白对照组和CCl4对照组灌予玉米油(/10g)，共30天。于实验结束前1天将各组动物隔夜禁食16h，各剂量组和CCl4对照组经腹腔注射(/10g)一次性给予% CCl4，空白对照组给予玉米油，各受试物剂量组继续给予受试样品至实验结束。24h后摘眼球取血，分离血清做生化测定。取肝脏用10%的中性福尔马林固定，常规制作病理切片，HE染色，光镜下观察病理变化。

　统计学方法 统计资料采用SPSS 统计软件包进行统计分析，统计方法采用方差分析和秩和检验。

2 结果

　灵芝孢子油对受试动物ALT及AST水平的影响 CCl4对照组ALT和AST水平与空白对照组比较升高，差异有非常显着性，表明CCl4肝损伤模型成立。灵芝孢子油各剂量组ALT和AST水平与CCl4对照组比较，血清ALT和AST水平下降，其中中、高剂量组血清ALT的差异均有非常显着性(P＜)；AST的差异均有显着性(P＜)，见表1。结果表明，ALT和AST结果阳性。

　表1 灵芝孢子油对ALT、AST水平的影响 (x±s)

注：空白对照组和CCl4对照组比较采用t检验，△△P＜；各剂量组与CCl4对照组比较采用方差分析；比较**P＜，*表示P＜

　灵芝孢子油对受试动物肝脏病理变化的影响 CCl4对照组和灵芝孢子油各剂量组动物的肝脏病理改变以肝细胞坏死和气球样变为主，病变部位主要在肝小叶中央静脉周围。CCl4对照组与空白对照组比较，有明显的肝脏损伤，经统计学检验，差异有非常显着性(P＜)，表明CCl4肝损伤模型成立，见表2。灵芝孢子油各剂量组肝细胞坏死评分与CCl4对照组比较，差异有非常显着性(P＜)；其它病变类型各剂量组与CCl4对照组比较，差异无显着性(P＞)。结果表明：实验动物肝脏病理结果阳性，见表3。

表2 灵芝孢子油对受试动物肝脏病理变化得分 (分)

注：0分为大致正常；1分为病变细胞占整个视野的1/4；2分为病变细胞占整个视野的1/2；3分为病变细胞占整个视野的3/4；4分为病变细胞占整个视野

表3 灵芝孢子油对受试动物肝脏病变类型评分的影响

注：肝脏气球样变、细胞质凝集及细胞坏死得分为等级资料，采用秩和检验；CCl4对照组与空白对照组比较，△△P＜；剂量组与CCl4对照组比较，**P＜

3 讨论

CCl4是工业生产中常见的化学性毒物，可导致化学性肝损伤。CCl4肝细胞毒性作用的主要机制是使细胞膜发生脂质过氧化，从而破坏细胞膜结构和功能的完整性，使细胞质内酶类渗入血液中，导致血清酶活性发生改变，同时使细胞发生气球样变和坏死。灵芝孢子油是由灵芝孢子提取而成的，灵芝孢子油集中了灵芝孢子中的三萜类、多糖类、核苷类等全部有效成分，是灵芝孢子中功效成分的集合体，每20g灵芝孢子粉在破壁后可萃取出1g左右的灵芝孢子油［2］。

中华传统医学一直视灵芝为滋补强壮、固本扶正的珍贵中草药。明朝李时珍编着的《本草纲目》中记载：灵芝味苦、平，无毒，益心气，活血，补肝气。现代医学证明：灵芝含有多种生物活性物质，灵芝多糖(ganoderma lucidum polysaccharide)能提高机体免疫力，提高机体耐缺氧能力，消除自由基，抑制肿瘤，抗辐射，提高肝脏、骨髓、血液合成DNA、RNA、蛋白质的能力，延长寿命等［3，4］。灵芝酸(ganodenic acid)具有强烈的药理活性，有止痛、镇静、抑制组胺释放、解毒、保肝、毒杀肿瘤细胞等功能［5］。有关医学专家认定灵芝提取物是最佳的保肝解毒之品［6］。

本研究结果表明，灵芝孢子油可明显减低CCl4引起的血清ALT及AST水平的升高。病理学观察发现，灵芝孢子油可使CCl4所致肝细胞坏死动物的发生例数明显减少，病变程度明显减轻，肝细胞坏死评分显着降低，明显促进了肝细胞的再生及肝功能的恢复。本实验结果说明灵芝孢子油对CCl4所致化学性肝损伤具有保护作用。
【参考文献】

1 刘虹.灵芝孢子粉药理作用研究进展.天津中医学院学报，2002，21(4)：50-51.
2 徐金木.灵芝孢子油是灵芝抑瘤主力.中国食用菌，2002，5：23.
3 胡洪涛.灵芝孢子的研究.药学进展，2002，26(3)：160-162.
4 Hyung Sik　vitro chemopreventive effects of plant polysaccharides (Aloe barbadensis Miller，Lentinus edodes，Ganderoma lucium and Coriolus versicolor). Carcinogenesis，1999，20(8)：1637-1640.
5 叶锦先.灵芝孢子药理和临床研究.药膳研究，2000，1：3-4.
6 刘昕.灵芝孢子对小鼠肝癌抑制及其对肝脏的保护作用.中西医结合肝病杂志，2000，10(5)：31-32.