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高效液相色谱法紫外电化学串联检测测定鸡肉中克伦特罗残留苗 虹 王凌琰 吴永宁3(中国预防医学科学院营养与食品卫生研究所,北京100050)2002209205收稿;2003205214接受本文系北京市自然科学基金资助项目(No.201209)1 引 言盐酸克伦特罗又称氨哮素,克喘素,用于治疗哮喘。它属于 2兴奋剂,有加速动物生长、改进脂肪型动物的肌肉与脂肪的比例的作用,但在畜牧生产中没有被作为合法的生长促进剂批准。国内外相继发生多起因食用含克伦特罗残留的动物性食品发生中毒的事件。我国己将其列为禁用的饲料药物添加剂,并规定不得检出。本文采用高效液相色谱紫外电化学串联检测法测定鸡肉中克伦特罗残留,并进行不同的加标水平回收率实验,能够为监测提供较好的手段。2 实验部分2.1 仪器与试剂 高效液相色谱仪(Asilent HPLC 1100色谱系统,紫外检测器,1049A电化学检测器):Bransoni B22200E超声清洗器;XZ26A旋转蒸发器;XY24调速多用振荡器:LD522A离心机;100 mL圆底磨口具塞离心管:Barnstead2D8612233纯水器;针头微孔滤膜过滤器(有机相,0.45m);奥立龙Model 868酸度计:VORTEX22 Genie涡流混合器;氮气浓缩器;DY8921型电动玻璃匀浆器。盐酸克伦标准品(中国生物制品药品检定),准确称取适量用甲醇配制成标准储备液;异丙醇、乙酸乙酯、乙醇为分析纯,甲醇为色谱纯:浓氨水;0.01 mol/L HCl;0.1 mol/L HClO4;1 mol/L NaOH;NaCl;0.1 mol/L NaH2PO4缓冲溶液(PH=6.0);弱阳离子交换柱(Supelcleam LC2WCX SPE Tubes,3 mL,Supelco公司):水为超纯水。2.2 色谱条件 色谱柱:Shandon BDS C18柱(2504.6 mm、5);流动相:0.01 mol/L KCl溶液2甲醇(5545,V/V);流速:1mL/min;进样量:20L;柱温:25。紫外检测波长为244 nm;电化学检测器为脉冲方式,P1=2.0 V,P2=-2.0 V,P=1.0 V。2.3 样品提取 取100 g剪碎的鸡肉,用50 mL 0.01 mol/L HCl匀浆。称取15.0 g(相当于10 g鸡肉)加入10 mL 0.01mol/L HCl和2 mL 0.1 mol/L HClO4混匀,在超声波水浴中超声20 min后取出置于80 水浴加热30 min。然后以流水冷却,4500 r/min离心20 min。倾出上清液,向沉淀中加入5 mL 0101 mol/L HClO4洗涤沉淀,再离心,合并两次的上清液。用1 mol/L的NaOH调pH至9150.1,若有沉淀产生,以4500 r/min离心20 min,倾出上清液于100 mL玻璃离心管中。2.4 萃取分离 向上清液中加NaCl使其饱和,再加25 mL异丙醇2乙酸乙酯(4060),振荡萃取20 min后放置10 min,吸取上层有机相至旋转蒸发瓶中。用15 mL异丙醇2乙酸乙酯(4060)再萃取一次。若有乳化层,3000 r/min离心5 min,合并有机相,于50 水浴旋转蒸发至近干。2.5 弱阳离子交换柱分离富集 依次用10 mL乙醇、3 mL水、3 mL 0.1 mol/L NaH2PO4缓冲溶液、3 mL水淋洗LC2WCX柱进行活化。用3 mL 0.1 mol/L NaH2PO4缓冲溶液分3次洗涤旋转蒸发瓶中的残渣,经针头式微孔滤膜过滤,转移至LC2WCX柱上,弃去流出液;再依次用4 mL水、4 mL乙醇淋洗LC2WCX柱后,收集用6 mL乙醇2氨水(982)淋洗LC2WCX柱的流出液,于50 氮气浓缩至干,加入0.5 mL流动相混匀后转移至进样瓶中,进行液相色谱分析。3 结果与讨论3.1 实验条件的选择(1)流动相的选择 根据文献首先选择含1%甲酸的甲醇溶液21%甲酸水溶液(3466)为流动相,色谱峰为倒峰而且不稳定。经多次实验确定流动相为0.01 mol/L KCl溶液2甲醇(5545)能得到较好的峰形。(2)电化学检测方式及峰电位的确定 选择电化学方式为脉冲方式,以减少克伦特罗在电极表面的吸附。选择峰电位为1.0 V。3.2 回归方程、线性范围和最小检出限 以峰面积对克伦特罗浓度作图,其紫外(UV)回归方程为y=0104926X-0100287,r=0.9999;电化学(ECD)y=014789X+21309,r=019966。克伦特罗在0.54 ng范围内具有良好的线性关系,信噪比为S/N=3的条件下,紫外和电化学检测器的检出限均为0.1 ng。3.3 弱阳痴子交换柱(LC2WCX)的容量 分别以10、20、25、30及40ns克伦特罗上LC2WCX柱,以考察柱容量。结果表明,随着上柱样品量增大,克伦特罗标准的回收率下降(11010%-57.7%),而且比LC2WCX柱在使用两次后已基本失效。3.4 方法的回收率、精密度及测定限 对从超市购买的鸡肉样品进行测定,结果为未检出。采用此样品进行3个不同加标水平的回收实验:加标水平为2.5gkg的回收率为70.1%12.2%,RSD=17.4%(n=7):1.5gkg的回收率为7319%9.1%,RSD=12.4%(n=7);0.5gkg的回收率为79.0%12.1%,RSD=15.3%(n=7)。本方法鸡肉样品的测定限(LOQ)为0.5g/kg,这与目前检测克伦特罗的“金标准”气2质联机方法相当,可以满足残留监控要求。第31卷2003年8月 分析化学(FENXI HUAXUE)来稿摘登Chinese Journal of Analytical Chemistry 第8期1024