戒毒胶囊质量标准的研究.docx

戒毒胶囊质量标准的研究【摘要】 目的建立戒毒胶囊的质量标准。方法采用薄层色谱法对戒毒胶囊中的金银花、丹参、黄芩、栀子、白芍、人参、熟地黄进行定性鉴别；采用高效液相色谱法对制剂中的绿原酸进行含量测定。色谱条件：用C18分析柱，以乙腈-%磷酸溶液为流动相，检测波长为327 nm，进样量为20 l。结果薄层色谱中，供试品溶液色谱在与对照药材或对照品相应位置上出现相同颜色的斑点，阴性对照无干扰；高效液相色谱中，绿原酸在 gml-1范围内线性关系良好，平均回收率为%。结论薄层色谱法呈现斑点清晰、特异性强，可用于戒毒胶囊的鉴别；高效液相色谱法简便快速、精密度高、准确度好，可用于该药的质量控制。【关键词】 戒毒胶囊； 薄层色谱； 高效液相色谱； 绿原酸Abstract：ObjectiveTo establish the quality standard for JieduLonicerae,Radix Salviae Miltiorrhizae,Radix Scutellarine,Fructus Gardeniae,Radix Paeoniae Alba,Radix Ginseng and Radix Rehmanniae were identified usingcontent for chlorogenic acid in Jiedu Capsules was determined withanalytical method was carried out using a C18 column and a mixture containing 12 volume of acetonitrile and 88 volume of % phosphoric acid solution as the mobiledetection wavelength was set at 327obtained from the test solutions had the same color in reference solution and medical material in the same location,and the bland solution had no interference. The linear range of albiflorin was fromtogml-1(r= 7),the average recovery was %.ConclusionIn TLC,the spots are very clear and specific to identify the herbal medicine in Jeduis simple,quick,high precise and accurate for the quality control of Jiedu Capsules.Key words：Jiedu Capsules; TLC; HPLC; Chlorogenic acid 戒毒胶囊处方为治疗吸食阿片类成瘾者的临床经验方，戒毒胶囊是依据中医理论，结合多年的临床用药经验研制的，并且在研制该制剂时，进行了相关药理学等多方面研究，以期发挥中医中药优势，为阿片类毒瘾者提供疗效确切、服用安全的中药新制剂，由金银花、黄芩、栀子、丹参、黄芪等13味药制成。本实验采用TLC和HPLC建立鉴别和含量测定方法，以期为戒毒胶囊的质量控制提供实验方法。1 仪器与试药1 仪器Waters 高效液相色谱仪：510泵，2487 紫外检测器；色谱工作站。2 试药绿原酸对照品及对照药材；戒毒胶囊。缺味阴性样品按处方分别配成相应的缺位处方药，模拟制剂工艺，加相应辅料制备。药材均购自石家庄药材站，并经生药鉴定。乙腈为色谱纯，超纯水，其余试剂均为分析纯。2 方法与结果定性分析金银花的鉴别1取本品内容物2 g，加甲醇20 ml，超声处理10 min，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇5 ml使溶解，作为供试品溶液。取金银花对照药材 g，照“供试品溶液的制备”项下同法操作制备对照药材溶液。另取绿原酸对照品，加甲醇制成每毫升含1 mg的溶液，作为对照品溶液。再取缺金银花的阴性样品，同供试品溶液的制备方法，制成阴性对照溶液。吸取上述4种溶液各10 l，分别点于同一块硅胶G薄层板上，以醋酸丁酯-甲酸-水的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯下检视。供试品色谱中，在与对照品和对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色斑点。阴性对照色谱无干扰。见图1。丹参的鉴别取本品内容物12 g，加乙醚200 ml，超声处理10 min，滤过，滤液蒸干，残渣加醋酸乙酯1 ml使溶解，作为供试品溶液。取丹参对照药材1 g，照供试品溶液制备项下同法操作，作为对照药材溶液。另取丹参酮A对照品，加醋酸乙酯溶解并制成每毫升含2 mg的溶液，作为对照品溶液。再按处方工艺制备缺丹参阴性对照，再按“供试品溶液的制备”制成阴性对照品溶液。吸取上述4种溶液各10 l，分别点于同一块硅胶G薄层板上，以苯-醋酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，在日光下直接检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；在与对照品色谱相应的位置上，显一相同的暗红色斑点；阴性在相应位置无干扰。见图2。黄芩的鉴别取本品内容物1 g，加甲醇20 ml，超声处理20 min，滤过，滤液蒸干，残渣加水20 ml超声使溶解，加到已处理好的AB-8型吸附树脂柱上，用水30 ml洗脱，弃去洗脱液，再用30乙醇30 ml洗脱，弃去洗脱液，继用80乙醇洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加乙醇1 ml使溶解，作为供试品溶液。取黄芩对照药材1 g，按供试品溶液制备项下操作制成对照药材溶液。取黄芩苷对照品，加甲醇制成每毫升含 mg的溶液，作为对照品溶液。按处方工艺制备缺黄芩阴性对照，再按“供试品溶液的制备”制成阴性对照品溶液。吸取上述4种溶液各10 l，分别点于同一块含4醋酸钠的羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以醋酸乙酯-丁酮-甲酸-水为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1三氯化铁乙醇溶液供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。在与对照品色谱相应的位置上，显一相同颜色的斑点。阴性在相应位置无干扰，见图3。图1 戒毒胶囊中金银花的薄层色谱图图2 戒毒胶囊中丹参的薄层色谱图栀子的鉴别1取本品内容物2 g，加75乙醇20 ml，超声处理20 min，滤过，滤液蒸干，残渣加水10 ml超声使溶解，加水饱和的正丁醇振摇提取3次，10 ml/次，合并正丁醇液，用水洗涤3次，10 ml/次，弃去水洗液，将正丁醇液置水浴上蒸干，残渣加乙醇1 ml使溶解，作为供试品溶液。取栀子对照药材1 g，照对照药材溶液制备项下的方法同法操作，作为对照药材溶液。另取栀子苷对照品，加乙醇制成每毫升含4 mg的溶液，作为对照品溶液。按处方工艺制备缺栀子阴性对照，再按“供试品溶液的制备”制成阴性对照品溶液。吸取上述4种溶液各5 l，分别点于同一块硅胶G薄层板上，以醋酸乙酯-丙酮-甲酸-水为展开剂，展开，取出，晾干，喷以硫酸乙醇溶液，在105 加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。在与对照品色谱相应的位置上，显一相同颜色的斑点。阴性在相应位置无干扰，见图4。图3 戒毒胶囊中黄芩的薄层色谱图图4 戒毒胶囊中栀子的薄层色谱图白芍的鉴别1取本品4 g，加乙醇20 ml，超声处理10 min，滤过，滤液蒸干，残渣加水20 ml超声使溶解，加到已处理好的AB-8型吸附树脂柱上，用水30 ml洗脱，弃去洗脱液，再用20乙醇30 ml洗脱，弃去洗脱液，继用70乙醇洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加乙醇1 ml使溶解，作为供试品溶液。取白芍对照药材2 g，同法制成对照药材溶液。按处方工艺制备缺白芍阴性对照，再按“供试品溶液的制备”制成阴性对照品溶液。 吸取上述3种溶液各10 l，分别点于同一块硅胶G薄层板上，以氯仿-醋酸乙酯-甲醇-甲酸为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5香草醛硫酸溶液，在105 加热至斑点显色清晰。阴性对照色谱无干扰，见图5。人参的鉴别1取本品4 g，加氯仿40 ml，置水浴中加热回流1h，弃去氯仿液，残渣挥去氯仿，加水 ml拌匀湿润后，加水饱和的正丁醇40 ml，超声处理30 min，滤过，滤液加3倍量氨试液，摇匀，放置分层，取上层液蒸干，残渣加甲醇1 ml使溶解，作为供试品溶液。取人参对照药材，照供试品溶液制备项下同法操作制备对照药材溶液。取人参皂苷Rb1、Re和Rg1对照品，加甲醇分别制成每毫升各含 mg的溶液，作为对照品溶液。按处方工艺制备缺人参阴性对照，再按“供试品溶液的制备”制成阴性对照品溶液。吸取上述6种溶液各10 l，分别点于同一块硅胶G薄层板上，以氯仿-甲醇-正丁醇-水的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10硫酸乙醇溶液，在105 加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；在与对照品色谱相应的位置上，显相同的紫红色斑点。阴性在相应位置无干扰，见图6。熟地黄的鉴别2取本品10 g，加水50 ml，煮沸1 h，趁热滤过，滤液放冷后，加醋酸乙酯25 ml振摇提取，分取醋酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇1 ml使溶解，作为供试品溶液。另取熟地黄对照药材1 g，同法制成对照药材溶液。按处方工艺制备缺熟地黄阴性对照，再按“供试品溶液的制备”制成阴性对照品溶液。吸取上述3种溶液各10 l，分别点于同一块硅胶G薄层板上，以甲苯-醋酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2，4-二硝基苯肼试液，在105加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。阴性在相应位置无干扰，阴性对照色谱无干扰，见图7。图5 戒毒胶囊中白芍的薄层色谱图图6 戒毒胶囊中人参的薄层色谱图图7 戒毒胶囊中熟地黄的薄层色谱图定量分析色谱条件色谱柱为迪马公司DiamonsilTM C18分析柱；流动相为乙腈-磷酸溶液；流速min-1；检测波长327 nm；柱温为室温；进样量20 l。溶液的制备 对照品溶液的制备：取经105 干燥至恒重绿原酸对照品适量，置棕色量瓶中，加50甲醇制成每毫升含30 g的溶液，即得。 供试品溶液的制备：取本品20粒，精密称定。取本品粉末约 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加50甲醇20 ml，称定重量，超声处理30 min，放冷，再称定重量，用50甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取滤液10 ml，置50 ml棕色量瓶中，加50甲醇至刻度，摇匀，即得。 阴性对照溶液的制备：按戒毒胶囊的制法制备不含金银花的提取物，照供试品溶液的处理方法制备溶液，即得。 结果，阴性对照色谱在绿原酸色谱峰处无干扰。见图810。图8 绿原酸对照品HPLC图图9 戒毒胶囊HPLC图图10 阴性对照品HPLC图线性关系考察取绿原酸对照品适量，精密称定，加甲醇溶解并稀释制成每毫升中含 g的溶液，分别吸取上述溶液1，2，3，4，5 ml，分别精密吸取上述溶液各20 l按上述色谱条件依法进样，测定峰面积。以峰面积Y对进样量X进行线性回归，绿原酸在 g/ml范围内线性关系良好，回归方程为Y104X103，r 7。精密度实验取胶囊内容物约 g，按供试品溶液的制备方法制备溶液，按已确定的色谱条件重复进样5次，测得峰面积的RSD为。重复性实验取同一批胶囊内容物各5份，按供试品溶液的制备方法制备溶液，测得绿原酸含量的RSD为。稳定性实验取胶囊内容物约 g，按供试品溶液的制备方法制备溶液，将溶液放置0，2，4，6，8，10，12，24 h后，分别测定，样品溶液在24 h内稳定。最低检测限精密吸取上述对照品溶液适量，加甲醇溶解并逐步稀释直至所得色谱图中绿原酸峰高为噪音比的3倍。最低检测限分别为 ng。回收率实验取同批胶囊内容物5份，每份约 g，精密称定，精确加入绿原酸对照品溶液适量，按供试品溶液的制备方法制备溶液，测定并计算回收率。结果见表1。表1 回收率实验结果样品含量测定 称取10批不同批号的戒毒胶囊内容物，按“供试品溶液的制备”项下的方法制备成供试品溶液，测定样品含量。结果见表2。表2 10批样品含量测定结果3 讨论 金银花为戒毒胶囊处方中君药，绿原酸为其有效成分，绿原酸含量的多少可以间接反应制剂工艺，故选择测定戒毒胶囊中绿原酸的含量作为戒毒胶囊的含量测定指标。 含量测定供试品溶液制备中，本实验曾比较了75%乙醇、甲醇超声、索氏提取来提取戒毒胶囊。最终采用甲醇超声波振荡提取，它具有提取时间短、提取完全、简单、快速的特点，并且所得样品溶液重复性好，精密度高。 本品处方含有的药味较多，背景干扰大，要寻找特异性鉴别方法，必须从供试品溶液的制备上入手。通过查阅大量的中草药化学成分资料，选出特异性化学成分，根据其物理特性，寻找较好的提取方法，我们对戒毒胶囊的13味药的鉴别均进行了研究。 为了消除鉴别试验中背景干扰，采用了过大孔树脂柱、离子交换柱、回流、萃取等方法来制备供试品溶液。 本药处方中同时含有川芎与当归，两者均为伞形科，都含有藁本内酯、阿魏酸等成分，鉴别时相互干扰大，难以区分，故未对处方中的这两种药味进行鉴别。【参考文献】 1 国家药典委员会.中国药典,部S.北京:化学工业出版社,2000. 2 赵春香，章贵杰.中成药中熟地黄的薄层色谱鉴别J.中成药，1996，18：45.