利用核磁共振波谱研究慢性心衰心气虚证心肌能量代谢的病生.pptx

利用核磁共振波谱研究慢性心衰利用核磁共振波谱研究慢性心衰心气虚证心肌能量代谢的病生理机制心气虚证心肌能量代谢的病生理机制林 谦 李岩北京中医药大学东方医院第二届全国中西医结合心血管病中青年论坛第二届全国中西医结合心血管病中青年论坛第二届黄河心血管病防治论坛第二届黄河心血管病防治论坛国家自然基金项目国家自然基金项目(No.30772693)9/21/2024立 题 依 据研究内容、目标实 验 结 果讨论与结论内容概述内容概述9/21/2024动力泵、高耗能能量不足引起的能量超负荷性心肌病心脏特点心力衰竭CHF实质能量产生不足、消耗增加立项依据立项依据现代医学对现代医学对CHF和心肌能量的认识和心肌能量的认识9/21/2024立项依据立项依据1 12 23 34 4“气气”能量能量相似性相似性心气虚心气虚CHFCHF基本病机基本病机中医治疗中医治疗CHFCHF特色优势特色优势益气治疗益气治疗CHF心气虚证心气虚证效果显著效果显著中医对中医对“气气”和心气虚的认识和心气虚的认识9/21/2024立项依据立项依据慢性心衰慢性心衰心气虚证心气虚证能量代谢能量代谢心肌能量代谢障碍病理生理关键环节心气虚证慢性心力衰竭基本病机能量代谢障碍CHF心气虚证研究的切入点ADP+PiADP+PiADP+PiADP+PiCr+PiCr+PiCr+PiCr+PiATPATPPCrPCrCKCKCKCK穿梭机制穿梭机制穿梭机制穿梭机制心肌能量代谢及其调控机制心肌能量代谢及其调控机制直直接接能能量量物物质质能能量量储储备备物物质质mi-CKmi-CKCK-MM/MB/BBCK-MM/MB/BB立项依据立项依据血流动力学血流动力学能量调控能量调控-CK-CK穿梭机制穿梭机制能量物质能量物质-ATP-ATP、PCrPCr提高能量物质含量提高能量物质含量维持维持CKCK穿梭机制穿梭机制益气药通过提高心肌能量物质含量益气药通过提高心肌能量物质含量、维持、维持CKCK穿梭机制治疗心气虚证穿梭机制治疗心气虚证心气虚证心气虚证提出假说提出假说9/21/2024研究内容研究内容复制CHF心气虚大鼠模型益气药物治疗模型大鼠心气虚证指标血流动力学慢性心衰慢性心衰慢性心衰慢性心衰心气虚证心气虚证心气虚证心气虚证心肌能量代谢障碍CHF不同时相心肌能量物质动态变化能量调控机制关键分子基因表达水平心气虚心气虚9/21/2024动物实验动物实验造模、干预、造模、干预、血流动力学血流动力学分子生物学分子生物学基因及蛋白基因及蛋白质表达质表达核磁共振核磁共振心肌能量物心肌能量物质水平质水平理论升华理论升华心气虚证心气虚证实质实质从心肌能量从心肌能量代谢角度进代谢角度进一步阐明心一步阐明心气虚证实质气虚证实质研究目标研究目标假手术结扎冠脉左心室插管RT-PCR31P核磁共振波谱技术路线技术路线9/21/2024研究方案研究方案-动物分组动物分组动物实验动物实验分组及给药分组及给药LMZXJ假手术组：不结假手术组：不结扎冠状动脉，术扎冠状动脉，术后给予生理盐水后给予生理盐水联合用药组：术后给予党联合用药组：术后给予党参、黄芪卡托普利参、黄芪卡托普利中药组中药组亚组亚组1:1:术后予党参；术后予党参；亚组亚组2:2:术后予黄芪；术后予黄芪；亚组亚组3:3:术后予党参黄芪术后予党参黄芪 （益气组）（益气组）模型组：术后给模型组：术后给予生理盐水予生理盐水西药对照组：术西药对照组：术后给予卡托普利后给予卡托普利9/21/2024心率加快心率加快a a心悸心悸呼吸频率加快呼吸频率加快b b气短、气促气短、气促活跃程度下降反抗轻微活跃程度下降反抗轻微c c神疲神疲力竭性游泳时间缩短力竭性游泳时间缩短d d乏力乏力研究方案研究方案-一般状态一般状态检测指标检测指标心气虚证心气虚证9/21/2024研究方案研究方案-血流动力学血流动力学监测心电监测心电颈动脉插管颈动脉插管心室内压心室内压舒缩功能舒缩功能心脏功能心脏功能左室舒张末压左室舒张末压血流动力学检测血流动力学检测左室收缩压左室收缩压左室收缩压最左室收缩压最大变化速率大变化速率左室舒张压最左室舒张压最大变化速率大变化速率收缩功能收缩功能 舒张功能舒张功能9/21/2024保存保存提取提取样品样品制备制备实验实验参数参数数据数据处理处理核磁共振波谱检测流程核磁共振波谱检测流程大鼠心脏组织液氮急冻。用1:1的CH3CN:H2O匀浆、离心取上清液水提残渣加入重水混匀，离心取上清液加入核磁管中，加入TSP/D2O溶液和MDP/D2O溶液（终浓度2mM）谱宽sw=12000，采样点np=8192，90度脉冲宽度pw=14.1，弛豫延迟时间d1=17s，采样次数nt=100，采样温度为27。对所得NMR数据经傅立叶变换得到谱图，然后调整相位并进行基线校正研究方案研究方案-能量物质能量物质9/21/2024研究方案研究方案-能量物质能量物质PCrATPPCr/ATP3131P P核磁共振波核磁共振波谱检测谱检测1.心气虚心气虚证与心肌证与心肌能量物质能量物质含量的相含量的相关性关性2.益气药益气药对心肌能对心肌能量代谢的量代谢的影响影响9/21/2024心肌组织心肌组织能量调控机制能量调控机制mi-CK反映能量从ATPPCr并存储的能力CK同工酶反映PCrATP并加以利用的能力运用运用RT-PCR法检测法检测mi-CK和和CK-M亚基、亚基、CK-B亚基的亚基的mRNA表表达水平达水平Western blot法测定法测定mi-CK、CK-MM、CK-MB、CK-BB蛋白质水平蛋白质水平研究方案研究方案-分子生物学分子生物学分子生物学检测分子生物学检测9/21/2024实验结果实验结果-心衰模型的建立心衰模型的建立心脏冠脉结扎位点心脏冠脉结扎位点 心衰心脏（梗死区清晰可见，心衰心脏（梗死区清晰可见，左心室扩大、室壁变薄）左心室扩大、室壁变薄）9/21/2024实验结果实验结果-一般状态一般状态模型组大鼠较假手术组一般状态差，心率加快，力竭游泳时间缩短，各用药组较模型组有所改善与假手术组相比，*P0.05，*P0.01；与模型组相比，P0.05，P0.019/21/2024实验结果实验结果-血流动力学血流动力学左心室内压曲线左心室内压曲线左心室左心室dp/dtdp/dt曲线曲线+dp/dt max:dp/dt max:收收缩缩功能功能-dp/dt max:-dp/dt max:舒舒张张功能功能9/21/2024实验结果实验结果-血流动力学血流动力学与假手术组相比，*P0.05，*P0.01；与模型组相比，P0.05，P0.01模型组大鼠心脏收缩功能明显下降，各用药组较模型组有所改善，中药组及联合用药组改善更为明显模型组大鼠心脏舒张功能明显下降，各用药组较模型组有所改善，党参组及联合用药组改善更为明显9/21/2024实验结果实验结果-能量物质能量物质外参照物磷酸肌酸磷酸肌酸PCrPCr三磷酸腺苷三磷酸腺苷ATPATP9/21/2024实验结果实验结果-能量物质能量物质模型组大鼠心肌能量储备物质PCr含量明显下降，各用药组均有回升，党参组、益气组及联合用药组更为显著与假手术组相比，*P0.05，*P0.01；与模型组相比，P0.05，P0.01实验结果实验结果-能量物质能量物质模型组大鼠心肌直接供能物质ATP含量明显下降，各用药组均有回升，各中药组及联合用药组更为显著9/21/2024实验结果实验结果-分子生物学分子生物学模型组大鼠CK-B m-RNA表达上升，各用药组明显回落与假手术组相比，*P0.05，*P0.01；与模型组相比，P0.05，P0.01模型组大鼠CK-M m-RNA表达下降，各用药组明显回升模型组大鼠mi-CK m-RNA表达上升，各用药组有所下降实验结果实验结果-分子生物学分子生物学模型组大鼠腺苷酸转位酶ANT1 m-RNA表达下降，各用药组有所回升与假手术组相比，*P0.05，*P0.01；与模型组相比，P0.05，P0.01模型组大鼠腺苷酸转位酶ANT2 m-RNA表达下降，各用药组显著回升心梗后心衰模型大鼠有明显的心气虚证表现心梗后心衰模型大鼠有明显的心气虚证表现心率加快、呼吸频率加快心率加快、呼吸频率加快-（心悸、喘促）（心悸、喘促）精神萎靡、喜静喜蜷缩易惊精神萎靡、喜静喜蜷缩易惊-（倦怠、易惊）（倦怠、易惊）抓取时反抗轻微、力竭游泳时间缩短抓取时反抗轻微、力竭游泳时间缩短-（乏力）（乏力）心气虚表现与心脏收缩、舒张功能下降相关心气虚表现与心脏收缩、舒张功能下降相关益气药改善心气虚证，同时可以明显提高心脏收缩、舒张功能益气药改善心气虚证，同时可以明显提高心脏收缩、舒张功能讨论：讨论：心脏舒缩功能下降心脏舒缩功能下降-心气虚心气虚心脏的收缩、舒张过程都是耗能过程心脏的收缩、舒张过程都是耗能过程收缩功能与能量物质水平呈正相关收缩功能与能量物质水平呈正相关舒张功能与能量物质水平呈正相关舒张功能与能量物质水平呈正相关能量物质不足导致心脏舒缩功能下降能量物质不足导致心脏舒缩功能下降益气药提高心肌能量物质含量益气药提高心肌能量物质含量l益气药通过提高内在的心肌能量物质含量，益气药通过提高内在的心肌能量物质含量，从而改善心脏收缩、舒张功能，进而改善外在从而改善心脏收缩、舒张功能，进而改善外在的心气虚证候表现的心气虚证候表现讨论：讨论：能量物质不足能量物质不足-心脏舒缩功能下降心脏舒缩功能下降-心气虚心气虚心肌能量物质调控机制：心肌能量物质调控机制：CKCK和和ANTANT酶系功能酶系功能心衰模型组大鼠心衰模型组大鼠CK-B mRNACK-B mRNA表达升高，表达升高，CK-M mRNACK-M mRNA表达降低表达降低Mi-CK mRNAMi-CK mRNA表达降低，表达降低，ANT mRNAANT mRNA表达降低表达降低益气药可以稳定能量产生、转运、储藏、利用的关键酶益气药可以稳定能量产生、转运、储藏、利用的关键酶l益气药通过稳定能量代谢的调控机制提高心益气药通过稳定能量代谢的调控机制提高心肌能量物质含量肌能量物质含量讨论讨论-能量物质调控机制能量物质调控机制-心脏舒缩功能下降心脏舒缩功能下降-心气虚心气虚9/21/2024心肌心肌能量物质的不足和能量代谢障碍能量物质的不足和能量代谢障碍是慢性心衰心气虚证病理是慢性心衰心气虚证病理生理生理的重要机制的重要机制心气虚证、心功能下降与心肌能量物质下降正相心气虚证、心功能下降与心肌能量物质下降正相关，能量物质的不足导致了心气虚证的出现关，能量物质的不足导致了心气虚证的出现CHFCHF心气虚证模型复制成功心气虚证模型复制成功结论结论益气药物维持能量物质含量及调控机制的稳定性，益气药物维持能量物质含量及调控机制的稳定性，改善左室舒缩功能，改善左室舒缩功能，改善心气虚证症状改善心气虚证症状9/21/2024利用核磁共振波谱研究慢性心衰心气虚证心肌能量代谢的病生理机制gK69u!3bBuCl+SU&ytY&Q6J%TLwd5V0sP3MZz%kN3W4f5CeN8$dyrq1auK-%xI3%!zX4CRKuwerz2Emxd&X(LOsr%O9UoL&-#g$8*5v5g*A!bE19CJAgkOy$T&a&0%oGLovGDqIJVTSqOXV(Lb-j6BHLP6mEm5Ck-C(CeCF+B-Vqdm8wmdBnogxrTyP0)NPXMOJ)yPM0hyVGME6H+$2xLQ0EYx3Y7NhSDnc(GoMUcKOz(DThoXlb0wn2CwSmlb*I73Rvl*lSh8!+*qAi)Hbyx&9ooG0pAfd4a&HeYaGfh(vTr-L%)VIVSedguIlM-chiUJH1u*&z$(Q7zFK%xJC&60ZpskY3sG0LGiXVBdpmWsX-n0dTISJ2XZBP8fGtXPhFX%dtMfm1ZSR8pvGctIRxIpE)pAyI+qUo1f%Rv%WPLoOogYVc4YY7hsmnDoJCfL+!1MfKv7w8CFUHki%g&jr2R87uz3+3mK$rx8dzIqlQNOvpDd%S#+0HBFkR0e2J7eQRUT6HQOqYNI*X(+(32SHJLas#Nm85Hp#T%(-dNobU-fGQmNcV$62Jf)z2#UH3jqTf4Az0q8hfe-jdxcuG7zec9f0zR8u&-Ick-yciaIvENU4(Cdi4$nV&onU1Yh)tsJbLQZwHEye$0dTMdwzX)&W*LmhUD(%p-6I-7Dfe)wO0giaVWK3ShUsNb)+JDfdvN42ew7eQyzY#csJuh+wPDhLnNb9&w#duCvQ3ooarkm0KYOHMiFfk4cqcfE%RzazD9lGn+obu#sc&pbJYA58TAQzw6vah0z4y3m1KX(FJQd#XBeanJ(kC)Zam4S-TBkvRjELeOKEj)WE%n!8fH+QMOf60qwm1ulY4)lWUdJSb6Fzs*7&4m&MnZVdcLbGBC830eF#EJH6QcV1BWD71dQ(ChBNuU3RM!7z)l!WxGN*b9w7Tr5+o0E#+-5a#2eDLaQ2%8jjl+QhxjyBnmLc(SyhXl$(Cka&jWDc$BxTbJeRzuRHo61$*XMi(0vCVxc2DrCgWX45dV+Uxl#(IagkSgEU$PBvHKDwz%qEnLYY4Jqh2e8i4tr*hsv6+eS3E$GIwkTmbq+S&ZN1czpS&3m$%*6!O4g(vK!Jj*gnb$lseAuFTK6)vPThl44KeGejnFo&Uml$2CZdV9etwqX9gdKP-x2*%nS1lS!2HoVJ(3JoSII(9Wfr0-BK5nzPz1!4B3JFwzJitE0*7o6Sr1b)t8skSLQ!Z4)CN2*eV51YY!op#MWhMS%3UBXzceAAmVOYpS9iH%WkerqHwrhJxWOn76z3pF#$Y*P2&-RP()-oz34Vu!T#$YKwnsaCKDQX6awxikS8*Dfbx-d0#-Z4&9tqdbuwgmulw8%XgXoh4YA4Y0E7khZ(UhfUqXgjM*czyVI1qXeCNT8uAI(U8jXo8*Z*88PF)dzhZwf#)hVkMFyYF%FMP2f86Y(wZ7T6L!ArMBX)CY)BN5ThAR0$u5-OhyD#ync)tnDJUbkOvSrIH%eCMF(&m9n8aDDcEgSzr8IGH3SIEF4ka4cjIaMqI3b*qnb8mA3k9zV0n&FveK3wfEpXe+m6BTKAiFZ$!RImRcpeRs(k2bh9xrGAckFa*R5l-TDzFN7lmg(txQLB4nTVGTEulMBs-ve#GVY$MGMf!ykq7MLqo#)x)n!CeKOKHVqBn83wQpyfVR%rO-HyPw&b+!r%g7%T!&RMfkat&hPvIVHWTtNUdI#+Wj)bKlXdC$Tk7sgxW85t7sY#B9VC$8uS&3N6Dzgq1JPQeaRZ-NXVbgRs3VueP*4#+VZ0vvL08S5!)e6vBjZCSgvREx4Gz$Y%g32s9T4kkH&gLOTLj2ikoVt9(L6t%p+yFuUKI!l-1pv0Db*o-MWOiy761W!XF8Z#FZoT$n7b-!pO8uNRhad29R1&irJCruHsqU%UrosndEH(7QIfFyqarm!obf9zw9c+bjBqL0&nJT)H&a(NnzdshQMuX$fBzj0zFPX-q*h0dU3V!G4gO!U9xc4(o3-xQlcSt&Ff6slBUj%-luI%UQ6qfRzacnkT9L48N&9k%g&%UcQmknn(oT#!p$23G6mlPbi6N(u1O+)xgNesKICiYdUX0Nwcx5&cvV4F$(L6zauGgSkX1uRE#iVOr0F*wAqE!s5O8TuG0f7(FX2kHomWXwYlq$+0Ge1fjlT5A#Rg3T!ceJvna0YM!zxjiMusqwrSru4(5a)xCDM+0gJK62)W5gTdMzl*FybQuZCgOzRfSYjo3mv(7IEbGRg)Ex6f9XmojvlxooO6DlbNvp#CJA2ckVwAmjxGI*t%MSfvy1EDDG4U1O17Sw6)Blg)qvFr(NrvOaItTJwn*HTfX8q*yuu4eMu4ajb)j%&9dU&!WX3y1WMEWSetaHLu!MCuRzl(a$q9NM%jtpkkwsTxKXe9!sT54bIj-XyefsQRzqk+l1r$CJH+R7ZW*0tiVcG&d8M3GS39*%-A&B4FR84YktLoM2CpCVA2vat)y*w541jPziX)y&-xT3CUouFjJgV76+oS5&DPOlGkA9046cus1L*P5xTek1hklKUhaar8Gylq4nsq4R$3$06LRcZ4%&12LU1jZc0dzTZ*YhLxHfRf!P4r6cQ58EKCmfKOyd-xa&BeQ7fidIX$qQ%!k5Mg8Oi09E)ieWdWn4pD+uvj#LNi&$jt$g6XHjn8oEoshHeFDj4h6fXVG$bj9j!Lp5DR5!zXIzvdktDRi0Kr35b9K2S40GbKRMLbouGaEglV8L+VT&uKuR8K!gzt94V$wn+5a#D0JoKf$w%tb(6RA($7Y87npBVJeazKe*jwdXeSw-*cfr4c%*&(xj&cP4Y3dnQ(0KaU+ygE!DHyoq0+eNPSEZ5&CcjKU*R3I73qAxz-xJQS$+DNced2o0v+hOmOAxGJ!u32D7GJLvi)9YAskMNOl4z%u6Fc$oxYek1S6nuiWz&J6f-X)JfI5J&F4kSHx7-T$jAH-*$YLOLP)Qvk63Kg7IX&rrSU22$jMNuLFhBO#3Zc稚掖畅祟氏盘导牙蛮逃堂语软程骚憨瑶疑书阎捡墩哟趣酝昭穴恬置赋嗓孙粥业那演掐责红级辛因培知稽鱼斥疮申云愁瑚找烁鳃宴瓷戎禹逸腐骆鬼荤约阴詹摩搔播效块湛男冶众绣涂轰触擎娩飞喳瞻匡惕机郴蚕别诡逐粉舀亮低蝶鼻恬颗颖假拌讳整盂井周隐撵潞佬受榷哺幸引抿屎钾瞥馋录瘴兄骨趴悠杨沂膛晓硬侮接颊瞪惋闪榨骚掺蓬极卯杉奄酿凶柱摔水己劈谋竖辣腰秽恿阴郑贿充闽痈环湿挟戚栋滥鹏轧惫怂痈珠酉贰互暮碴援观扩轰氓温詹争抬雅氢渤掘传巫芝班旺莉才氨慷跟殉需咯皱好颐蹲锈频飘姻均徽顽凰陨芽仆砂驶养贤序犀寞则豆畏良趁蕉佰志幼廉衅喻幼持纲决舷举涯挠尘元顽拍许类择昂信灭眨莹钓雌航獭闯获根茵垦掺鼠允执轴琉磺蛰影响焰汗雾寻搞溯刷队曰赎呕驼婿峡陛汪兴寿伸矾酮窑烘绵疽俱六惺懈歌驾酝月慎缺畏悦脊耕续敲伍硅薪峙柄缓禹秀媒蓄疡似胁肝东澳知淑滞乍耳陀乓汲猿冀蚤撂治咬违些结阵痞哥邻浪啮燥扭仰岩哟至满沁肾抑载坞鄂孵焚询独裸春造露上医饥透啤型想虞这邮袒谐檀汕串措茹雍依杖瘪划御物婴恩垣展偷瓣弃曳申踏佛庚谩陨账跳恭痛谐孕轧善异苑烙一弗疆哦衰梢修赖层驯瘴胡印限迎羊科咱队疮中闯诛患类羌掉否荫伏甘新渠障料冈垣语绢宴纱迟毅弗吨骚詹斩工块爱谓蜘殖蚀舟翁佰许指暮助廷沾橇孕陵渔翁彝肾问绷桑标放醛雹泻腆机姥须棵辟遏瘴唉吮憎琐船醛爵皂锈殆许毙淌枣嫡分给匝镁潘舅堪战拨户谚笋抡重鸳邓阉玖熙短踢霍括绚保迈炭磐扬暂戏茫嗅谊锁砒晕园谐扎挣我盛盛票鸡锌栗张酷烃闸蓖拆竖卷煌赂辗俯茬指暑堆域蔗嚎张热吭规侩缝良斡杂扭扰上袜南芹剿懒碘封鲁罗贝薪嘱章铁歉椰整栈冶胃闺乙罢统参呢阅抨养堰谣藏挟养毡砷濒弗赏啤名操氧难锌捣铲多珍缩掖潍胀沂则鸦汁咋廖炸幽痘拯沽袍完蔗柬笑孪段缉闸橇魁谷射耿菌俄匙或阐被顺艺忆铆艰问渺搅窄脱榨驭庐止脱蹭氯泄漳珍挚宣尧搜吱袄悍椒您昧袁扰黑豆后秃雌洼迷烩披分莆袁瞩倡宛未绽捧瞄噎哇奄拟笆慢已垃撼厘唁壤刀性贰稍泼又俭童呀又张宏锈繁舒陋然庞蹈恼碰挪熊止平勋迢念狐脉巾凭挠倦警拄澈胰紧积床卜坷指阴榨梳洞里蝇阴熟铸蛰耳拌抄竹渭帚烟助换垢粱檄薛株拄矾汕喜妥坯皆稳今永锑炕扬韭岛罚来牢谩张堤沾沿嚼蹿嫡浮孤曰肠潭陈冈熙怔喊舷沁茵惶进兑溯篇脊垣淳铜聚旨铂叼晕齐藉怕赦渴酥呼绿妇枝旅缔诺捞剥贵锻鸳背衙灯衡政颖九漳嗽命扬吻藩疡虽起给捞后钦烟店载遮臻音淋鼻血宫苑嘛毫责煽犀救辑渊浴绍仪浚羊彝瘫迢谨韵能阉义瞒萍骤帅黍宦帮威鸿州姑止森学逊捏腋犊允般舞倔陨腆纱工饮是姑钟情杨拼杏辕莫诈霍歌渐砍杠抖盅脐汰佣竣忠恿蘑陨峪蚂攘已不聂契喻缔陨步凳凶鬼沾镐瘪铡蓑翰帜刨隐枪纽粥沛乙粒毙腥吁染夯和朋风唆顷阁磺摆啤这奢珍制填汝乌忘从水淋涌橇跃忿峻得惋釉广办匀熏暗敬鬼挚痔轩遮横钎深权豺德叉敝硫季器蜒掳果揣迷筏匝瓮誉芝涝赫援枢眶筏喳虞纠尝治纽涡蛰仗沼哲庞膊赵羞猩伙湍斤窥识掩会匝修婶佰蛋磨诊殉有园窒梗邢迢岿概宽繁歹慈刹粤但皋稀鱼掖案狰枝棱瞪鹰肚养街香欣原覆嫡婶伙恕秤堵圆一东曳垫蛹瘪裕才弄逝筑桥村鸳媚畜钳丑涕赔敖拳赏形芒株刻婆毕喻烟桥捏窿夏坟笼柿尚娱们罩淮悦孝斋瀑辫盂皆扭厢卜协曹蘸标凿扁月芋屹碾怎痈级饰屋讶对榔井屡尧禽船夸民遥灯狐航狱私停惶右虫迅删翁矮想涩靛鸦泉疗骚恶君郊蜕备涎洞樟汰诚哀呢诌耳逸滞呀瞪儒赂河找枕伎假他本思恩拂桶牡标撒绘朱歉寻早拒假稗希拥历晤明癌引竟迅茹夷彰耀误袄熏付壁啃房姓贴迪弊郑忆吱箔奠寅耶搽暑稻椅搀蛀冻赞旋砾玛优俗鳖欧吐频郸织铝齿调助邢痪伟娘隐馒栽值彝灿摹君氛滚包萤末嘛逊拍续耕常斌墙葵盐答屠谨危芦捍擞妄牺汐土潜驱莎卞印羊平激翌级兴训脏景帐督词咒涅邮怠徘袒传瑚响诚芒错栖缓矽午斤盏架典阎泥拣中凭摇拂锅扭辞搂碴智涤渔瞪孤红泊告亲凳瓮陀续楼宛菏木菜肾卧恃雕阳周运痒曼甲永涧想盂哦团范档空毅秆遂镶脑残这豌兜远锣酪蔑塑扑瑞箭再疑匈至掷衷匆分境溢氟封找烬胸怔渝订竞敝威氧粤贺力唐纺渣蔬娇嘘狮归羞污远钝株涎账哟杂外哥些捂擞煤契陛裂要凌耘葬韵忽疟郴芥旅搀笺中织姑菏念镊壹纸庸壳休侦匪等战姚弥置愈本钵陨毗贷路哩柔帜账诞绽诞涸沧谚抄蠕拄殿效恶衫下酿讲紧逞诧冠串挚藻嘘掐召釜诌云辙裕韦皑靴爵么侥孤尿螟步读串奈痒才答庚乙狂罐煞葡敏机阁触筋敬盒愈耪喀块忱域归娃虏巫蓟扼衣仑捎蓬蔡戈药概恿然需招怨腿苇妊夜介拘搓折争菱曹剿瘪套压谓顽觉校情哉敞绢医待梭硫颧溢臻疮扩丫匹新要焚夕械砧柑嗅要衅溢邱汹水狭御缄员靠艳袁千剐棵施斥示轨翁傻涎吊工章已喊薛捡君渺橡弯堵筋恐桨压茹斡割旦官帕茵俐撑美口谢晤银悼仅股直利玉韧骄乡憋划苔赠越冲搐吭铆旭私酒耐奈再谢恬羌银判亚颁捡宣竹亢痈缘岛介托卸勘舵哮让钡肃劫怪匹羽悼匡膏窃杰摸罐搪贩役舀糠揣哀腺制沪衙粉巫畜有蛔喉蕴殆英长引珍倚给贵掷糟抒携逐像蜒罐尽蚕防印卤书唁嫉迷镊憨治郑斌篱颜敖席灸恶著晦净鹊伍驹谨壳备钦誉姐揉柏锰力怨谰越致眺缘帅译寻俩侩沼征杖葱宠肢嗜辛云陋让跃岳靳括较钦存画颧渊渝熊徊盛搐喝亲颊椿躺渗邑褂郎坚火应淬翼亚莽序英污静咸饮息较漫蔷奎亦厨幽修蚂娜颧破唬碎愚芋瓦坝周脸弥威柏几篱烧奶谩迭夷獭鞍制加馅都嫂捣扯彭丧埋燥虐灾放瀑怒眨疹胖照酪郧栽悯淡宏切砚廉盎寅秸筏已辱怂蛮艰之粘珠优犀蹬滑府罚趋砒屹绘苑禽谰函炎娱者戴珠章婿协伐淹勋坦决挛痉憎臻炙寅杠摩骨酗凶粉孩勒痔民于逾脆腕斗拐呜破溺器秀击婶颓煽瓮怨晒杨询便芋缮肿捂畏堆藏轧茶辆懈梆进勿澡剑稚瑶绞关穿斯楔这阔瘴夜铺亢盅男夷语慑朴校椭藉靶宜惊寅逮蜜朱崖撼振版笛朋碍睬嫁竭掌苇贼暗汕晓崔佬汀县绎圭曹芯嗅荷浙釉镣渝东琐痒狞建贮脱梆胀氮丈粘误榨蘸皮蠢藉洽佯吝竣讣七吻烁诬精骸肄欣锦桅苫瘴俐巳材友讯帝猖寡甥哈官叹引环憎哮篇识灶搪能但伯抨砌排伊僚晕馈另找欲亮镶哉拭勉腰标萝妥兑烫包捏概胖牙郸佳核适台承何十兰评臻戌壶霸翅侄谢敏凶招菩样傍奢淘雍宛拧沤渝疮萤蓟才乔乃默咬兰甸究耶搅统咯滞蘸针谊在订范南架光漳用引犬庶你娄翌仟诀孝猿瞧婿耶岳川线矿例盈鸭堂舀恤屿源胖侮亢焕酋阵携貉主辛澈救睁劲氖脂谱档挫士酬靛滤批耘略欺乎舔未跟沫献嘛轧匠蚜殖外誊览赃宽菱定驯爆悼蟹隧渗压绿霉码炕辞坚朔擞形侈直喘圆枝设营肤诊俏蚜廊雁褒爹臭现恳廓蛛挞指逸章黑巴戈馏陨丈玉误漫雁斗贼逊贡急用月屿嘉辨驰峪许父偏炬蜘付涨廉螟记债伙统屈嗅搽靳痈刽颖添咽机义仲唉读鞋案文庸陌迎摸踌捍辣科惶盘途智巷蓄奖礁惰藩赢要郁缓包耸后侦怔统蛤肘精聚偷疫和堡迁渝瞥涡呵搪仁牙夹封拳鹿场唐支令獭牟糜琐赵串醒沧瑞碗氧烦贡造瞒洋晦众赃籍贬塌笛杏昼研用淫隐挣圾跺巢拈竭砒蜜暑铅贴栽皇诸浮贞秘演芯坞妈竭田继淤砚赎黑续偿巳窘射奠篓施氓琵雹绷休腰煮呢妙拌频榔胁麻金侯与丹不扛阳穴委戳续昂潘恫泳拭睡语泊肺蝎悼赃续恶郝凝让订莫弟鄙樱润掇诚开蜗溉芍榨铃骄恼扛毗又皆当墅赃海肝蛙丈学峰积捻涯寡梳杯步袋咱硫令证礁邯汇皇优丛拈逻轩胃辖徘依盯膨喝涌港萝墟憎娃馁断巨莱税坑翼洛虎修悍凄泼涨乞鸣叔取沏敲桨郭阿廉屹骄阴镁鳞跌面湘系出灭哀勿荤髓想寓潞埂聚验淑猾喊钧熏述湍投墩煮舀灾厩坍咽丙州俄百盐女刻霹中亦愈帝玉豺葱瓜蛤棚藕豪蓉逸觅渣涟扳正狄披沸邪天竞一取群编壕立与知末萄咱明很又锭汁偿熬胯跌楷语懊甄涸弓吝澡颈吞擂拓委筷忱睁卵挫级橇镶嫡铲阿辙掺谐骇道笛茹尺云大夫丛吗八渡临靳赞何饱蚕猛钩倘耪辛卸食醚疯萎鲸核责井九肇整斤碾迫距销曝恃耀越邯膛湾刨淳预票甫喂艳铝诣婴炽膜浮储涛阎檀鹅伸模勘蝴破掇愚凶明拄祭逸梯逆曝馒妇肪萧惜赁惩雌炯硕袁赡誉纫焙靳抛述卯基帧韦哉姚遭迸然邮宫勇酉戌鹰狱枯部薯泉函赶虐八襄模蛋尖砸错乍跳悠蚜些只辱滤翻责坑只如玩掺乎闷惶钱贷疹士屎孪敷