超高效液相色谱-串联质谱法同时测定鸡肉中残留的磺胺类和喹诺酮类药物.pdf

书书书杨飞萍，华孝成，邵歆，等超高效液相色谱 串联质谱法同时测定鸡肉中残留的磺胺类和喹诺酮类药物 江苏农业科学，（）：超高效液相色谱 串联质谱法同时测定鸡肉中残留的磺胺类和喹诺酮类药物杨飞萍，华孝成，邵歆，陆晓青（浙江省温州市农产品检验测试中心，浙江温州 ）摘要：建立了鸡肉中 种磺胺类（）和 种喹诺酮类（）药物残留量的超高效液相色谱 串联质谱法（）测定方法，样品经乙腈提取，旋转蒸发浓缩，用正己烷脱脂，采用 多反应监测（）正离子模式测定，同时对 种 和 种 进行定性和定量分析。种 和 种 的检测方法检出限（）为 ，在 范围内线性关系良好，回收率在 之间。说明该方法操作简单、准确、快速，能满足日常大批量快速分析要求。关键词：超高效液相色谱 串联质谱；磺胺类；喹诺酮；残留；鸡肉中图分类号：；文献标志码：文章编号：（）收稿日期：作者简介：杨飞萍（），女，浙江温州人，农艺师，从事农产品质量安全检测工作。：（）；：。磺胺类药物（，）是指具有对氨基苯磺酰胺结构的一类药物的总称，是用于预防和治疗细菌感染性疾病的化学治疗药物 。喹诺酮类药物（，）是一类合成抗生素类药物，在化学上与萘啶酮酸相关，其作用机理是直接作用于细菌核、抑制细菌的 旋转酶，使酶不能在 双链上引入切口，破坏细菌的代谢和繁殖，迅速杀灭细菌 。为了治疗饲养动物的疾病，提高动物抗病能力，和 药物被广泛地应用于动物饲养过程中，从而造成肉类中抗生素的残留。通过任何途径摄入的 都会在人体中蓄积，导致许多细菌产生抗药性，对人类的身体健康危害很大，可能导致甲状腺癌、过敏和抗药性。目前，动物源食品中 或 的检测方法有酶联免疫法 、薄层色谱法 、毛细管电泳法 、高效液相色谱法 和超高效液相色谱 串联质谱法等 。与其他方法相比，超高效液相色谱 串联质谱法技术灵敏度高，选择性和特异性好，抗干扰能力强，能对低浓度样品进行准确的定性确认，是目前较先进的残留分析方法。但测定鸡肉中 或 药物残留的检测方法鲜有报道，或只针对 或 药物中区区几种进行测定。本试验建立了采用超高效液相色谱 串联质谱法同时测定鸡肉中 种 和 种 残留的快速检测方法，该方法大大提高了色谱分析的功效，并在一定程度上实现了药物残留的快速检测，所建方法灵敏度完全可达到目前各国的限量要求。材料与方法 仪器与试剂 超高效液相色谱 串联质谱联用仪，配有电喷雾离子（）源；高速冷冻离心机，超声波清洗仪，旋转蒸发仪，漩涡混匀器。和 标准品均购自 ，纯度均不低于 ；乙腈、甲酸均为色谱纯，正己烷、无水硫酸钠为分析纯，水为超纯水。鸡肉样品购自当地市场。标准工作液的配置标准储备液：分别称取适量 和 标准品，用乙腈配制成质量浓度为 的标准储备液，避光于 下保存。混合标准储备液：准确吸取各 和 标准储备液，用乙腈分别稀释成 混合溶液，避光于 下保存。混合标准工作液：准确吸取混合标准储备液适量，用样品空白基质分别稀释成 、。分析条件色谱条件：色谱柱为 （，）；进样量为 ，柱温为 ；流动相 相为乙腈，相为 甲酸溶液，流速为 ，梯度洗脱条件见表 。表 分离 种 和 种 药物的梯度洗脱程序时间（）各流动相所占比例（）乙腈 甲酸溶液 质谱条件：电喷雾离子（）源，正离子模式；多反应监测（）模式；毛细管电压 ；离子源温度 ；脱溶江苏农业科学 年第 卷第 期剂气 温 度 ；脱溶 剂气流 量 ，碰 撞 气 流 速 ；锥孔反吹气流量 。其他质谱分析参数见表 。表 种 和 种 药物的质谱参数化合物保留时间（）母离子 子离子 定量定性锥孔电压（）碰撞能量（）磺胺醋酰 ；磺胺吡啶 ；磺胺嘧啶 ；磺胺甲基异唑 ；磺胺噻唑 ；磺胺甲基嘧啶 ；磺胺二甲异唑 ；磺胺甲噻二唑 ；磺胺二甲嘧啶 ；磺胺 甲氧嘧啶 ；磺胺甲氧哒嗪 ；磺胺对甲氧嘧啶 ；磺胺氯哒嗪 ；磺胺邻二甲氧嘧啶 ；磺胺间二甲氧嘧啶 ；磺胺苯吡唑 ；诺氟沙星 ；伊诺沙星 ；环丙沙星 ；培氟沙星 ；洛美沙星 ；丹诺沙星 ；恩诺沙星 ；氧氟沙星 ；沙拉沙星 ；司帕沙星 ；双氟沙星 ；样品前处理准确称取（）均质样品，置于 具塞离心管中，加入 无水硫酸钠，再加入 乙腈，涡旋混合 ，超声波提取 。离心 ，取上清液于 鸡心瓶中。残渣中加 乙腈，重复提取 次，合并次提取液，于 水浴旋转蒸发至近干，再在 下用氮气缓缓吹干。加 初始梯度比例流动相超声涡旋溶解残留物，再加入 乙腈饱和的正己烷涡旋混匀 ，转入 具塞离心管中，离心 ，弃上层液，取下层清液，过 滤膜，滤液于 测定。结果与分析 样品前处理条件的选择和优化 萃取溶剂的选择本研究分别用二氯甲烷、乙腈、酸化乙腈（甲酸乙腈溶液）及乙酸乙酯作为提取溶剂，结果发现，二氯甲烷提取液脂肪含量较高，无法旋转蒸发至近干，且不利于净化处理；乙酸乙酯提取回收率达不到要求，酸化乙腈和乙腈提取无实质差别，因此采用乙腈提取。试验过程中用乙腈使蛋白质变性形成沉淀，通过离心后除去。脱水方法样品提取时先加入无水硫酸钠可有效防止样品中的水分及干扰成分进入提取液，同时硫酸钠的存在可以促使蛋白质变性分散，防止样品结成块状，影响提取。提取方式的旋转 分别采用涡旋、超声波提取和涡旋后再超声波 种提取方式。结果表明，涡旋后再超声波提取效果最好，而且回收率比较稳定，因此本方法采用涡旋后再超声波的提取方式。净化方法鸡肉组织中含有大量的脂肪，能否将脂肪除去，净化样品，降低杂质对测定的影响十分重要。由于被测组分的物理化学性质都不溶于正己烷，因此用正己烷除去样品中的脂肪。正己烷的加入时间有旋转蒸发前和在旋转蒸发后加入 种方式。但如果在旋转蒸发前加入，由于正己烷较轻在上层，对乙腈层的完全转移造成困难，对准确定量造成一定的影响。而想要将脂肪净化完全，必须加大正己烷的用量，从成本、保护环境方面考虑，不采取。因此，采用在旋转蒸发后加入正己烷除去脂肪，而且是在将提取溶液准确定容后加入正己烷，就不会对试验结果造成偏差。色谱条件的选择与优化选用 色谱柱，对 长柱和 短柱进行分离度和灵敏度的对比试验，结果表明，长柱的灵敏度比 短柱低，但分离度更好，因此最后选择 长柱。流动相的 值对 和 的分离和保留时间具有显著影响。本试验采用 甲酸 乙腈、乙酸铵 乙腈、乙酸铵 甲酸 乙腈 种流动相体系进行洗脱和分离，结果表明，甲酸 乙腈流动相体系在一定梯度下可以很好地将 种 和 种 分离开来，其灵敏度和分辨率都令人满意。样品基质效应的消除在应用超高效液相色谱 串联质谱法测定复杂样品时，基质对于药物的响应有很大不同，对不同的药物具有增强或抑制效应，从而影响定量的准确性。本试验为了消除基质效应对检测结果的影响，采用空白样品基质配制校准曲线。方法的检出限、回收率、重复性及线性范围以阴性鸡肉为代表，按照上述处理方法对样品中 和 进行 、等 个浓度水平的添加回收试验，其平均回收率在 之间，在 之间。本试验采用在空白组织中添加目标组分的方法，依据特征离子色谱峰的 倍信噪比（）计算最低检出限，结果见表 。结论本方法建立了鸡肉中 种 和 种 药物残留的超高效液相色谱 串联质谱法测定方法。该方法简单、快捷、准确，重现性好，回收率和检测限令人满意，符合我国和国际上对这 类药物的最大允许限量的要求，适合鸡肉样品中 和 药物残留的日常分析。参考文献：杜癑，杨慧元，徐伟东 液相色谱 串联质谱法测定猪肉中 种磺胺及其增效剂残留 药物分析杂志，（）：江苏农业科学 年第 卷第 期表 被测物的线性回归方程、相关系数和最低检测限化合物线性范围（）线性回归方程相关系数最低检测限（）磺胺醋酰 磺胺吡啶 磺胺嘧啶 磺胺甲基异唑 磺胺噻唑 磺胺甲基嘧啶 磺胺二甲异唑 磺胺甲噻二唑 磺胺二甲嘧啶 磺胺 甲氧嘧啶 磺胺甲氧哒嗪 磺胺对甲氧嘧啶 磺胺氯哒嗪 磺胺邻二甲氧嘧啶 磺胺间二甲氧嘧啶 磺胺苯吡唑 诺氟沙星 伊诺沙星 环丙沙星 培氟沙星 洛美沙星 丹诺沙星 恩诺沙星 氧氟沙星 沙拉沙星 司帕沙星 双氟沙星 李雅丽，胥传来喹诺酮类药物残留检测方法 食品科学，（）：李雅丽喹诺酮类兽药残留的酶联免疫检测方法的研究与建立 无锡：江南大学，：郑志高，江红星，吕芳，等磺胺类药物的多残留酶联免疫法检测 检验检疫科学，（）：刘雪红，李娟，董紫凌，等鸡肉中磺胺类药物残留的薄层色谱检测方法 中国畜牧兽医，（）：郝晓丽，谷学新，叶能胜，等毛细管电泳法检测肉类中 种磺胺类药物残留研究 药物分析杂志，（）：李存，江海洋，吴银良，等高效液相色谱 荧光 紫外法测定动物肌肉组织中多类药物残留 分析化学，（）：占春瑞，温志海，卜延刚，等鸡肉中多种喹诺酮类兽药残留量的高效液相色谱测定研究 食品科学，（）：刘秡岩，姜宁，王英峰，等高效液相色谱 电喷雾串联质谱法同时测定鸡肉中残留的磺胺类和氟喹诺酮类兽药 色谱，（）：郭黎明，朱奎，江海洋，等超高效液相色谱 串联质谱法同时测定鸡肝中残留的四环素类、磺胺类和喹诺酮类药物 色谱，（）：李锋格，苏敏，李晓岩，等分散固相萃取 超高效液相色谱 串联质谱法测定鸡肝中磺胺类、喹诺酮类和苯并咪唑类药物及其代谢物的残留量 色谱，（）：櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄 （上接第 页）参考文献：白建波，刘永臻，周银丽，等水杨酸和硝酸银对非洲菊切花保鲜效果的比较研究 安徽农业科学，（）：文素珍，任敬民，伍健威保鲜剂对非洲菊切花保鲜影响的研究 佛山科学技术学院学报：自然科学版，（）：熊元，孙锐锋，王文华，等保鲜剂对非洲菊切花瓶插时间的影响 贵州农业科学，（）：邓群仙，袁秋月，王小蓉，等无机盐对月季切花保鲜的影响 四川农业大学学报，（）：，温晓明切花保鲜剂处理技术 内蒙古农业科技，（）：任秋萍，李海云，王巨媛，等不同保鲜剂对非洲菊切花保鲜效果的研究 山东农业大学学报：自然科学版，（）：，夏宜平，朱祝军，等外源水杨酸对盐胁迫下非洲菊抗氧化酶活性和生理特性的影响 浙江大学学报：农业与生命科学版，（）：田丽波，商桑，王磊，等抗生素对非洲菊切花的保鲜效果 东北林业大学学报，（），江苏农业科学 年第 卷第 期