糖化血红蛋白的标准化.ppt

第一页，共四十四页。三三HbA1c的检测的检测 第二页，共四十四页。目录目录(ml)HbA1c常规测定方法常规测定方法1HbA1c检测的标准化检测的标准化2HbA1c检测的规范化检测的规范化3第三页，共四十四页。HbA1c的常规的常规(chnggu)测定测定 41978年年-第一台第一台商品化仪器问世商品化仪器问世1988年年-美国糖尿病协会（美国糖尿病协会（ADA）建议：）建议：HbA1c 常规检测项目常规检测项目(xingm)目前检测方法目前检测方法第四页，共四十四页。原理原理 不同方法不同方法测测定定(cdng)(cdng)糖化血糖化血红红蛋白不同的蛋白不同的组组分分 HbA1c 、HbA1（A1a+A1b+A1c）或）或总总糖化血糖化血红红蛋白蛋白目前皆以目前皆以HbA1c或等同于或等同于HbA1c来报告结果来报告结果 电荷不同电荷不同离子交换色谱法离子交换色谱法电泳电泳结构不同结构不同免疫法免疫法亲和层析法、酶法亲和层析法、酶法第五页，共四十四页。HbA1c测定方法测定方法我国（室间质评）国际（CAP能力验证）2011年 2008年 2011年 1995年 免疫法 26%36%71%11%离子交换色谱法 53%44%28%24%亲和层析法 10%9%1%54%其它 11%11%电泳法 11%从室间质评回报统计(tngj)的在不同时间使用不同的GHB测定方法的实验室比例第六页，共四十四页。目录目录(ml)HbA1c常规测定方法常规测定方法1HbA1c检测的标准化检测的标准化2HbA1c检测的规范化检测的规范化3第七页，共四十四页。标准化标准化目的目的:实现检验结实现检验结果的可比性果的可比性是保是保证检验证检验质质量手段量手段(shudun)(shudun)意意义义（益（益处处）可以建立起普遍接受（可用）的参考区间可以建立起普遍接受（可用）的参考区间可以合并分析、比较不同医学中心的研究资可以合并分析、比较不同医学中心的研究资料料,促进医学研究和研究成果的转化促进医学研究和研究成果的转化能够有效地应用询证医学和检验医学实践指能够有效地应用询证医学和检验医学实践指南南第八页，共四十四页。HbA1c标准化标准化九十年代中晚期，美国糖尿病控制九十年代中晚期，美国糖尿病控制(kngzh)与并发与并发症研究症研究(DCCT)和英国大规模的前瞻性糖尿病和英国大规模的前瞻性糖尿病研究研究(UKPDS)的研究结果显示：强化的血糖控的研究结果显示：强化的血糖控制能显著降低糖尿病并发症的危险和进展，强制能显著降低糖尿病并发症的危险和进展，强调了调了HbA1c在糖尿病患者中血糖控制监测的在糖尿病患者中血糖控制监测的作用。作用。从那时起，大多数临床糖尿病组织都将从那时起，大多数临床糖尿病组织都将 HbA1c作为糖尿病治疗目标，作为糖尿病治疗目标，糖化血红蛋白检糖化血红蛋白检测测在世界范围内被广泛应用在世界范围内被广泛应用.第九页，共四十四页。1993 CAP SURVEY(mean 2SD)1050%实验室报告实验室报告(bogo)HbA1c 21%实验室报实验室报告告HbA129%实验室报实验室报告告GHB多数实验室结果与多数实验室结果与靶值偏倚很大，不靶值偏倚很大，不具有可比性具有可比性第十页，共四十四页。NGSP（National Glycohemoglobin Standardisation Program：美国美国国家糖化国家糖化(tnghu)血红蛋白标准化计划血红蛋白标准化计划）11 美国临床化学协会（AACC）在1993年成立分委会进行GHB测定的标准化工作，使不同实验室（方法）的结果可溯源至DCCT的参考结果。标准化工作由美国国家糖化血红蛋白标准化计划（NGSP）指导委员会于1996年完成。目的：标准化糖化血红蛋目的：标准化糖化血红蛋白检测，使临床实验室的白检测，使临床实验室的测定结果与测定结果与DCCT具有可具有可比性比性该体系在校准和规范该体系在校准和规范(gufn)(gufn)商商 业化业化HbA1cHbA1c检测领域发挥了极其检测领域发挥了极其重要的作用。重要的作用。第十一页，共四十四页。NGSP对厂家方法对厂家方法(fngf)的认证的认证 12NGSP要求：生产厂家有责任确保要求：生产厂家有责任确保(qubo)其生产的试剂、校准品、质控品、其生产的试剂、校准品、质控品、（色谱柱）所测结果与认证结果保持一致（色谱柱）所测结果与认证结果保持一致认证标准：逐步提高认证标准：逐步提高认证有效期：认证有效期：1年年http:/www.ngsp.org/docs/methods.pdf第十二页，共四十四页。NGSP对实验室的认证对实验室的认证(rnzhng)由由NGSP的二级参考实验室来对实验室进行认证工作的二级参考实验室来对实验室进行认证工作得到得到(d do)认证的实验室所测结果是可靠的认证的实验室所测结果是可靠的认证标准：逐步提高认证标准：逐步提高认证有效期：认证有效期：1年年http:/www.ngsp.org/docs/labs.pdf我国目前有近我国目前有近20家实验室得到认证家实验室得到认证第十三页，共四十四页。CAP SURVEY (mean 2SD)142003年，年，90%实验室以实验室以HbA1c报告报告(bogo)结果，室间结果，室间CV 5%，测定值与靶值的偏倚测定值与靶值的偏倚 0.8%HbA1c第十四页，共四十四页。IFCC国国际际(guj)标标准化准化 151995年年IFCC成立成立HbA1c标标准化工作准化工作组组，旨在建立具有高，旨在建立具有高计计量学水准的参考系量学水准的参考系统统，用于，用于HbA1c检测检测的的标标准化和校准化和校准，准，实现实现HbA1c测测定的全球可比性定的全球可比性明确定明确定义义HbA1c葡萄糖与血葡萄糖与血红红蛋白蛋白链链N末端末端(m dun)缬缬氨酸残基氨酸残基稳稳定定结结合的化合物合的化合物.建立一个特异建立一个特异测测定定HbA1c的参考方法的参考方法 高效液相色谱串联质谱或高效液相色谱串联毛高效液相色谱串联质谱或高效液相色谱串联毛 细管电泳细管电泳制制备纯备纯化的化的HbA1c和和 HbA0标标准物准物质质建立国建立国际际参考参考实验实验室网室网络络完成了与指定比完成了与指定比对对方法的比方法的比较较工作工作第十五页，共四十四页。参考方法参考方法(fngf)原理原理HbA0六肽六肽HbA1c六肽六肽谷氨酸内切酶谷氨酸内切酶第十六页，共四十四页。参考方法参考方法(fngf)流程流程 17溶血液溶血液(xuy)制备制备酶解酶解HPLC串联串联(chunlin)毛毛细管电泳细管电泳HPLC串联质谱串联质谱第十七页，共四十四页。IFCC结结果与指定比果与指定比对对方法方法(fngf)结结果之果之间间的关的关系系HbA1c-NGSP =0.915 HbA1c-IFCC+2.15 (r2=0.998)Clin Chem.2004,50:166-174 回归方程能够将IFCC的结果(ji gu)与DCCT所得出的有着重要临床意义的结果联系起来。第十八页，共四十四页。IFCC 结果与比对方法结果与比对方法(fngf)结果的关系结果的关系 19 IFCCHbA1c(mmol/mol)NGSPHbA1c(%)JDSHbA1c(%)SwedishHbA1c(%)eAG(mmol/l)4265.850岁 5.37.05376.66.138.66487.77.210.27598.78.311.886109.79.413.4971110.710.514.91081211.711.616.5第十九页，共四十四页。小结小结(xioji)临床试验确立了临床试验确立了HbA1c和糖尿病并发症之间和糖尿病并发症之间的相关性，将这些试验结果的相关性，将这些试验结果(ji gu)统一后，统一后，NGSP非常成功地降低由于不同实验方法和非常成功地降低由于不同实验方法和不同实验室所造成不同实验室所造成HbA1c的差异。的差异。IFCC的参的参考方法有利于将剂量溯源升级到更高等级的考方法有利于将剂量溯源升级到更高等级的参考系统。参考系统。已建立起这两种单位相互转换的等式。报告已建立起这两种单位相互转换的等式。报告何种单位由各国自行决定。何种单位由各国自行决定。第二十页，共四十四页。小结小结(xioji)HbA1c是糖尿病血糖控制的金标准，是国是糖尿病血糖控制的金标准，是国际专家委员会、际专家委员会、WHO和许多国家的糖尿病和许多国家的糖尿病诊断标准，其测定结果诊断标准，其测定结果(ji gu)应该标准化应该标准化HbA1c的测定方法有多种，测定原理、组的测定方法有多种，测定原理、组分各不相同，由于分各不相同，由于IFCC及及NGSP的标准化的标准化工作，目前都以工作，目前都以HbA1c或等同于或等同于HbA1c来来报告结果报告结果国际上存在不同的标准化组织，不同组织的国际上存在不同的标准化组织，不同组织的结果数值是不同的结果数值是不同的第二十一页，共四十四页。目录目录(ml)HbA1c检测的标准化检测的标准化2HbA1c常规测定方法常规测定方法1HbA1c检测的规范化检测的规范化3第二十二页，共四十四页。HbA1c标准化目标标准化目标(mbio)精密度：室间变异系数（精密度：室间变异系数（CV）5%只有控制室内（总）只有控制室内（总）CV3%，才可能实，才可能实现室间现室间CV5%准确度：准确度：国际糖尿病专家委员会、国际糖尿病专家委员会、ADA推荐推荐(tujin)：0.5%HbA1c准确度建立在精密度基础上准确度建立在精密度基础上第二十三页，共四十四页。2009年美国年美国99%溯源溯源(syun)到到DCCT/UKPDS 英国英国97%、加拿大加拿大100%室间室间CV 5%，测定，测定(cdng)值与靶值的值与靶值的Bias0.3%第二十四页，共四十四页。CAP SURVEY(mean 2SD)252010年，年，99%实验室以实验室以HbA1c报告结果，室间报告结果，室间CV 5%，测定测定(cdng)值与靶值的偏倚值与靶值的偏倚 0.8%HbA1c第二十五页，共四十四页。国内、外国内、外变变异异(biny)(biny)度度对对比比 2626靶值：5.4最大值：6.3 最小值：4.6变异系数：3.5靶值：5.5最大值：7.2最小值：3.9变异系数：8.41 所有(suyu)仪器组 2 Abbott Architect System/Aeroset组 3 Bio-Rad HPLC组 4 TOSOH G7组 5 Drew DS5/Bio-Rad Diastat组 6 其它仪器组 7 Primus HPLC组 8 NycoCard Reader II组 9 ARKRAY HA-8160组 10 Beckman Synchron Systems组 11 Olypus AU Systems组 12 Roche COBAS,Roche/Hitachi组 13 惠中MQ-2000我国室间质评我国室间质评CAP能力能力(nngl)验验证证第二十六页，共四十四页。我国我国201111样样本本(yngbn)结结果果(mean 2SD）靶靶值：6.6%6.6%HbA1cHbA1c组实验室数室数平均平均值中位数中位数标准差准差 变异系数（异系数（%）最大最大值 最小最小值Abbott Architect Abbott Architect System/AerosetSystem/Aeroset组14146.55 6.55 6.59 6.59 0.73 0.73 11.15 11.15 7.74 7.74 5.20 5.20 Bio-Rad HPLCBio-Rad HPLC组1671676.53 6.53 6.60 6.60 0.29 0.29 4.51 4.51 7.10 7.10 5.80 5.80 TOSOH G7TOSOH G7组69696.71 6.71 6.70 6.70 0.42 0.42 6.31 6.31 8.10 8.10 5.00 5.00 Drew DS5/Bio-Rad DiastatDrew DS5/Bio-Rad Diastat组28287.21 7.21 7.05 7.05 0.67 0.67 9.30 9.30 8.45 8.45 6.20 6.20 其它其它仪器器组58586.49 6.49 6.57 6.57 0.69 0.69 10.64 10.64 8.00 8.00 4.70 4.70 Primus HPLCPrimus HPLC组34346.80 6.80 6.80 6.80 0.21 0.21 3.04 3.04 7.30 7.30 6.37 6.37 NycoCard Reader IINycoCard Reader II组24246.40 6.40 6.40 6.40 0.81 0.81 12.67 12.67 8.70 8.70 4.90 4.90 ARKRAY HA-8160ARKRAY HA-8160组32326.78 6.78 6.80 6.80 0.25 0.25 3.67 3.67 7.20 7.20 6.10 6.10 Beckman Synchron SystemsBeckman Synchron Systems组8 86.81 6.81 6.71 6.71 0.63 0.63 9.21 9.21 7.60 7.60 5.76 5.76 Olypus AU SystemsOlypus AU Systems组46466.34 6.34 6.28 6.28 0.84 0.84 13.19 13.19 8.44 8.44 4.58 4.58 Roche COBAS,Roche/HitachiRoche COBAS,Roche/Hitachi组79796.63 6.63 6.67 6.67 0.53 0.53 7.98 7.98 7.90 7.90 5.40 5.40 惠中惠中MQ-2000MQ-20008 87.95 7.95 7.60 7.60 0.93 0.93 11.70 11.70 9.30 9.30 6.70 6.70 第二十七页，共四十四页。2010-2011国内外国内外变变异异(biny)度度对对比比我国我国CAP第二十八页，共四十四页。56家三甲医院实验室，家三甲医院实验室，采用采用(ciyng)(ciyng)国际普遍国际普遍使用的方法使用的方法（HPLC法法、免疫法）免疫法）2010年年EQA我国不同级别我国不同级别(jbi)(jbi)实验室变异度对比实验室变异度对比第二十九页，共四十四页。2010年我国参加年我国参加(cnji)国国际际比比对对平均值Bias（%HbA1c)CV（%）C16.53 0.32.52 C28.00 0.222.82 C310.49 0.263.18 C46.45 0.062.52 NGSP靶值1616家三甲医院家三甲医院(yyun)(yyun)实验室，采用国际普遍使用的方法实验室，采用国际普遍使用的方法（HPLC法法、免疫法）免疫法）第三十页，共四十四页。影响影响检测检测(jin c)质质量的因素量的因素方法选择方法选择使用方法种类多，有的方法没有进行标准化认证使用方法种类多，有的方法没有进行标准化认证(rnzhng)(rnzhng)方法使用方法使用人员：能力参差不齐人员：能力参差不齐室内质控：少做、不做室内质控：少做、不做校准：不能定期、定时校准，不使用配套校准品校准：不能定期、定时校准，不使用配套校准品试剂：色谱柱（适用时）：超限使用试剂：色谱柱（适用时）：超限使用仪器：不能定期维护、保养仪器：不能定期维护、保养第三十一页，共四十四页。HbA1c检测检测(jin c)质量保证质量保证 31宗旨：建立宗旨：建立HbA1c检测的检测的技术规范，提高技术规范，提高HbA1c测定结果的可比性程度测定结果的可比性程度指南从指南从方法的选择方法的选择方法的规范使用方法的规范使用测定结果质量的监测测定结果质量的监测三个质量环节三个质量环节(hunji)制定了制定了系统的技术规范原则，系统的技术规范原则，以保证糖化血红蛋白测以保证糖化血红蛋白测定结果质量定结果质量第三十二页，共四十四页。方法方法(fngf)的选择的选择 32应选用测定结果可溯源至应选用测定结果可溯源至IFCC参考系统的参考系统的分析系统，例如分析系统，例如(lr)：获得：获得NGSP认证。认证。NGSP认证的有效期为认证的有效期为1年，查询网址：年，查询网址：www.ngsp.org/docs/methods.pdf实验室应知晓所选分析系统可能存在的干扰实验室应知晓所选分析系统可能存在的干扰因素因素不同分析系统干扰因素是不同的不同分析系统干扰因素是不同的POCT（point-of-care testing）方法）方法的精准性不能满足临床需求，目前不应用于的精准性不能满足临床需求，目前不应用于糖尿病的诊断糖尿病的诊断第三十三页，共四十四页。方法方法(fngf)性能性能 33实验室准备采用一个新的分析系统（新仪器实验室准备采用一个新的分析系统（新仪器(yq)、新试剂）测定临床样品前，应对系统性能进行验新试剂）测定临床样品前，应对系统性能进行验证证精密度：室内精密度：室内CV3%目前许多测定方法的室内目前许多测定方法的室内CV小于小于2%只有控制室内只有控制室内CV小于小于3%，才能实现室间，才能实现室间CV小小于于5%，应控制室内，应控制室内CV小于小于3%第三十四页，共四十四页。精密度实验精密度实验(shyn)方法方法分别采用不少于分别采用不少于2个水平的质控物或样品个水平的质控物或样品（高、低值），每天测定（高、低值），每天测定2次（次（2次时间间次时间间隔不少于隔不少于2小时），每次重复测小时），每次重复测2个结果，个结果，测定测定20个工作日，以个工作日，以20个工作日的个工作日的80个个结果计算平均值、标准差及变异系数结果计算平均值、标准差及变异系数时间长度很重要，因为只有在相对较长的时间内，时间长度很重要，因为只有在相对较长的时间内，一些一些因素（不同批号试剂因素（不同批号试剂/校准物校准物/色谱柱（适用时）、校准频色谱柱（适用时）、校准频率、不同操作人员、不同分析仪状况、不同环境率、不同操作人员、不同分析仪状况、不同环境(hunjng)条件条件等）对测定结果的影响才能体现，可以客观反映实际情况等）对测定结果的影响才能体现，可以客观反映实际情况第三十五页，共四十四页。方法方法(fngf)的规范化使用的规范化使用实验室应制定标准操作程序实验室应制定标准操作程序项目名称项目名称方法学原理方法学原理样本（采血管样本（采血管/抗凝剂、储存）抗凝剂、储存）校准程序（校准日期间隔、校准方、校准方法）校准程序（校准日期间隔、校准方、校准方法）室内质控程序室内质控程序样品的测定样品的测定(cdng)程序程序试剂试剂色谱柱（适用时）色谱柱（适用时）干扰因素干扰因素参考区间（范围）参考区间（范围）维护程序维护程序 第三十六页，共四十四页。内部内部(nib)质量控制质量控制室内质控室内质控每个测定日的开始和结束均应做质控分析每个测定日的开始和结束均应做质控分析应同时测定至少应同时测定至少2个不同水平（高、低值）的个不同水平（高、低值）的质控品质控品冻干粉质控品在更换试剂或色谱柱时可能冻干粉质控品在更换试剂或色谱柱时可能(knng)会有基质效应，程度取决于所用方法会有基质效应，程度取决于所用方法更换试剂、校准物、仪器设备的关键配件或质更换试剂、校准物、仪器设备的关键配件或质控值超出质控限，应再做质控控值超出质控限，应再做质控第三十七页，共四十四页。样品采集样品采集(cij)、处理和储存、处理和储存检测样品不受饮食和采血时间的影响检测样品不受饮食和采血时间的影响不同测定方法的样品稳定性是不同的不同测定方法的样品稳定性是不同的一般情况下，全血样品在一般情况下，全血样品在4储存储存(chcn)，可以稳定可以稳定1周周在在-70或更低温度可以长期储存，至或更低温度可以长期储存，至少稳定少稳定1年以上，但不宜在年以上，但不宜在-20长期储长期储存存任何对样品的不当处理，如置于高温环境，任何对样品的不当处理，如置于高温环境，可引入大量未知干扰，干扰程度取决于所可引入大量未知干扰，干扰程度取决于所用方法用方法第三十八页，共四十四页。HbA1c的影响的影响(yngxing)因素因素 38红细胞寿命的改变红细胞寿命的改变溶血性贫血，大量失血、脾肿大、再生障碍性贫血溶血性贫血，大量失血、脾肿大、再生障碍性贫血变异血红蛋白变异血红蛋白衍生血红蛋白衍生血红蛋白严重严重(ynzhng)的肾病、嗜酒的肾病、嗜酒药物药物大剂量水杨酸、大剂量水杨酸、VitC、VitE严重的黄疸、高脂血症严重的黄疸、高脂血症Schiff 碱的干扰碱的干扰第三十九页，共四十四页。测定质量测定质量(zhling)的监测的监测室间质评室间质评 39室间质量评价（能力验证，室间质量评价（能力验证，PT）计划是）计划是目前验证实验室测定结果目前验证实验室测定结果(ji gu)是否具有是否具有可比性的有效手段可比性的有效手段室间质评样品应与临床样品同样对待室间质评样品应与临床样品同样对待是实验室质量改进的积极组成部分是实验室质量改进的积极组成部分第四十页，共四十四页。保证保证(bozhng)HbA1c检测质量检测质量三个质量环节保证三个质量环节保证(bozhng)HbA1c测定结果质量测定结果质量选用一个可靠的分析系统选用一个可靠的分析系统规范化使用分析系统规范化使用分析系统室内质控室内质控参加室间质量评价参加室间质量评价 （能力验证）计划（能力验证）计划生产厂家生产厂家-提高出厂方法质量提高出厂方法质量 加强对用户的培训加强对用户的培训 第四十一页，共四十四页。小小结结(xioji)教育计划目的：提高对教育计划目的：提高对HbA1c 的认知程度的认知程度很多检测方法的性能已能满足临床的需要很多检测方法的性能已能满足临床的需要（可靠地区分（可靠地区分0.5%的差异），但仍有些的差异），但仍有些是达不到要求，因此是达不到要求，因此(ync)选择稳定可靠的、选择稳定可靠的、可溯源的可溯源的HbA1c检测系统尤其重要检测系统尤其重要.通过对通过对HbA1c检测的规范化、标准化，提检测的规范化、标准化，提高高质质量：量：为临为临床提供有意床提供有意义义的糖尿病的糖尿病诊诊治依治依据。据。第四十二页，共四十四页。Better A1c test meansBetter diabetes care谢 谢第四十三页，共四十四页。内容(nirng)总结三。目的:实现检验结果的可比性是保证检验质量手段。能够(nnggu)有效地应用询证医学和检验医学实践指南。室间CV 5%，测定值与靶值的Bias0.3%。Roche COBAS,Roche/Hitachi组。16家三甲医院实验室，采用国际普遍使用的方法（HPLC法、免疫法）。室内质控：少做、不做。三个质量环节制定了系统的技术规范原则，以保证糖化血红蛋白测定结果质量。三个质量环节保证HbA1c测定结果质量。谢 谢第四十四页，共四十四页。