红细胞免疫及检测.ppt

血型与输血的几个问题血型与输血的几个问题(wnt)(wnt)探讨探讨山西省血液山西省血液(xuy)(xuy)中心中心太原市红十字血液中心太原市红十字血液中心 张德梅张德梅 第一页，共七十九页。血站 医院输血科 临床科室临床用血的关键环节临床用血的关键环节临床用血管理者临床医生输血科工作人员护士安全(nqun)而有效的输血一个永恒的需要被唤醒的挑战第二页，共七十九页。医生对输血科的抱怨血液供应不及时或“退货”输血前检测的等待时间长对样本的采集(cij)要求高对送样的要求高输血科对医生的抱怨送样不及时预约血液随意化紧急输血不敢突破血型同型限制第三页，共七十九页。1.血型鉴定困难，无法确定血型2.产生了不规则抗体3.交叉配血不合，无法发血4.发生(fshng)输血反应5.输血无效红细胞输血面临红细胞输血面临(minlng)(minlng)的免疫问题的免疫问题第四页，共七十九页。主要主要(zhyo)(zhyo)内容内容 一、为什么会出现血型鉴定困难？（W）二、血型鉴定困难如何输血（H）三、疑难血型鉴定举例（H）四、安全(nqun)输血的原则（H）第五页，共七十九页。为什么会出现为什么会出现(chxin)(chxin)血型鉴定困难血型鉴定困难？1.检测方法2.干扰(gnro)因素 生理因素生理因素 实验操作实验操作 临床治疗临床治疗 疾病原因疾病原因3.特殊抗原第六页，共七十九页。ABOABO血型的检测血型的检测(jin c)(jin c)原理原理ABO血血型型：根据红细胞膜上有无A抗原或/和B抗原，将血型分为A型、B型、AB型及O型四种。A型人血清中含抗B抗体，B型人血清中含抗A抗体，O型人血清中含抗A和抗B抗体，AB型人血清中不含ABO抗体。正定型正定型：采用抗A和抗B试剂血清以凝集实验来检定红细胞上有无对应的A抗原或B抗原，正常常凝集强度大于2+反定型反定型：采用A型试剂红细胞和B型试剂红细胞检测血清中有无相应的抗A抗体和抗B抗体，正常凝集强度大于1+同时同时(tngsh)(tngsh)从正定型和反定型两项实验来检定样本的从正定型和反定型两项实验来检定样本的ABO血血型。型。第七页，共七十九页。-正定型(dng xng)弱于2+，反定弱于1+？-正反定型不一致？第八页，共七十九页。干扰血型正确干扰血型正确(zhngqu)(zhngqu)检定的常见因检定的常见因素素n生理因素生理因素 实验技术原因实验技术原因(yunyn)(yunyn)-年龄 -样本混淆-ABO亚型 -静脉输液处采样 -先天无抗体 -试剂质量问题或漏加试剂 -冷凝集素 -实验操作不规范第九页，共七十九页。n临床治疗临床治疗(zhlio)(zhlio)-大量输液-静脉输入高分子药物静脉输入高分子药物如甘露醇、右旋糖酐，羟乙基淀粉等，可导致红细胞呈钱串状，干扰结果判定。-近期输过异型红细胞（包括宫内输血）或异型血浆-异基因造血干细胞移植第十页，共七十九页。n疾病原因疾病原因-白血病或某些其他造血系统恶性疾患，白血病血型白血病血型“变异变异”变少不变多，疾病缓解后，血型抗原恢复。-肝脏疾病、结核病等血浆蛋白紊乱干扰(gnro)ABO正定型呈钱串样。-丙球蛋白过低血症-真性红细胞增多症、多发性骨髓瘤等-不规则抗体-感染革兰阴性（G）菌感染第十一页，共七十九页。第十二页，共七十九页。第十三页，共七十九页。血型鉴定困难 参照临床医生对疑难疾病的诊断方式，例如(lr)休克原因待查（心源性？）ABO血型待定（A亚型？）休克原因待查 不影响临床抢救血型待定 不影响输血抢救 第十四页，共七十九页。ABO血型鉴定困难如何输血？O型红细胞AB型血浆(xujing)医院制定医院制定特殊情况紧急抢救用血预案特殊情况紧急抢救用血预案医患双方共同签署医患双方共同签署 特殊情况紧急抢救输血特殊情况紧急抢救输血治疗知情同意书治疗知情同意书第十五页，共七十九页。特殊特殊(tsh)(tsh)情况下用血预案情况下用血预案ABO疑难血型患者紧急抢救(qingji)输血：采用（非同型输血=异型输血）配合性输血，主侧配血相合的原则血液输注首选O型红细胞，须进行主侧交叉配血血浆输注应选用AB型配合性输血是指供受双方ABO血型相同时交叉配血相合或不相合情况下的输血原则。非同型输血是指在紧急情况下,O型供血者血液给非O型受血者使用的输血原则,或ABO血型相同，Rh阴性受血者接受Rh阳性血液的输血原则。第十六页，共七十九页。患者ABO疑难血型确认后，若需继续输血治疗(zhlio)，应重新抽取患者血标本进行交叉配血试验，并遵循以下原则输血：交叉配血试验阴性者，可输注与患者ABO同型红细胞；交叉配血试验阳性者，应继续输注O型红细胞尽早输注与患者ABO/RhD血型同型血小板。第十七页，共七十九页。血型鉴定血型鉴定(jindng)(jindng)困难举例困难举例诊断：诊断：正定型凝集减弱正定型凝集减弱原因：样本中过剩的血型物质引起的中和作用原因：样本中过剩的血型物质引起的中和作用 患者可能患者可能(knng)(knng)患有：胃癌患有：胃癌 胰腺癌胰腺癌 粘液性卵巢囊粘液性卵巢囊肿肿解决办法：充分洗涤红细胞解决办法：充分洗涤红细胞第十八页，共七十九页。血型鉴定血型鉴定(jindng)(jindng)困难举例困难举例诊断：诊断：正定型凝集正定型凝集(nngj)(nngj)减弱减弱原因：抗原表达抑制原因：抗原表达抑制 患者可能患有：白血病患者可能患有：白血病 霍奇金氏病霍奇金氏病一般病情缓解后血型抗原强度恢复解决办法：增加解决办法：增加-H、-A，B以及基因检测以及基因检测第十九页，共七十九页。血型鉴定困难血型鉴定困难(kn nn)(kn nn)举例举例诊断：诊断：正定型凝集减弱正定型凝集减弱原因：抗原位点数目少，亚型抗原原因：抗原位点数目少，亚型抗原解决办法：增加解决办法：增加-A1、-H、-A，B以及基因检测以及基因检测(jin c)(jin c)抗-A或抗-B与抗-AB、-H的凝集强弱不一致第二十页，共七十九页。血型鉴定困难血型鉴定困难(kn nn)(kn nn)举例举例A1和A2是最常见的亚型，只有1%的人有一个更弱的亚型确定具体亚型参照(cnzho)ABO亚型的血清学特征参照基因检测序列测定的结果第二十一页，共七十九页。第二十二页，共七十九页。第二十三页，共七十九页。解决办法-抗原-抗体增强技术（4孵育1小时替代离心看结果）-吸收/放散试验-高效价的人源血清-血型物质检测(jin c)-DNA鉴定-了解病史第二十四页，共七十九页。正定型正定型(dng xng)(dng xng)额外反应额外反应诊断：正定型额外反应原因：感染革兰氏阴性杆菌获得性B患者可能患有结肠癌只有(zhyu)A型红细胞可以出现感染清除，获得性B现象消失解决办法：酸化的-B检测第二十五页，共七十九页。正定型额外正定型额外(wi)(wi)反应反应诊断：正定型(dng xng)额外反应原因：华通氏胶（构成脐带的凝胶状物质）新生儿患者解决办法：多次洗涤细胞第二十六页，共七十九页。反定型反定型(dng xng)(dng xng)额外反应额外反应诊断：反定型额外反应原因(yunyn)：亚型，产生了亚型抗体亚型不同型输血、天然产生解决办法：鉴定血型是否为亚型第二十七页，共七十九页。反定型反定型(dng xng)(dng xng)额外反应额外反应诊断：反定型额外反应原因：产生了不规则抗体妊娠或不同型输血、天然产生解决办法：1.做抗体筛查和鉴定(jindng)2.用相应阳性红细胞吸收后做血型鉴定第二十八页，共七十九页。反定型额外反定型额外(wi)(wi)反应反应诊断：反定型额外(wi)反应原因：患者AIHA，有自身抗体，红细胞被抗体高度包被但没有特异性，直抗阳性解决办法：加自身对照冷抗体：37盐水洗涤红细胞至直抗阴性后检定血型。温抗体：红细胞经甘氨酸/HCl或二磷酸氯喹放散至直抗阴性后检定血型自身细胞吸收至自身对照阴性后鉴定血型第二十九页，共七十九页。混合混合(hnh)(hnh)凝集（凝集（mfmf）混合凝集视野（mf）：部分红细胞凝集（大凝集块）部分红细胞均匀分布（背景浑浊）-近期输异型血-造血干细胞移植-血细胞嵌合-A3、B3亚型*文献报告：白血病有些所有红细胞减弱，有些存在两种细胞。病例收集(shuj)，基因研究第三十页，共七十九页。ABO血型不同的造血干细胞移植后，如果植入存活(cn hu)，受者逐渐转变为供者血型的过程中，可能呈嵌合体状态。如果供者O型，受者非O型，受者的A或B抗原逐渐减弱，抗体逐渐被检出。是移植物存活的指标之一。第三十一页，共七十九页。三个月内输异型血，一般直接抗人球蛋白试验（DAT）阳性血型鉴定：毛细管离心法（分离年轻(ninqng)和衰老红细胞）DNA鉴定（供者白细胞在受者外周血中存活期短，一般不干扰受者DNA鉴定）第三十二页，共七十九页。第三十三页，共七十九页。ABOABO血型检定血型检定(jindng)(jindng)方法方法-玻片法 简单、快速，基本没有实验条件的限制-试管法 准确可靠(kko)-微板法 适用于大批量样本实验-微柱凝胶卡法 准确，便于保存和复核不同的方法用途不同，实验条件不同第三十四页，共七十九页。用洗涤充分的红细胞-可以去除红细胞上黏附的蛋白的干扰-可以去除样本血浆中含对试剂成分反应的物质。试管方法(fngf)为经典方法(fngf)*离心机离心力校正。第三十五页，共七十九页。微柱凝胶实验(shyn)（简称MCGT）1986年法国的YvesLapierre首先发明此方法,1994年获美国FDA批准使用-凝胶过滤技术和免疫学结合的产物原理：在充有凝胶的微柱内腔中，加入红细胞和血清，把产生凝集的细胞团块阻挡于凝胶顶部，没有产生凝集的单个细胞则能够通过离心沉降于微管底部。反应的载体：微柱内腔关键环节：凝胶筛子第三十六页，共七十九页。常用(chn yn)凝胶为葡聚糖凝胶（Sephadex）由直链的葡聚糖分子和交关剂3-氯1，2-环氧丙烷交联而成。凝胶中网孔的大小可通过调节葡聚糖和交联剂的比例来控制。交联度越大，网孔结构越紧密，交联度越小，网孔结构就越疏松。第三十七页，共七十九页。微柱凝胶引起微柱凝胶引起(ynq)(ynq)的假双的假双群群微柱凝胶卡（微柱凝胶实验）血型鉴定(jindng)中常见问题“假”双群双群混合凝集，凝集的红细胞出现在凝胶介质的顶部，游离红细胞出现在凝胶介质的底部。第三十八页，共七十九页。为什么会产生“假”双群？标本(biobn)中存在的可能阻碍红细胞沉降的物质血浆或血清中的纤维蛋白原被检红细胞陈旧破碎的膜被检标本被细菌污染（污染血清 抗h；污染细胞 T抗原暴露）*抗原抗体比例不合适2-5%的红细胞悬液，多次离心，能正确解释，提供输血建议第三十九页，共七十九页。解决办法试管法血浆要抗凝充分，血清要去纤维蛋白(xin wi dn bi)原充分洗涤红细胞新鲜的标本专用离心机第四十页，共七十九页。微柱凝胶引起微柱凝胶引起(ynq)(ynq)的假阴性反的假阴性反应应引起假阴性结果的几种可能性抗原抗体(kngt)过少、过弱抗原抗体比例不合适离心力多大，弱阳性凝集漏过凝胶质量欠佳第四十一页，共七十九页。解决办法试管(shgun)法充分洗涤红细胞新鲜的标本专用离心机 第四十二页，共七十九页。RhD误定误定-D抗原阳性误定阴性，D抗原阴性误定阳性-特例特例(tl)(tl)弱弱D-D抗原遮断抗原遮断 第四十三页，共七十九页。安全(nqun)输血“三 关”血型(xuxng)鉴定抗体(kngt)筛查交叉配血交叉配血第四十四页，共七十九页。不规则抗体不规则抗体(kngt)(kngt)不规则抗体的产生(chnshng)外来抗原物质的刺激外来抗原物质的刺激妊娠、输血妊娠、输血、主动免疫不规则抗体检测的意义如果有不规则抗体，寻找不带对应抗原的红细胞配血、输血提前准备适合的血液采用多种配血方法第四十五页，共七十九页。不规则抗体不规则抗体(kngt)(kngt)的概念的概念不规则抗体是指不符合ABO血型系Landsteiner法则的血型抗体，包括ABO亚型抗体和非ABO血型系统的抗体。多数(dush)为免疫性抗体（IgG性质），在37具有较高的活性，在盐水中不能凝集红细胞，必须通过其他介质，如酶、低离子强度溶液、抗人球蛋白、聚凝胺等才能使致敏的红细胞出现凝集。规则抗体指ABO系统的抗-A、抗-B抗体，多数为天然抗体（IgM）性质，在224范围内有较高的活性，盐水介质中能凝集相应红细胞。第四十六页，共七十九页。不规则抗体不规则抗体(kngt)(kngt)的检测的检测采用已知抗原表型的O型试剂红细胞组，在不同(b tn)温度下、采用不同(b tn)介质筛查被检血清中有无有临床意义的ABO意外抗体。若筛查出抗体，要对抗体的特异性做鉴定。抗体筛查细胞格局表第四十七页，共七十九页。不规则抗体筛查表依据上表各试验条件，将被检血清与筛查细胞反应的凝集(nngj)强度记录于表格中的相应位置。第四十八页，共七十九页。不规则抗体(kngt)鉴定表第四十九页，共七十九页。抗体(kngt)鉴定细胞格局表第五十页，共七十九页。提前申请用血*临床输血技术规范受血者配血试验的血标本必须是输血前3天之内的提前血型鉴定提前抗体筛查一旦抗体筛查阳性，要和临床医生沟通 输入(shr)无对应抗原的红细胞，避免抗原抗体发生免疫反应第五十一页，共七十九页。交叉配血是确保安全有效输血的最后一关，也是“三关”中最重要的一关。只要交叉配血真正相合(xin h)（相容），将血液输给患者才是安全的。安全输血的底线：配不上血不输血第五十二页，共七十九页。安全输血的免疫学原则：1.首选同型输血2.配合型输血（配血相合的异型红细胞）抗原(kngyun)抗体不碰面少输多（亚型、弱D）无输有输血黄金三原则第五十三页，共七十九页。交叉配血不合的几种类型？产生了不规则抗体配血的方法？亚型患者的输血移植患者的特殊配血问题对有输血反应史或出现(chxin)输血无效的患者如何配血？第五十四页，共七十九页。一、主侧配血不相合一、主侧配血不相合(xin h)(xin h)的原因的原因1.患者血清的原因-产生了不规则抗体-自身抗体-冷凝集素：实验操作在37进行。-血清（浆）蛋白紊乱（A/G倒置、M蛋白等）：假凝集(nngj)，红细胞膜完整，加生理盐水稀释后散开 2.供者红细胞的原因（很少见）-直抗阳性：该红细胞不宜用于输血，换一袋第五十五页，共七十九页。主侧配血不相容的原因(yunyn)和对策第五十六页，共七十九页。二、次侧配血不相合二、次侧配血不相合(xin h)(xin h)的原的原因因1.供者血清的原因-针对患者红细胞的同种抗体；-自身抗体；-冷凝集素；-血清（浆）蛋白紊乱。解决办法：更换一袋血 2.患者红细胞的原因-全凝集或多凝集；-黏附(ninf)免疫球蛋白或抗体。第五十七页，共七十九页。第五十八页，共七十九页。-产生了不规则抗体的患者输血*选择不含与抗体特异性对应(duyng)的抗原的供者红细胞输血*多用几种配血方法第五十九页，共七十九页。聚凝胺试剂漏检抗体聚凝胺试剂漏检抗体(kngt)(kngt)举例举例骨髓瘤患者有多次输血史，因抗筛阳性送检（抗球蛋白卡法）。血型鉴定血型鉴定：B型,CcDEe直抗：直抗：1+抗筛结果：抗体鉴定是-Jka抗体，提供(tgng)Jka抗原阴性血液。第六十页，共七十九页。抗球蛋白试剂漏检抗体抗球蛋白试剂漏检抗体(kngt)(kngt)举例举例溶血性贫血患者有多次输血史，因抗筛（卡式）阴性，凝聚胺配血溶血性贫血患者有多次输血史，因抗筛（卡式）阴性，凝聚胺配血不合送检不合送检。血型鉴定血型鉴定：O型,CcDEE直抗：直抗：1+抗筛抗筛 阴性对照 阳性对照 盐水 0 0 0 0 0 poly 2+0 2+0 3+AHG 0 0 0 0 3+MGT 0 0 0 0 3+在聚凝胺介质中试验反应结果符合抗-e格局(gj)抗体鉴定证明是-e，提供e抗原阴性血液。第六十一页，共七十九页。-有自身抗体的患者(hunzh)的输血例如：AIHA患者，如果DAT+、IAT-，一般不干扰主侧配血；如果DAT+、IAT+，血清中存在游离的自身抗体，则主侧配血总是不合。*自身抗体存在，配血总是不相容，单纯自身抗体导致配血不相容不是输血禁忌。但是如果被自身抗体掩盖的同种抗体漏检，则可能发生严重的溶血性输血反应。AIHA患者配血的关键就是鉴定有无不规则抗体。第六十二页，共七十九页。如果不规则抗体筛查阴性，选择ABO、RhD同型，配血弱于自身对照(duzho)如果含不规则抗体，选择ABO、RhD同型，不规则抗体对应抗原阴性，配血弱于自身对照如果抗体鉴定不清楚，选择尽可能多的抗原相合，如ABO、RhDCcEe、MN、P同型第六十三页，共七十九页。AIHA患者的输血主侧配血凝集(nngj)2+，能不能输血？实验室如何报告？看见什么报告什么输血可能加重溶血反应，因为自身抗体会破坏输入的供者红细胞，但能不能输血要靠医生据临床症状和经验来决定是否有必要输洗涤红细胞？补体加重溶血是要有一定量的第六十四页，共七十九页。亚型患者(hunzh)的输血抗原比它更少第六十五页，共七十九页。ABO血型不同的骨髓(su)移植患者的输血在在不同的阶段选择红细胞、血小板ABH抗原的原则是不一样的第六十六页，共七十九页。haDonorPatient OABABOMM MMMMMMMajorAmmMMMMMMMajor and/or minorBmmMM MMmmMinorABmmmmmmMatchBiol Blood Marrow Transplant.2013 Aug;19(8):1152-8第六十七页，共七十九页。Biol Blood Marrow Transplant.2013 Aug;19(8):1152-8第六十八页，共七十九页。、有输血反应史或出现输血无效(wxio)的患者的输血如何发现输血无效？第六十九页，共七十九页。用血效果用血效果(xiogu)(xiogu)评价评价红细胞输注临床效果的重要指标 循环血液中Hb的升高(shn o)1U红细胞悬液(200ml全血制备)，粗略估计提高血约：Hb5/L第七十页，共七十九页。用血效果用血效果(xiogu)(xiogu)评价评价红细胞输注效果：患者(hunzh)的疾病、是否有输血反应、输血次数、既往输血量、妊娠次数有着密切关系。红细胞输注无效:输注红细胞后，患者Hb不升高；个别者甚至无变化或降低，要分析红细胞输注无效的环节和原因输血次数 3次，既往输血量 10U，妊娠次数 2次，输血效率明显下降（多数由免疫因素引起）第七十一页，共七十九页。用血效果用血效果(xiogu)(xiogu)评价评价涉及红细胞无效输血(sh xu)的环节 a.血站环节：红细胞的质和量 b.临床环节：用药破坏、发热、丢失、重新分布 、血液稀释 c.实验室环节：免疫学破坏（ABO亚型问题A2-A1）第七十二页，共七十九页。输血输血(sh xu)(sh xu)效果评价效果评价临床环节：用药(yn yo)破坏 药物性溶血性贫血（DHA）：是指某些药物使红细胞稳定性 破坏而发生溶血。DHA发生机制包括：1.药源性免疫性溶血性：2.非免疫性溶血 3.机制未明 第七十三页，共七十九页。药物性溶血性贫血药物性溶血性贫血(pnxu)(pnxu)1.药源性免疫性溶血：导致(dozh)红细胞破坏增加，红细胞寿命从120到几天 a.自身抗体型，如卡比多巴，改变红细胞膜上Rh抗原的蛋白结构 b.半抗原型，药物吸附型，青霉素为代表（-内酰胺环）c.免疫复合物型，如：奎尼丁 d.非免疫蛋白吸附型：以头孢类药物，可与红细胞膜牢固结合，使膜的抗原决定簇发生改变。第七十四页，共七十九页。药物性溶血性贫血药物性溶血性贫血(pnxu)(pnxu)2.药物氧化性溶血性贫血：药物作用于有遗传性红细胞酶缺陷和血红蛋白病患者所致（G-6-PD禁用氧化作用强的药物，如：磺胺类、）临床上，凡原因未明的获得性溶血性贫血，均应考虑药物性 溶血的可能。一旦发生药物引起的免疫性溶血，停药是关键(gunjin)的治疗措施第七十五页，共七十九页。免疫学破坏免疫学破坏(phui)(phui)血型鉴定正反定型采用(ciyng)多种配血方法聚凝胺法抗球蛋白法卡式抗球蛋白法酶化抗球蛋白法第七十六页，共七十九页。小结小结(xioji)(xioji)血型鉴定困难时的输血原则安全输血的原则产生了不规则抗体的配血方法亚型患者的输血移植(yzh)患者的输血AIHA患者的输血输血无效时的分析第七十七页，共七十九页。感谢大家感谢大家(dji)的耐心！的耐心！Tel：[phone]第七十八页，共七十九页。内容(nirng)总结血型与输血的几个问题探讨。-正定型弱于2+，反定弱于1+。-近期输过异型红细胞（包括宫内输血）或异型血浆。确定具体亚型参照ABO亚型的血清学特征。不同的方法用途不同，实验条件不同。试管方法为经典方法。常用凝胶为葡聚糖凝胶（Sephadex）。血浆要抗凝充分，血清要去纤维蛋白原。抗体鉴定证明是-e，提供e抗原阴性(ynxng)血液。19(8):1152-8。Tel：[phone]第七十九页，共七十九页。