学术讨论—T淋巴细胞结果的解读全国会吴铁军.ppt

淋巴细胞分化淋巴细胞分化(fnhu)图图第一页，共二十六页。u按按T T细胞所处细胞所处(su ch)(su ch)的活化阶的活化阶段段 初始初始T细胞（细胞（naive T cell）效应效应T细胞（细胞（effector T cell）记忆性记忆性T细胞（细胞（memory T cell）u按按T T细胞表面受体（细胞表面受体（TCRTCR）分类）分类 +T细胞细胞 +T细胞细胞u按按T T细胞细胞CD4CD4和和CD8CD8分子表型分子表型 CD4+T细胞细胞 CD8+T细胞细胞 u按按T T细胞的功能细胞的功能(gngnng)(gngnng)分类分类 Th（辅助（辅助T细胞）细胞）TS（抑制（抑制T细胞）细胞）Tr（调节（调节T细胞）细胞）T T淋巴细胞的分类淋巴细胞的分类(fn li)(fn li)方法方法第二页，共二十六页。外周血中各亚群占淋巴细胞总数外周血中各亚群占淋巴细胞总数(zngsh)的的比例比例60-80%27-51%15-44%T淋巴细胞CD4T淋巴细胞CD8T淋巴细胞第三页，共二十六页。淋巴细胞监测注重数量淋巴细胞监测注重数量(shling)、比例、功能相结合、比例、功能相结合血液血液(xuy)分析常规检测分析常规检测依据白细胞、淋巴细胞比例及依据白细胞、淋巴细胞比例及计数绑定机体免疫状况，无法计数绑定机体免疫状况，无法(wf)精确判断。精确判断。T T淋巴细胞亚群比淋巴细胞亚群比例检测例检测临床常用，但较片面临床常用，但较片面T T淋巴细胞亚群数量淋巴细胞亚群数量观察免疫细胞数值变化，评估免疫观察免疫细胞数值变化，评估免疫状况，通常采用流式细胞仪法，特状况，通常采用流式细胞仪法，特别针对别针对CD4CD4的检测，已成为的检测，已成为“金标金标准准”。功能、数量、比例功能、数量、比例结合结合更精确评估机体免更精确评估机体免疫状态疫状态1234第四页，共二十六页。目前临床目前临床(ln chun)主要可以做以下项目的检主要可以做以下项目的检测测n淋巴细胞亚群(T+B+NK)的比例(bl)和计数nT细胞亚群(CD4+细胞、CD8+细胞、CD4+/CD8+比值）nMHLA-DR（单核细胞HLA-DR)nCD4CD25Treg（调节细胞）及Th17细胞（我们工作）目前国内绝大多数医院(yyun)没有开展淋巴细胞计数项目第五页，共二十六页。项项 目目百分含量百分含量（%淋巴淋巴细细胞）胞）Total B lymphocyte(CD19+)5-18%NK cell(CD3-/CD16+56+)7-40%Total T lymphocyte(CD3+)50-84%T helper/inducer cell(CD3+/CD4+)27-51%T supressor/cytotoxic cell(CD3+/CD8+)15-44%CD4/CD80.71-2.78(BD)(BD)健康中国健康中国(zhn u)(zhn u)人参考范围人参考范围项项 目目百分含量百分含量（%T淋巴淋巴细细胞）胞）绝对绝对含量含量（cells/L）Total T lymphocyte(CD3+)770-2041Thelper/inducer cell(CD3+/CD4+/CD8-)34-70%414-1123Tsupressor/cytotoxic cell(CD3+/CD4-/CD8+25-54%238-874CD3+CD4+CD8+cell0.5-4.0%6-56第六页，共二十六页。CD4+CD4+、CD8+TCD8+T淋巴细胞的计数淋巴细胞的计数(j sh)(j sh)方法一（方法一（FCM)FCM)n取取100l100l全血，加三种不同荧光素标记的全血，加三种不同荧光素标记的鼠抗人鼠抗人CD3CD3、CD4CD4、CD8McAbCD8McAb，阴性对照。，阴性对照。n加红细胞裂解加红细胞裂解(li ji)(li ji)液，溶血，离心，弃液，溶血，离心，弃上清。上清。n用用PBSPBS洗洗1 1次，次，PBSPBS重悬细胞，上机检测。重悬细胞，上机检测。nFCMFCM分析分析 电子计算机自动计算出阳性细电子计算机自动计算出阳性细胞百分率及总细胞计数。胞百分率及总细胞计数。简单、快速、相对简单、快速、相对(xingdu)精确精确第七页，共二十六页。nCD3+T细胞正常(zhngchng)范围为：50-84%nCD4+T细胞正常范围为：27-51%nCD8+T细胞正常范围为：15-44%nCD19+B细胞正常范围为：5-18%n与血细胞计数仪联用，得出各淋巴细胞百分比后乘以淋巴细胞数量，得出各淋巴细胞的绝对浓度。CD4TCD4T淋巴细胞的计数方法淋巴细胞的计数方法(fngf)(fngf)二（推算）二（推算）不精确不精确(jngqu)、繁琐繁琐省钱省钱举例如下举例如下第八页，共二十六页。患者患者(hunzh)(hunzh)血常规中淋巴细胞计数为血常规中淋巴细胞计数为0.63 109 0.63 109/L,/L,淋巴细胞比例测定结果淋巴细胞比例测定结果CD3 CD3 为为64.9%,CD464.9%,CD4为为32.5%,CD832.5%,CD8为为31.1%31.1%CD3CD3细胞细胞(xbo)(xbo)计数为计数为0.63100.63109 9/L64.9%0.41 10/L64.9%0.41 109 9/L/LCD4CD4细胞计数为细胞计数为0.63109/L32.5%0.20 100.63109/L32.5%0.20 109 9/L/LCD8CD8细胞计数为细胞计数为0.63109/L31.1%0.19 100.63109/L31.1%0.19 109 9/L/L推推算算第九页，共二十六页。第十页，共二十六页。单核细胞人类单核细胞人类(rnli)(rnli)白细胞抗原白细胞抗原DRDR（CD14/HLA-DRCD14/HLA-DR）nCD14CD14为为LPSLPS复合物受体复合物受体,主要分布在单核细胞，主要分布在单核细胞，HLA-DRHLA-DR为活化标志。为活化标志。nCD14/HLA-DRCD14/HLA-DR可反映人体细胞免疫功能，可反映人体细胞免疫功能，30%30%提示免疫麻痹。提示免疫麻痹。也有人认为也有人认为HLA-DRHLA-DR浓度如果连续两天浓度如果连续两天低于低于8000AB/C8000AB/C可认为存在可认为存在(cnzi)(cnzi)免疫麻痹免疫麻痹。n广泛应用于临床。广泛应用于临床。第十一页，共二十六页。T T淋巴细胞亚群研究淋巴细胞亚群研究(ynji)(ynji)研究研究(ynji)逐年增多逐年增多第十二页，共二十六页。淋巴细胞亚群变化淋巴细胞亚群变化(binhu)(binhu)的常见临床意义的常见临床意义nCD4CD4淋巴细胞减少：淋巴细胞减少：见于恶性肿瘤、遗传性免疫缺陷病、艾滋病、应用免疫抑制见于恶性肿瘤、遗传性免疫缺陷病、艾滋病、应用免疫抑制剂的患者剂的患者nCD8CD8淋巴细胞增多：淋巴细胞增多：见于自身免疫性疾病，如系统性红斑狼疮（见于自身免疫性疾病，如系统性红斑狼疮（SLESLE）、艾滋病）、艾滋病初期、慢性活动性肝炎、肿瘤及病毒感染等初期、慢性活动性肝炎、肿瘤及病毒感染等nCD4CD4CD8CD8比值异常：比值异常：比值降低：比值降低：一般被称为一般被称为“免疫抑制免疫抑制”状态，常见于免疫缺陷病、恶性肿瘤、再生障碍性贫血、状态，常见于免疫缺陷病、恶性肿瘤、再生障碍性贫血、白血病、某些病毒感染等白血病、某些病毒感染等 比值增高：比值增高：表明细胞免疫功能处于表明细胞免疫功能处于“过度活跃过度活跃”状态，容易出现自体免疫反应。状态，容易出现自体免疫反应。此外此外(cwi)(cwi)还可用于监测器官移植的排斥反应，若移植后还可用于监测器官移植的排斥反应，若移植后CD4/CD8CD4/CD8较移植前明显较移植前明显增加，则可能发生排异反应增加，则可能发生排异反应第十三页，共二十六页。14The shift from a pro-in-flammatory to an anti-inflammatory immune response predominant at the systemic level likely occurs before 24 h after diagnosis of shock.脓毒症休克期存在脓毒症休克期存在(cnzi)免疫麻痹免疫麻痹第十四页，共二十六页。存在存在(cnzi)(cnzi)免疫麻痹的免疫麻痹的SepticSeptic患者死亡率大大增加患者死亡率大大增加100100名名septicseptic患者患者(hunzh)(hunzh)28天死亡天死亡(swng)无免疫麻痹无免疫麻痹免疫麻痹免疫麻痹第十五页，共二十六页。脓毒症休克患者脓毒症休克患者T T淋巴细胞凋亡淋巴细胞凋亡(dio wn)(dio wn)、存在免疫紊乱、存在免疫紊乱第十六页，共二十六页。存活存活(cn hu)(cn hu)与死亡与死亡SepticSeptic中中T T淋巴细胞亚群的变淋巴细胞亚群的变化化一项对院内感染一项对院内感染(gnrn)(gnrn)的老年脓毒症患者的前瞻性对照研究的老年脓毒症患者的前瞻性对照研究第十七页，共二十六页。Injury,Int.J.Care Injured(2007)38,13461357严重多发伤患者严重多发伤患者(hunzh)免疫细胞的变化特点免疫细胞的变化特点CD4/CD8降低降低(jingd)MHLA-DR降低降低(jingd)T细胞及单核细胞细胞及单核细胞凋亡增加凋亡增加第十八页，共二十六页。烧伤烧伤(shoshng)患者早期外周血淋巴细胞亚群的变化患者早期外周血淋巴细胞亚群的变化特点特点n烧伤患者白细胞低于正常组烧伤患者白细胞低于正常组n早期早期(zoq)(zoq)CD3CD3、CD4CD4、CD8CD8细胞细胞计数计数 均明显下降。均明显下降。nHLA-DRHLA-DR表达降低。表达降低。nCD4/CD8CD4/CD8比值下降。比值下降。第十九页，共二十六页。CD4T细胞细胞(xbo)亚群新分类：亚群新分类：Th1、Th2、Treg、Th17我们我们(w men)的研的研究究第二十页，共二十六页。抗炎细胞抗炎细胞TregTreg及其分泌的抗炎介质及其分泌的抗炎介质(jizh)(jizh)IL-10IL-10；促炎细胞；促炎细胞Th17Th17及分泌的促炎介质及分泌的促炎介质IL-17IL-17、IL-6IL-6在人体的炎性免疫稳态中发挥重在人体的炎性免疫稳态中发挥重要作用。要作用。第二十一页，共二十六页。22中国呼吸与危重中国呼吸与危重(wi zhng)监护杂志监护杂志,2010,09(04):416-418.结论一：脓毒症患者中结论一：脓毒症患者中TregTreg明显升高明显升高(shn o)(shn o)，表明抗炎反应的增强表明抗炎反应的增强第二十二页，共二十六页。23 结论结论(jiln)二：二：在脓毒症患者中在脓毒症患者中Th17表达明显升高表达明显升高吴铁军吴铁军(ti jn),亢翠翠亢翠翠,中华急诊医学杂志中华急诊医学杂志,2012,21(04):378-380.脓脓毒毒症症组组对对照照组组脓毒症患者中脓毒症患者中Th17Th17表达表达(biod)(biod)明显升高，明显升高，提示促炎反应的增强。提示促炎反应的增强。第二十三页，共二十六页。24重症脓毒症患者重症脓毒症患者(hunzh)淋巴细胞增殖能力低下、凋亡淋巴细胞增殖能力低下、凋亡淋巴细胞淋巴细胞Ag-NoR在健康在健康(jinkng)组中的表组中的表达达 淋巴细胞淋巴细胞Ag-NoR在在Sepsis组中的表达组中的表达(biod)吴铁军，张丽娜吴铁军，张丽娜 中国呼吸与危重监护杂志中国呼吸与危重监护杂志,2010,09(04):416-418.脓毒症组脓毒症组对照组对照组第二十四页，共二十六页。重症脓毒症患者重症脓毒症患者(hunzh)存在免疫麻痹存在免疫麻痹中国中国(zhn u)急救医学杂志急救医学杂志,2011,31(9):836-838.CD14+单核细胞人类单核细胞人类(rnli)白细胞抗原白细胞抗原-DR(HLA-DR)表达情况表达情况对对照照组组脓脓毒毒症症组组第二十五页，共二十六页。内容(nirng)总结淋巴细胞分化图。淋巴细胞亚群(T+B+NK)的比例和计数。淋巴细胞比例测定结果CD3 为64.9%,CD4为32.5%,CD8为31.1%。单核细胞人类白细胞抗原DR（CD14/HLA-DR）。CD14为LPS复合物受体,主要分布在单核细胞，HLA-DR为活化标志。CD14/HLA-DR可反映人体细胞免疫功能，30%提示免疫麻痹。比值增高：表明细胞免疫功能处于“过度活跃(huyu)”状态，容易出现自体免疫反应。脓毒症组第二十六页，共二十六页。