考马斯亮蓝法显示细胞中的微丝.ppt

考马斯亮蓝法显示(xinsh)(xinsh)细胞中的微丝第一页，共十二页。v目的要求v基本原理v实验(shyn)用品v方法与步骤v实验结果v实验报告第二页，共十二页。目的(md)(md)要求 v掌握考马斯亮蓝的染色(rns)方法；v了解细胞内微丝的分布。第三页，共十二页。实验(shyn)(shyn)原理v细胞质中错综复杂的纤维网络结构称为细胞骨架，主要包括微管、微丝和中间纤维。考马斯亮蓝R250是一种普通的蛋白染料，它可以使多种蛋白质着色，由于有些细胞骨架纤维在该实验(shyn)条件下不够稳定，有些类型的纤维太细，在光学显微镜下无法分辨，因此我们看到的主要是微丝组成的张力纤维。张力纤维在体外培养细胞中普遍存在，与细胞的附着、维持扁平铺展的形态有关。第四页，共十二页。实验(shyn)(shyn)用品1器材：烘箱、青霉素小瓶、培养细胞飞片、水浴锅、载玻片、盖玻片。2 试 剂:0.01mol/LPBS；M-缓 冲 液；1%TritonX-100/M缓冲液；0.2%考马斯亮蓝染液；3%戊二醛-PBS溶液；3实验材料(cilio)：洋葱内表皮，培养细胞飞片第五页，共十二页。方法(fngf)(fngf)与步骤v利用培养细胞为材料(cilio)进行骨架显示时,先从培养箱中取出培养细胞飞片,弃去培养液,加入PBS漂洗,加入1%TritonX-100/M-缓冲液处理15分钟;第六页，共十二页。M缓冲液轻轻洗3次,然后加入境%戊二醛-PBS液固定(gdng)(gdng)15分钟，PBS冲洗数次，0.2%考马斯亮蓝R250染色30分钟，水洗，镜检。第七页，共十二页。以洋葱为材料进行细胞骨架显示时，先撕取一片洋葱内表皮，置于小平皿中进行操作，其余(qy)(qy)步骤相同。第八页，共十二页。实验(shyn)(shyn)结果洋葱(yngcng)内表皮中的微丝第九页，共十二页。培养(piyng)(piyng)细胞中的微丝第十页，共十二页。实验报告v实验的目的、原理、步骤和结果分析；v绘图(hu t)表示微丝在细胞中的分布情况；v在实验中TritonX-100抽提起到了什么样的作用？第十一页，共十二页。内容(nirng)总结考马斯亮蓝法显示细胞中的微丝。细胞质中错综复杂的纤维网络结构称为细胞骨架，主要包括微管(wi un)、微丝和中间纤维。张力纤维在体外培养细胞中普遍存在，与细胞的附着、维持扁平铺展的形态有关。1器材：烘箱、青霉素小瓶、培养细胞飞片、水浴锅、载玻片、盖玻片。利用培养细胞为材料进行骨架显示时,先从培养箱中取出培养细胞飞片,弃去培养液,加入PBS漂洗,加入1%TritonX-100/M-缓冲液处理15分钟第十二页，共十二页。