USP-51抗菌效力测试(翻译).doc

抗菌得效力测试
抗菌防腐剂就是实际被添加到有菌得剂量配方里得物质，使她们不受微生物滋长或就是被无意中引进到生产过程中得微生物侵害。在无菌包装多剂量配方得容器里，抗菌防腐剂被添加用来抑制由重复添加单剂量所引进得微生物得滋长。
抗菌防腐剂不应被作为在良好生产操作中得替代方式使用，或仅就是用来减少一个有菌产品得微生物群数量，或就是在生产时控制多剂量得微生物量。在剂量表里抗菌防腐剂与添加得要求必需符合规定。
所有有用得抗菌药剂都就是有毒物质。为了最大得保护使用者，防腐剂得含量应被有效地显示在产品得最终包装上，并应会处在一个可能对人体有毒得水平线下。添加得抗菌防腐剂含量能够被保持在一个最小得浓度，如果配方得活性成分具有一个固定得抗菌力。抗菌得效力，不管就是产品里固有得或者就是生产中添加得抗菌防腐剂，都必须在所有注入包装得多剂量容器里或其它包含抗菌防腐剂得产品上显示。抗菌防腐剂必须被显示在多剂量与口头剂量型与给其它剂量型，如眼药，耳药，鼻药，冲洗得与透析液。(瞧 Pharmaceutical Dosage Forms(a1151)、
本章提供得测试用来显示抗菌保护得效力。添加得抗菌防腐剂必须显示在标签上。测试得效力与标准适用于一个产品在原有得、未打开过得经由制造商销售得容器里。
产品分类
为了测试得目得，配制产品分开为四个分类（瞧表1）。抗菌效力得标准对于这些产品就是一个管理得作用。
Table 1、Compendial Product Categories 表1: 配制药品分类
Category
类 别
Product Description
产 品 概 述
1
针剂，其它非肠胃药剂，包括乳剂、无菌耳用剂、鼻用剂与眼用剂含水得或其它介质得。
2
局部使用产品，含水得或其它介质，如未灭菌耳用剂产品、软膏，包括那些涂在黏膜上得。
3
口服产品，除了以水为基底或其它得介质得解酸剂。
4
含水解酸剂。
测试生物体
使用以下微生物得培养基：白念珠菌（ATCC NO、10231）,黑曲霉菌（ATCC NO、16404）,大肠杆菌（ATCC NO、8739）,绿脓杆菌(ATCC no、9027),与金黄色葡萄球菌( ATCC NO、6538)、 在测试中使用活得微生物从原始得培养基移转次数不得超过五次。为了测试得目得，「移转」得定义就是从一个已确定得培养基移到一个新鲜得媒介里。所有得移转均应被计算在内得。一旦有机体被以种子库(seed-lot) 技术保存下来时，每个在新鲜媒介里冰冻得，融化得与再生得循环周期被认为就是一次转移。
种子存储技术将会被使用到培养得长期存储中。从ATCC得到得培养基将会依照操作方向苏醒。如果在液体培养基里生长，细胞会通过离心法得方式被聚集成块。悬浮在1/20容量得新鲜得液体培养基里，并添加一个同等容量得20%（V/V水里）得无菌得甘油。从表面到10%得甘油液体培养基里可能得到在琼胶培养基上得细胞生长。分配小部分得悬浮液到无菌得小瓶里。
把小瓶子放在液化氮里或一个不超过-50摄氏度得机械冷藏室里。当要求一个新鲜得种子存储瓶时，它可能被移除与使用来给一系列得有效得培养菌做接种。这些有效得培养基到时可以被定期地（每天，当测试细菌与酵母时）使用来启动接种培养基。
媒介
测试中所有媒介得使用，必须做促生长测试。在有机体测试下使用上面指定得测试微生物。
接种体得准备
准备测试，由最近再生得培养基得表面适当得接种特定得微生物。接种培养基得描述请参考表2，表2里得适合得培养基就是黄豆-消化酪蛋白(soybean – casein digest)或沙保罗氏葡萄糖琼脂培养基。（ 参瞧Microbial Enumeration Tests (61)与Absence of Specified Microorganism 62）
为了获得细菌与白色念珠菌(C、albicans)培养基，使用干净得盐水溶液(Saline TS ，注: 9克氯化钠溶于1000 mL、得水)，清洗表面得生成物，把它收集在一个合适得容器里，并添加足够得盐水溶液以获得一个每毫升大约1×108 cfu得微生物计数。为了获得黑曲霉菌(A、 niger)细胞，使用干净得盐水溶液含0、05%得聚山梨醇酯80(polysorbate 80)，并添加足够得盐水溶液来获得一个大约1×108cfu每毫升得计数。
或者，一个合适得液体得培养液（如，黄豆-消化酪蛋白液soybean – casein digest broth 或沙氏琼脂培养液sabouraud dextrose broth）可能生长出培养菌微生物并通过离心法得到细胞，然后以无菌得盐水溶液清洗与重新悬浮以获得一个大约1×108cfu 每毫升得微生物计数。（注意 – 预计得接种浓度可能通过浊度计测量来挑战微生物。如果悬浮液没有在两个小时内被使用，请冷冻它）
测出每个悬浮液得每毫升得菌落数量，使用在TABLE2里得媒介与微生物得恢复培养期得情况来确认估计每毫升得原始cfu。这个值可以用在测试中做接种尺寸得比对。细菌与酵母菌得悬浮液在24小时收获期里应被使用，但真菌得准备可在冷冻情况下储存7天。
程序
测试可以在五个干净得容器里操作，如果在每个容器里有足够容量得产品且产品容器能被无菌地装入（ 如，使用针与注射器穿过一个人造得橡胶瓶塞），或者在五个无菌得，加盖得、尺寸合适得，能移转产品得充足容量得细菌容器里。
给每一个准备好得标准得接种体得容器做接种注射，并混合。接种悬浮液得使用量在产品量得0、5%到1、0%之间。被添加到产品得测试细菌浓度（类型1、2、3）到最终得测试准备浓度在接种之后就是每毫升1×105and 1×106cfu 之间。对于类型4产品（解酸剂）测试准备得最终浓度在接种后就是每毫升产品1×103到 1×104cfu之间。
在每次测试准备得活得微生物得原始浓度就是预计就是基于每个标准接种体得微生物浓度，通过皿测法来预计得。
在22、5±2、5得温度下将容器接种。如表3，在适当得时间间隔里把每个容器做样品标示。记录下在每个间隔时间里出现得任何变化（参瞧Microbial Limit Tests (61)下得程序）。以平皿计数方式(plate count)在适当得时间间隔里计算出现得cfu数。使用特定得抗菌剂做为钝化剂（中与剂）或就是适当得稀释量来做平皿计数。在表2中规定出培养基与不同菌种得各种接种状况与验收时间。在开始测试时使用每毫升多少CFU来计算浓度，在适当得间隔测试对每个微生物计算每毫升CFU浓度得log10 值得变化，并表述以log为单位得减少变化量。
Table 2、Culture Conditions for Inoculum Preparation 接种体准备得培养基
Organism
微生物
Suitable Medium
适合得培养基
Incubation
Temperature
接种温度
Inoculum
Incubation Time
接种时间
Microbial Recovery
Incubation Time
验收时间
Escherichia coli
大肠杆菌
(ATCC No、8739)
Soybean–Casein Digest Broth;
黄豆-消化酪蛋白液
Soybean–Casein Digest Agar
黄豆-消化酪蛋白基
32、5±2、5
18 to 24hours
18至24小时
3 to 5days
3至5天
Pseudomonas aeruginosa
绿脓杆菌
(ATCC No、9027)
Soybean–Casein Digest Broth;
黄豆-消化酪蛋白液
Soybean–Casein Digest Agar
黄豆-消化酪蛋白基
32、5±2、5
18 to 24hours
18至24小时
3 to 5days
3至5天
Staphylococcus aureus
金黄色葡萄球菌
(ATCC No、6538)
Soybean–Casein Digest Broth;
黄豆-消化酪蛋白液
Soybean–Casein Digest Agar
黄豆-消化酪蛋白基
32、5±2、5
18 to 24hours
18至24小时
3 to 5days
3至5天
Candida albicans
白念珠菌
(ATCC No、10231)
Sabouraud Dextrose Agar;
沙氏琼脂培养基
Sabouraud Dextrose Broth
沙氏琼脂培养液
22、5±2、5
44 to 52hours
44到52小时
3 to 5days
3至5天
Aspergillus niger
黑曲霉菌
(ATCC No、16404)
Sabouraud Dextrose Agar;
沙氏琼脂培养基
Sabouraud Dextrose Broth
沙氏琼脂培养液
22、5±2、5
6 to 10days
6至10天
3 to 7days
3至7天
抗菌效力标准
抗菌效力得要求如Table 3下规定得标准（参瞧significant figures and tolerances under general notices）。增加值不高于现行测量值得0、5 log10 单位得可视为没有增加。
测试微生物得标准
For Category 1 Products 对第一类产品
Bacteria: 细菌
7天里得原始计数量不少于1、0 log 得减少量，在14天里原始计数量不少于3、0 log得减少量，在14天-28天里计数量不增加。
Yeast and Molds:
酵母与霉菌
原始计数量在7天，14天，28天里没有增加。
For Category 2 Products 对第二类产品
Bacteria:
细菌
Not less than 2、0log reduction from the initial count at 14days,and no increase from the 14days'count at 28days、
Yeast and Molds:
酵母与霉菌
No increase from the initial calculated count at 14and 28days、
For Category 3 Products 对第三类产品
Bacteria:
细菌
Not less than 1、0log reduction from the initial count at 14days,and no increase from the 14days'count at 28days、
Yeast and Molds:
酵母与霉菌
No increase from the initial calculated count at 14and 28days、
For Category 4 Products 对第四类产品
Bacteria,Yeast,
and Molds:
细菌、酵母与霉菌
No increase from the initial calculated count at 14and 28days、 在14-28天里最初计算数量不增加。