气相色谱仪培训教材.doc

PerkinElmer Clarus 500
气相色谱仪培训教材

美国珀金埃尔默仪器（上海）有限责任公司

第一部分 编辑仪器控制方法

运行TotalChrom色谱工作站软件

双击桌面上图标或打开Totalchrom Workstation 6.2.X程序组, 双击图标

输入用户名: manager(小写), 密码,软件运行后界面如下

单击Method图标, 开始编辑方法:
Create new method: 新建方法 Load method stored on disk: 调用已有方法
Load recently edited method: 调用最近使用过的方法
选择一种方式,点OK进入下一步:

选择相应的仪器, 点OK进入下一步:

Data Acquisition: 数据采集参数选择:
1. Data Channel: 数据通道选择, 用单一检测器时选A或B,两个检测器同时使用时选Dual, 用单一检测器时如果用前进样口最好选A通道, 后进样口选B通道.
2. Source: 检测器选择: 选择相应的检测器. 前检测器为DetA,后检测器为DetB.
3. Set Data Rate: 数据采样频率的选择(此处可用默认值)
By peak width at base: 根据峰宽来决定采样频率(需要输入大致的峰宽时间,单位为秒)
By sampling rate: 直接选择采样频率
4. Data Storage: 数据存储( 可用默认值)
Store all data from run: 存储所有数据
如果只存储部分数据(如方法运行的前几分钟数据不存储), 就不选这个选项, 在Delay time 处输入不需要采集数据的时间.
Store run log: 存储运行记录

Real time plot / 实时谱图选项: 这一选项可以不修改

然后点Next 进入下一步:

Instrument Control仪器控制参数:
1. Oven/Inlets: 柱温箱程序温度/进样口程序温度控制
Oven Ramp: 柱温箱程序温度 Rate: 程序升温速率 Temp: 温度
Hold: 温度保持时间 Initial: 温度/时间初始值
如果不使用程序升温,只需将Rate1 设为0, 设置相应的Initial Temp 和 Initial Hold即可
2. heated zone setpoints: 加热区温度设置(即进样口温度设置)
将要使用的进样口温度设置为需要的温度,不使用的进样口温度最好设置为零. 如果进样口为PSS程序控制进样口, 此处只能选择温度程序的开/关(on/off), 在Inlet ramp处设置温度程序,设置方法和柱温箱程序升温一样.
3. Oven Max temp: 柱温箱保护温度, 由使用的色谱柱最高温度决定, 设定值应该低于色谱柱允许使用温度10-20度.
Equil time: 柱温箱温度平衡时间, 0.5-3分钟即可

设置完成,点Carrier进入载气设置.(不要点Next,还没有完成方法的设置)

Carrier A Control: 前进样口载气流速控制, CAP或PSS进样口可选择3种载气控制模式,分别为: Programmed Flow 程序流速控制
Programmed Pressure 程序压力控制
Programmed Velocity 程序线速度控制
PKD进样口只能选择控制流量或压力

使用PSS/CAP进样口,还需要输入毛细柱的规格
Length: 柱长(m) Diameter: 直径(um) Vacuum .p: 柱子出口是否接真空系统
Split Control: 分流控制
Mode: 分流控制模式 flow控制分流流量 Ratio控制分流比

如果仪器有两个进样口,要分别设定两个进样口的载气, 如果进样口上没接色谱柱,一定要将载气流量设为零, 而接了色谱柱的进样口,一定要设置相应的流量,否则可能损坏色谱柱.

如果仪器不带PPC控制系统, 可以不用设定 Carrier的参数.

载气设定完成后,点Detectors进入检测器参数设置(不要点Next,还没有完成方法的设置)

Detector A: 前检测器 Detector B:后检测器
FID 氢火焰检测器 H2: 45ml/min Air: 450ml/min
TCD 热导检测器 10-20ml/min
ECD 电子捕获检测器 30-80ml/min
FPD 火焰光度检测器(硫磷检测器) S模式: H2 80ml/min, Air 95ml/min
P模式: H2 90ml/min, Air 100ml/min
NPD 氮磷检测器 H2: 2ml/min, Air: 100ml/min
Temp : 温度
Range: 灵敏度
对FID, 1为高灵敏度,20为低灵敏度,
对TCD, 有1-4个选择,对应为40,80,120,160mA的桥电流
其余检测器都只有选1
Autozero: 自动调零开关
Polarity: 极性 Positive正, Negative负 次选项只对TCD检测器有效, 用H2/He做载气时选Positive,N2做载气选Negative, Ar/CH4做载气时根据信号来具体选择.
Filament: 电流开关, 选择on/开 就可以, 关机程序选off/关
Gas: 检测器的辅助气, 设置合适的流量即可
Int Attenuation信号衰减: 0=1/64,-1=1/32, …-5=1/2, -6=1, 即选0,信号衰减64倍,选-1衰减32倍,选-6,信号不衰减
Offset: 调零零点设置

设定完后点 Instrument Timed Events,设置仪器时间程序(不要点Next,还没有完成方法的设置)

仪器运行时间控制表,可以设定相关的控制参数. 如进样阀的控制,信号衰减的改变等.
到这里,仪器控制参数就设定完毕,以下为数据处理参数设定.

点Next进入下一步:

注意：
如果选择编辑已经有的方法，在Method Editor界面下，选Instrument菜单，选下面的control option选项，再选择需要修改的地方，如oven/inletes, Autossampler等，都可进入仪器控制方法设置。

Autosample 自动进样器的控制：

大多数情况下，只需要设置进样体积即可。还有就是选择洗针的次数，洗针的溶剂选择

点replot选择条, 去掉Generate a separate replot 选择项,避免打印出单独的色谱图

在Globe information中,选择定量方法:
External standard: 外标法
Internal standard: 内标法
输入浓度，体积单位

然后一直点Next, 直到点Finish,完成方法编辑.

保存方法. 然后在 Method Editor下other菜单选 Report Format Editor(报告格式编辑):
注意: 所有文件名不得使用中文,要使用Windows系统合法的文件名

可点击报告头名称,改为合适的名称. 点击报告内容项目,去掉不需要的项目

在Report菜单下,选择需要添加的报告内容

点Insert/Add,添加该项目
点Options, 做报告内容,格式的选择,

通常按上面选项选择即可.

选择完后,保存报告格式文件,文件名和方法文件名一样. 关闭报告格式编辑器, 关闭方法文件编辑器,回到工作站初始画面.

单击Setup图标, 设置运行方法:

Setup Type: 选Method方式
Method: 选择要使用的方法
Raw file path: 数据文件路径,可任意选择
Result file path: 结果文件路径,可任意选择
Base file name: 数据/结果文件前缀, 输入后点后面按钮,再点弹出窗口里面的OK键,加上计数器: 上面输入的前缀为20040101RGA就变为20040101RGA_###, 最后生成的数据/结果文件名就变成 20040101RGA_001,20040101RGA_002,…,20040101RGA_999.
如果此处未加上”_###”自动计数器,那生成的数据/结果文件名就会自动在前缀后加上做样时的日期和时间. 如果有相同的文件名,系统也会自动在数据/结果文件名后加上做样时的日期,时间做后缀, 不会覆盖已有的数据/结果文件.
如果不希望在每次做样完成后打印报告文件, 选上 Suppress replots/plots选项
完成以上选项后,点 Vial list选项,编辑样品信息(Sequence Editor-Vial list):

在Name栏,输入样品名称,在site栏,选择要使用的进样口(A前或B后)
在Vial栏,输入样品在自动进样器上的位置号(1-80)
如果使用内标法定量,在Int. Std. Amt栏,输入内标的浓度
如果要添加样品, 在Edit菜单下按append添加
要删除样品,在ROW栏点击要删除的行,按DEL键删除.

编辑完成,存储样品列表, 退出Sequence Editor-Vial list.
点Setup Instrument界面下的OK, 完成方法和样品表的设置.

待主界面的 Status状态栏内容显示仪器准备就绪, 仪器基线正常后就可以进样了.

在进样前还需确认:
FID是否点火
TCD基线是否调到10-20mV
NPD是否将电压调上来,使基线达到0.75-1.5mV
FPD是否点火,是否更换了需要的磷或硫滤光片

第二部分 数据处理

在软件主界面下,单击 Graphic Edit，进入数据处理：

选择要处理的标样的数据文件，按open打开文件

注意：此时自动会打开一个方法文件，这个方法文件就是做标样时使用的方法文件。如果提示只能用只读方式打开文件，选择确定。在这种情况下在后面保存方法文件时就得选择另外命名保存。

在process菜单下选Noise/Area Threshold，用鼠标左键在色谱图上选一段噪声比较大的地方，系统自动会设定一个噪声和峰面积的阈值，可跟据具体情况来设定这两个参数，直到积分结果满意为止。

Current NT：当前噪声阈值
Current AT：当前峰面积阈值
Suggested NT：根据你的选择范围，系统推荐的噪声阈值，可在此处自己设定合适的值
Suggested AT: 根据你的选择范围，系统推荐的峰面积阈值，可在此处自己设定合适的值

然后在process菜单下选sampling rate/bunching factor…重新设定采样频率和平滑因子
用鼠标左键选择要处理的峰的范围，系统自动给出相应的参数。

这一参数注意用来处理峰形不好的峰，尤其是拖尾比较严重的峰，可以得到比较好的积分结果

积分处理完毕，在file菜单下选择Save Result file As…，保存新的结果文件。

点击New data file图标，打开另外的标样数据文件，然后保存结果文件。重复这一过程直到将所以标样数据文件全部重新积分，保存新的结果文件。

注意： 保存结果文件时一定要选择覆盖存储到各自相同的文件名

然后在Calibration菜单下选择Edit .ponents…，给要定量计算的化合物命名
在命名时，如果要用内标法定量，应该先用鼠标点击内标物的峰，输入内标物的名称，选上ISTD选项，输入合适的时间窗参数（3－10均可）。然后按Next输下一个化合物的名称等参数。内标法要选择开始设定的内标物！

所有要定量的组分都输入完毕后，按return返回。然后保存或另存方法。然后点other菜单下method，进入Method Editor方法编辑器。
在Method Editor中.ponents菜单下选Edit .ponent，进入如下画面：

查看每个组分的设置是否正确，如内标物的指定，时间窗口等参数。

确认完后点Calibration项目条，设定标样曲线类型，标样浓度等参数

关于积分时间表的使用：

由Graphic Edit中，在Process菜单下的Baseline Events进入：
常用的时间事件：
AT: Set Area Threshold 设定峰面积阈值 NT： Set Noise Threshold设定噪音阈值
BF: Set Bunching Factor设定平滑因子 ＋P：Enable Peak Detection 开始积分
－P：disable Peak Detection关闭积分 +V：Valleys Baselines on 峰谷积分开始
－V：Valleys Baselines off峰谷积分关闭
在参数表选定功能项以后，再输入相应参数值，然后用鼠标点击要开始的地方定义时间。

Calibration Type标准类型：
Use calibration factor：使用已知校正因子
Avg calibration factor：单点多次平均校正
Calibrate by reference: 参比校正
Use curve： 多点校正
通常主要使用2和4这两种校正方法
Response：Area：峰面积定量 Height：峰高定量
Curve fit type： 在使用Use curve时才需选择，单点选 Point to Point, 多点选 1 st Order（线性标准曲线）
Scaling，purity和Weighting可以不选，使用默认值即可
Origin Treatment：Include：零点参与标准曲线回归
Force： 标准曲线通过零点
然后在表格处输入标样点序号和对应的浓度。输完一个组分，按Next，重复以上步骤，完成所有组分校正参数和浓度输入。

然后点OK， 回到Method Editor主页面。在.ponents菜单下选Calibrate，进入如下画面：

点右上角黄色的文件夹图标，打开第一个标样的结果文件，在Level栏选择1，按Add键，即选定了第一个数据点。
按以上方法选定第二，第三…，直到所以标样数据被选定。
如果为单点多次平均校正，level都为1， 从第二个数据点开始，在type处要选Average/平均。 完成后点OK就了标准曲线的处理。回到Method Editor主页面。

在window菜单下选1 .ponent list，就可看到生成的标准曲线。

选择对应的组分，可以查看该组分的浓度，标准曲线的相关系数。如果有错误，更改错误的地方，重新进行校正。

如果没有错误，相关系数也在控制范围内，就可以保存方法，然后就可以用这个完整的方法做样品了。做完每个样品，如果选择了打印结果，那就会自动打印出带色谱图的定量结果。 如果没选择打印，可在软件主页面下 单击Results图标，打开相应的数据/结果文件，可以在这里打印或预览结果。

下面就可以开始测定未知浓度。然后就可以进入graphic edit中计算未知化合物浓度了。

打开目标数据

点击peak report

点击预览

用外标标准曲线法计算的化合物浓度显示在报告中