农田杂草病原真菌资源调查.docx

摘要 收集了宁夏部分地区35种杂草上的植物病原真菌，并对每种病原菌进行初步镜检、分离培养和鉴定。结果表明，宁夏农田杂草共有菌物4亚门、9纲和亚纲、8目、10科、23属、46种。其中宁夏新纪录种10个,宁夏寄主新纪录种7个。新记录种分别是芒柄锈菌 Puccinia miscanthi、百合科炭疽刺盘孢菌 Colletotrichumliliacerum、曼陀罗生链格孢 新种 Alternaria daturicola、稗黑粉菌Ustilago trichophora、禾生炭疽菌Colletotrichum graminicola、损毁链格孢Alternaria destruens、狗牙根平脐孺孢 Bipolaris cynodontis、尖角突脐孺孢Exserohilum monoceras、旋花柄锈菌 Puccinia convolvuli和角果藜单胞锈菌 Uromyces ceratocarpi。关键词：杂草 病原真菌 宁夏A survey of pathogenic fungi on farmland weedsin ningxiaAbstractPathogenic fungi on 35 species of weeds were collected and identified in ningxia .The results showed that there were 46 species in Ningxia ,which belonged to 4 subphylums , 9 classes and subclasses ,8 orders ,10 famalies , 23genera . Among them,10 newly recorded species for Ningxia and 7 newly recorded hosts for ningxia were found. Newly recorded species were Puccinia miscanthi、Colletotrichumliliacerum、Alternaria daturicola、Ustilago trichophora、Colletotrichum graminicola、Alternaria destruens、Bipolaris cynodontis、Exserohilum monoceras、Puccinia convolvuli and Uromyces ceratocarpi。Key words:WeedsPathogenic fungi Ningxia目 录1 引言农田杂草直接或间接影响着农业生产，影响着农作物的产量、质量和品质。此外，一些杂草的种子或花粉含有有毒生物碱，能使人畜中毒。目前杂草的主要防治手段是化学除草和人工拔草。人工拔草费时费力，而化学除草则带来了环境污染，破坏生态平衡，耐药性种群上升，抗性种群不断出现，因此需要新的除草技术来替代或补充当前化学除草剂。生物除草剂具有对目标杂草选择性高、专一性强、无残留、对环境安全、持续的生防效果等优点，正符合了农业可持续发展的要求，近年来倍受关注。利用杂草病原真菌控制杂草的危害是一条有效的新途径。杂草病原微生物资源调查是微生物除草剂研究开发的基础工作,积极开展农田重要杂草病原微生物的调查，建立农田杂草的病原微生物资源数据库，并进行科学评价，不仅具有重要的科学意义，而且也具有广阔的应用前景。本研究拟广泛收集宁夏农田杂草病害样品，对杂草病原真菌作属或种鉴定。研究结果将为宁夏及我国杂草草病原真菌资源的研究提供资料，并为进一步筛选高效真菌除草剂提供理论依据。2材料与方法2.1 材料 在510月份，从军马场、贺兰原种场、隆德、宁大实验农场、平吉堡、青铜峡市等县市调查采集杂草病害标本。采集时尽量选择植物具有典型病害症状的部位，对那些植物病害症状不是很明显但已显示部分症状的标本，采集后在实验室进行保湿或分离培养；对采集的每一种标本都详细记录采集寄主、地点、时间、生境和病害症状等。在标本采集和制作过程中对病害标本进行照相。来源是宁夏大学农学院植保实验室历年采集和贮藏的腊叶标本。根据不同真菌分离的要求，我们采用了不同的培养基。本研究所采用的主要培养基及配方如下：PDA培养基：葡萄糖20g，马铃薯200g，琼脂20g，蒸馏水1000ml。燕麦培养基：燕麦片30g,琼脂20g,蒸馏水1000ml。 水琼脂培养基：琼脂20g,蒸馏水1000ml。2.2.2 显微镜检查与鉴定对症状明显的新鲜标本，直接挑取真菌组织，制片，在显微镜下观察鉴定；对那些症状不明显者在23-25下保湿培养2-5天后观察或用培养基分离培养后再鉴定；所有标本在OLYMPUS B071显微镜下观察鉴定。对一些病原菌进行显微照相。查阅相关资料，将病原菌鉴定到属或种。取4-5mm 病健组织于75%酒精中漂洗30s0.1%升汞中浸泡2min（75% 酒精+无菌水）漂洗23s, 无菌水漂洗3 次, 移入PDA 培养基平板上, 26恒温箱中培养1。待菌落长出后, 从组织块菌落边缘挑取少量菌丝放入滴有清水的载玻片上，后盖上盖玻片在显微镜下观察鉴定。对一些病原菌进行显微照相。查阅相关资料，将病原菌鉴定到属或种。2.2.4 形态学观察将菌株接种在PDA 培养基上, 26恒温培养5 d, 记录菌落形态, 观察记录孢子形态及产孢结构,测量孢子( 20 个) 和孢子梗大小等, 进行详细描述,查阅专著文献进行鉴定。对在PDA 平板上不易产孢的菌株, 挑取小块菌饼转移至水琼脂平板, 15 d 后进行显微观察。 一些真菌特别是有丝分裂孢子真菌，往往在培养后难于产孢。主要采用了以下促进产孢的方法：（1）将纯培养的菌落中不规则挖去几小块培养基，进行刺伤刺激产孢；（2）用太阳光照射等方法减少培养基中的水分；（3）将其置入4冰箱内冷冻。3 实验结果3.1杂草病原真菌种类及组成 通过对杂草病害标本的鉴定2-15，鉴定出的杂草病原真菌为4亚门、9纲和亚纲、8目、10科、23属、46种，见表1及表2。表1 宁夏各门菌物纲和亚纲、目、科、属、种的数量亚门 纲和亚纲目科 属 种 占总种数的比例/鞭毛菌亚门11246子囊菌亚门32223担子菌亚门 322313半知菌亚门 2341424 由表1可知，按种的数量,各亚门种类的排序为:半知菌亚门担子菌亚门 鞭毛菌亚门 子囊菌亚门。表2 宁夏各亚门真菌种类 门种鞭毛菌亚门东北霜霉 Peronospora manshurica寄生霜霉Peronospora parasitica苍耳轴霉属Plasmopora sp.粉霜霉 Peronospora farinase苦苣菜生盘霜霉 Bermia sonchicola马齿苋白锈Albugo portulacae子囊菌亚门蒿白粉菌Erysiphe artemisiae蓼白粉菌 Erysiphe polygoni黑痣菌属 Phyllachora sp.担子菌亚门芒柄锈菌 Puccinia miscanthi 旋花柄锈菌Puccinia convolvuli 马格纳斯柄锈菌 Puccinia magnusiana隐匿柄锈菌 Puccinia recondita艾菊柄锈菌 原变种Puccinia tanaceti低滩苦荬菜柄锈菌 Puccinia lactucae-debilis匍匐苦荬菜柄锈菌 Puccinia lactucae-repentis阿嘉菊柄锈菌 矢车菊变种 Puccinia caicitrapae鸢尾柄锈菌 原变种Puccinia iridis萹蓄单胞锈菌Uyomyces polygoni-avicularis角果藜单胞锈菌Uromyces ceratocarpi拂子茅黑粉菌Ustilago calamagrostidis稗黑粉菌Ustilago trichophora半知菌亚门曼陀罗生链格孢 新种Alternaria daturicola链格孢属一种 Alternaria sp.链格孢Alternaria alternata损毁链格孢Alternaria destruens栗梨孢 Pyricularia setariae灰梨孢Piricularia grisea尾孢属一种 Cercospora sp.棋盘花生尾孢Cercospora althaeigena 小尾孢属一种 Cercosporella sp.假尾孢属一种 Pseudocercospora sp.柱隔孢属一种 RamulariaUnger sp.葡萄孢属一种 Botrytis sp.百合科炭疽刺盘孢菌 Colletotrichumliliacerum 禾生炭疽菌Colletotrichum graminicola 半裸镰孢菌Fusarium semitectuma腐皮镰孢菌Fusarium solani尖镰孢菌Fusarium oxysporum玫红聚端孢Trichothecium roseum 双曲孢霉属一种Nakataea sp平脐孺孢属一种Bipolaris sp.狗牙根平脐孺孢Bipolaris cynodontis玉蜀黍平脐蠕孢Bipolaris maydis尖角突脐孺孢Exserohilum monoceras粉孢属一种 Oidium sp.在这些菌物中，宁夏新记录种有10个，分别是芒柄锈菌 Puccinia miscanthi、百合科炭疽刺盘孢菌 Colletotrichumliliacerum、曼陀罗生链格孢 新种Alternaria daturicola、稗黑粉菌Ustilago trichophora、禾生炭疽菌Colletotrichum graminicola、损毁链格孢Alternaria destruens、狗牙根平脐孺孢Bipolaris cynodontis、尖角突脐孺孢Exserohilum monoceras、旋花柄锈菌Puccinia convolvuli和角果藜单胞锈菌Uromyces ceratocarpi。4个亚门中的部分病菌图见图1和图2。 图1 不同寄主上的锈菌图A:马格纳斯柄锈菌Puccinia magnusiana;B:低滩苦荬菜柄锈菌 Puccinia lactucae-debilis;C:匍匐苦荬菜柄锈菌Puccinia lactucae-repentis ;D:阿嘉菊柄锈菌 矢车菊变种Puccinia caicitrapae;E:角果藜单胞锈菌Uromyces ceratocarpi ;F:萹蓄单胞锈菌Uyomyces polygoni-aviculari图2 不同寄主上的不同病菌图A:寄生霜霉Peronospora parasitica；B:曼陀罗生链格孢 新种Alternariadaturicola；C:柱隔孢属一种Ramularia sp.；D:拂子茅黑粉菌Ustilago calamagrostidis；E:小尾孢属一种Cercosporella sp. F:白粉菌属一种Erysiphe sp.宁夏杂草及其上的病原病菌通过对杂草病害标本的鉴定2-15，共鉴定出13科35种杂草上的46种病菌，见表3。表3 各科杂草上的病菌寄主病原采集地采集时间打碗花 旋花柄锈菌 Puccinia convolvuli 宁大实验农场芦苇马格纳斯柄锈菌Puccinia magnusiana军马场赖草隐匿柄锈菌Puccinia recondita黑痣菌属一种 Phyllachora sp.军马场荻芒柄锈菌Puccinia miscanthi青铜峡黄花蒿 艾菊柄锈菌 原变种Puccinia tanaceti宁大实验农场蒙山莴苣 低滩苦荬菜柄锈Puccinia lactucae-debilis粉孢属一种 Oidium sp.平吉堡山苦荬菜 匍匐苦荬菜柄锈Puccinia lactucae-repentis宁大实验农场刺儿菜阿嘉菊柄锈菌 矢车菊变种Puccinia caicitrapae粉孢属一种 Oidium sp.军马场马兰鸢尾柄锈菌 原变种Puccinia iridis军马场萹蓄 萹蓄单胞锈菌Uyomyces polygoni-aviculari蓼白粉菌Erysiphe polygoni隆德卷茎蓼 角果藜单胞锈菌Uromyces ceratocarpi军马场野大豆东北霜霉Peronospora manshurica军马场风花菜 寄生霜霉 Peronospora parasitica青铜峡苦苣菜 苦苣菜生盘霜霉 Bermia sonchicola平吉堡苍耳苍耳轴霜霉Plasmopora angustiterminalis宁大实验农场蒙古蒿 蒿白粉菌Erysiphe artemisiae军马场曼陀罗曼陀罗生链格孢 新种 Alternariadaturicola贺兰原种场萱草百合科炭疽刺盘孢菌 Colletotrichumliliacerum 隆德狗尾草栗梨孢Pyricularia setariae平吉堡甘草葡萄孢属一种 Botrytis sp.隆德马齿苋马齿苋白锈 Albugo portulacae青铜峡灰条粉霜霉 Peronospora farinase军马场荠菜寄生霜霉Peronospora parasitica固原假苇拂子茅拂子茅黑粉菌Ustilago calamagrostidis军马场狭叶米口袋粉孢属一种 Oidium sp.平吉堡三叶草粉孢属一种 Oidium sp.平吉堡宽叶独行菜粉孢属一种 Oidium sp.青铜峡酸模叶蓼粉孢属一种 Oidium sp.军马场蜀葵棋盘花生尾孢 Cercospora althaeigena青铜峡旋覆花小尾孢属一种 Cercosporella sp.青铜峡水飞蓟小尾孢属一种 Cercosporella sp.链格孢属Alternaria sp.隆德鹅绒藤假尾孢属 Pseudocercospora sp.尾孢属Cercospora sp.链格孢属 Alternaria sp.青铜峡白昌蒲柱隔孢属Ramularia sp.青铜峡菟丝子半裸镰孢菌Fusarium semitectuma腐皮镰孢菌Fusarium solani尖镰孢菌Fusarium oxysporum玫红聚端孢Trichothecium roseum 平脐孺孢属Bipolaris sp.损毁链格孢Alternaria destruens双曲孢霉属Nakataea sp.平吉堡军马场稗草稗黑粉菌Ustilago trichophora玉蜀黍平脐蠕孢Bipolaris maydis尖角突脐孺孢Exserohilum monoceras灰梨孢Piricularia grisea狗牙根平脐孺孢Bipolaris cynodontis禾生炭疽菌Colletotrichum graminicola 链格孢Alternaria alternata军马场平吉堡在这些寄主中，宁夏寄主新纪录种7个,分别为打碗花Convolvulus hederacea是旋花柄锈菌Puccinia convolvuli的新寄主，荻Miscanthus sacchariflorus是芒柄锈菌Puccinia miscanthi的新寄主 ，萱草Hemerocallis fulva是百合科炭疽刺盘孢菌Colletotrichum liliacerum的新寄主，曼陀罗Darura stramonium是曼陀罗生链格孢新种Alternaria daturicola的新寄主，稗Echinochloacrus-galli是尖角突脐孺孢Exserohilum monoceras、狗牙根平脐孺孢Bipolaris cynodontis的新寄主，菟丝子Cuscuta chinensis是半裸镰孢菌Fusarium semitectuma、腐皮镰孢菌Fusarium solani、尖镰孢菌Fusarium oxysporum、玫红聚端孢Trichothecium roseum、平脐孺孢属Bipolaris sp.、损毁链格孢Alternaria destruens、双曲孢霉属Nakataea sp.的新寄主，卷劲蓼Polyoonam convolvus是角果藜单胞锈菌Uromyces ceratocarpi的新寄主。其中，在菟丝子和稗草上分离的真菌种类较多，菟丝子上有5属7种，稗草上有6属7种，部分病菌图见图3和图4。图3 菟丝子上的不同病菌图A:半裸镰孢菌Fusarium semitectuma；B:腐皮镰孢菌Fusarium solani；C:平脐蠕孢属一种Bipolaris sp.D:损毁链格孢Alternaria destruens；E:玫红聚端孢Trichothecium roseum；F:双曲孢霉属一种Nakataea sp.BAED图4 稗草上的不同病菌图A:尖角突脐孺孢Exserohilum monoceras；B:狗牙根平脐孺孢Bipolaris cynodontis；C:玉蜀黍平脐蠕孢Bipolaris maydisD:链格孢Alternaria alternata；E:稗黑粉Ustilago trichophora；F:禾生炭疽菌Colletotrichum graminicola 4 结论与讨论(1) 宁夏农田杂草有菌物4亚门、9纲和亚纲、8目、10科、23属和46种,其中,宁夏新纪录种有10个,宁夏寄主新纪录种有7个。(2) 宁夏菌物种类组成的特征。按种的数量,门的排序为:半知菌亚门担子菌亚门 鞭毛菌亚门 子囊菌亚门;排名前3位的优势属依次为:柄锈菌属 平脐孺孢属、镰刀菌属 链格孢属和霜霉属。(3) 本实验主要鉴定了一些真菌性病害, 而对细菌和病毒病害没有进行调查。另外，一些菌物的鉴定还存在一定的困难,其分类地位还未被确定,这有待于进一步深入研究,以便全面了解农田杂草病害的发生、分布与流行情况, 以确定可以作为生防病原物利用的病原种类。参 考 文 献1 方中达. 植病研究方法.M北京: 农业出版社, 19792 魏景超. 真菌鉴定手册.M上海:上海科学技术出版社,19793 张天宇.中国真菌志第十六卷.链格孢属.M北京:科学出版社,20034 王云章、庄剑云. 中国真菌志第十卷.锈菌目（一）.M北京:科学出版社,19985 庄剑云. 中国真菌志第十九卷.锈菌目（二）.M北京:科学出版社,19986 庄剑云. 中国真菌志第二十五卷.锈菌目（三）.M北京:科学出版社,19987 郭林.中国真菌志第十二卷.黑粉菌科.M北京: 科学出版社,20008 国科学院中国孢子植物志编辑委员会.中国真菌志第一卷.白粉菌目.M科学出版社，19879 刘锡琎、郭英兰.中国真菌志第九卷.假尾孢属.M科学出版社，199810 张中义.中国真菌志第二十六卷.葡萄孢属、柱隔孢属.M科学出版社，199811 张忠义.中国真菌志第十四卷.枝孢属、黑星孢属、梨孢属.M科学出版社12 郭英兰、刘锡琎.中国真菌志第二十四卷.尾孢属.M北京:科学出版社，200513 余永年.中国真菌志第六卷（上）.霜霉目.M北京:科学出版社14 余永年.中国真菌志第六卷（下）.霜霉目.M北京:科学出版社15王宽仓、查仙芳、沈瑞清. 宁夏荒漠菌物志M 宁夏人民出版社致 谢时光匆匆如流水，转眼便是大学毕业时节，春梦秋云，聚散真不容易。四年的大学时光给我留下了太多太多的美好回忆。如今，离校日期已日趋临近，毕业论文的完成也随之进入了尾声。在此我想对我的母校，我的父母、亲人们，我的老师和同学们表达我由衷的谢意。感谢我的家人对我大学四年学习的默默支持，不管他们如何辛苦，从不让我受半点委屈，总是尽力给我提供最好的物质条件，对我也没有什么苛求，让我生活地很快乐；感谢我的母校宁夏大学给与我大学四年学习的机会，为我提供良好的学习环境，给予我自由发挥的空间，锻炼了我多方面的能力；感谢老师和同学们四年来对我的关心和鼓励，有了老师的谆谆教导和同学们真诚地友谊，让我融入在这个温馨的大集体中，才不会感到迷茫和孤单。关于我的毕业论文设计，最要感谢的是我的论文指导老师李文强副教授。在毕业课题的每个阶段，不论从选题到查阅资料，论文提纲的确定，中期论文的修改，还是后期论文格式调整各个环节，李文强老师都给予了我悉心的指导，没有半点马虎与敷衍，让我很感动。半年的实习中，李老师不仅在学业上精心指导我，还在思想上给我无微不至的关怀，凡事都能从我的角度为我考虑很多，在此谨向李老师致以诚挚的谢意和崇高的敬意！同时，本篇毕业论文的写作也得到了张本建等同学的热情帮助。在实验的过程中，他帮我做了很多事，提醒我许多注意事项，让我的实验得以顺利完成。有无私的亲人，美丽的大学，负责的老师和友善的同学在我身边关心我，帮助我，我是幸运的，快乐的，幸福的。在此，我再一次真诚地向帮助过我的家人、老师、同学致以我最真诚的谢意！