微生物检验鉴定技术.pptx

第一章 微生物检验鉴定技术 本章提纲第一节第一节 微生物检验基本知识与操作微生物检验基本知识与操作第二节第二节 微生物常规鉴定技术微生物常规鉴定技术第三节第三节 食品微生物检验新技术食品微生物检验新技术第一节 微生物检验基本知识与操作 包括显微镜检、染色技术、培养基制备包括显微镜检、染色技术、培养基制备技术、接种、分离纯化和培养技术等。技术、接种、分离纯化和培养技术等。第一节 微生物检验基本知识一、接种（一、接种（inoculation）n n将微生物接到适于它生长繁殖的人工培养基上或将微生物接到适于它生长繁殖的人工培养基上或将微生物接到适于它生长繁殖的人工培养基上或将微生物接到适于它生长繁殖的人工培养基上或活的生物体内的过程叫做接种。活的生物体内的过程叫做接种。活的生物体内的过程叫做接种。活的生物体内的过程叫做接种。n n.接种工具接种工具 1 1接种针接种针接种针接种针 2.2.接种环接种环接种环接种环 3.3.接种钩接种钩接种钩接种钩 4.5.4.5.玻璃涂棒玻璃涂棒玻璃涂棒玻璃涂棒 6.6.接种圈接种圈接种圈接种圈 7.7.接种锄接种锄接种锄接种锄 8.8.小解剖刀小解剖刀小解剖刀小解剖刀n nInoculation is the placement of something to where it will grow or reproduce,and is most commonly used in respect of the introduction of a serum,vaccine,or antigenic substance into the body of a human or animal,especially to produce or boost immunity to a specific disease;but also can be used to refer to the communication of a disease to a living organism by transferring its causative agent into the organism,to implant microorganisms or infectious material into a culture medium such as a brewers vat or a petri dish.第一节 微生物检验基本知识一、接种一、接种一、接种一、接种n n2.2.常用的接种方法常用的接种方法常用的接种方法常用的接种方法 有以下几种：有以下几种：有以下几种：有以下几种：n n）划线接种划线接种划线接种划线接种 最常用。常用的接种工具有接种环，接种针等。最常用。常用的接种工具有接种环，接种针等。最常用。常用的接种工具有接种环，接种针等。最常用。常用的接种工具有接种环，接种针等。在斜面接种和平板划线中就常用此法。在斜面接种和平板划线中就常用此法。在斜面接种和平板划线中就常用此法。在斜面接种和平板划线中就常用此法。n n）三点接种三点接种三点接种三点接种 在研究霉菌形态时常用此法。此法即把少量的在研究霉菌形态时常用此法。此法即把少量的在研究霉菌形态时常用此法。此法即把少量的在研究霉菌形态时常用此法。此法即把少量的微生物接种在平板表面上，成等边三角形的三点，让它各自独微生物接种在平板表面上，成等边三角形的三点，让它各自独微生物接种在平板表面上，成等边三角形的三点，让它各自独微生物接种在平板表面上，成等边三角形的三点，让它各自独立形成菌落后，来观察、研究它们的形态。立形成菌落后，来观察、研究它们的形态。立形成菌落后，来观察、研究它们的形态。立形成菌落后，来观察、研究它们的形态。n n）穿刺接种穿刺接种穿刺接种穿刺接种 在保藏厌氧菌种或研究微生物的动力时常用。在保藏厌氧菌种或研究微生物的动力时常用。在保藏厌氧菌种或研究微生物的动力时常用。在保藏厌氧菌种或研究微生物的动力时常用。用的接种工具是接种针。培养基一般是半固体培养基用的接种工具是接种针。培养基一般是半固体培养基用的接种工具是接种针。培养基一般是半固体培养基用的接种工具是接种针。培养基一般是半固体培养基n n）倾注接种倾注接种倾注接种倾注接种 该法是将待接种微生物先放入培养皿中，然该法是将待接种微生物先放入培养皿中，然该法是将待接种微生物先放入培养皿中，然该法是将待接种微生物先放入培养皿中，然后再倒入冷却至后再倒入冷却至后再倒入冷却至后再倒入冷却至45C45C左右的固体培养基，迅速轻轻摇匀，以达左右的固体培养基，迅速轻轻摇匀，以达左右的固体培养基，迅速轻轻摇匀，以达左右的固体培养基，迅速轻轻摇匀，以达到稀释菌液的目的。待平板凝固之后，置合适温度下培养，就到稀释菌液的目的。待平板凝固之后，置合适温度下培养，就到稀释菌液的目的。待平板凝固之后，置合适温度下培养，就到稀释菌液的目的。待平板凝固之后，置合适温度下培养，就可长出单个的微生物菌落。可长出单个的微生物菌落。可长出单个的微生物菌落。可长出单个的微生物菌落。第一节 微生物检验基本知识n n一、接种一、接种n n2.2.常用的接种方法常用的接种方法常用的接种方法常用的接种方法n n）涂布接种涂布接种涂布接种涂布接种 先倒好平板，让其凝固，然后再将菌液倒入先倒好平板，让其凝固，然后再将菌液倒入先倒好平板，让其凝固，然后再将菌液倒入先倒好平板，让其凝固，然后再将菌液倒入平板上面，迅速用涂布棒在表面作来回左右的涂布，使菌液均平板上面，迅速用涂布棒在表面作来回左右的涂布，使菌液均平板上面，迅速用涂布棒在表面作来回左右的涂布，使菌液均平板上面，迅速用涂布棒在表面作来回左右的涂布，使菌液均匀分布，即可长出单个菌落。匀分布，即可长出单个菌落。匀分布，即可长出单个菌落。匀分布，即可长出单个菌落。n n）液体接种液体接种液体接种液体接种 从固体培养基中将菌洗下，倒入液体培养基中；从固体培养基中将菌洗下，倒入液体培养基中；从固体培养基中将菌洗下，倒入液体培养基中；从固体培养基中将菌洗下，倒入液体培养基中；或者从液体培养物中，用移液管将菌液接至液体培养基中，都或者从液体培养物中，用移液管将菌液接至液体培养基中，都或者从液体培养物中，用移液管将菌液接至液体培养基中，都或者从液体培养物中，用移液管将菌液接至液体培养基中，都属于液体接种。属于液体接种。属于液体接种。属于液体接种。n n）注射接种注射接种注射接种注射接种 用注射的方法将微生物转接至活的生物体内，用注射的方法将微生物转接至活的生物体内，用注射的方法将微生物转接至活的生物体内，用注射的方法将微生物转接至活的生物体内，常见的疫苗预防接种，就是用注射接种。常见的疫苗预防接种，就是用注射接种。常见的疫苗预防接种，就是用注射接种。常见的疫苗预防接种，就是用注射接种。n n）活体接种活体接种活体接种活体接种 是专用于培养病毒或其它病原微生物的一种是专用于培养病毒或其它病原微生物的一种是专用于培养病毒或其它病原微生物的一种是专用于培养病毒或其它病原微生物的一种方法。所用的活体可以是整个动物；也可以是某个离体活组织，方法。所用的活体可以是整个动物；也可以是某个离体活组织，方法。所用的活体可以是整个动物；也可以是某个离体活组织，方法。所用的活体可以是整个动物；也可以是某个离体活组织，例如猴肾等；也可以是发育的鸡胚。接种的方式有注射、灌喂、例如猴肾等；也可以是发育的鸡胚。接种的方式有注射、灌喂、例如猴肾等；也可以是发育的鸡胚。接种的方式有注射、灌喂、例如猴肾等；也可以是发育的鸡胚。接种的方式有注射、灌喂、拌料喂养等。拌料喂养等。拌料喂养等。拌料喂养等。第一节 微生物检验基本知识一、接种一、接种n n3.无菌操作无菌操作(Aseptic technique)n n培养基经高压灭菌后，用经过灭菌的工具培养基经高压灭菌后，用经过灭菌的工具（如接种针和吸管等）在无菌条件下接种含菌（如接种针和吸管等）在无菌条件下接种含菌材料（如样品、菌苔或菌悬液等）于培养基上，材料（如样品、菌苔或菌悬液等）于培养基上，这个过程叫做无菌接种操作。这个过程叫做无菌接种操作。n n 在实验室检验中的各种接种必须是无菌操在实验室检验中的各种接种必须是无菌操作。作。Aseptic techniquen nAseptic technique is a set of specific practices and procedures performed under carefully controlled conditions with the goal of minimizing contamination by pathogens.n nPurpose:n nAseptic technique is employed to maximize and Aseptic technique is employed to maximize and maintain asepsis,the absence of pathogenic maintain asepsis,the absence of pathogenic organisms in the clinical setting and to prevent the organisms in the clinical setting and to prevent the spread of pathogens.spread of pathogens.n nOften,practices that clean(remove dirt and other Often,practices that clean(remove dirt and other impurities),sanitize(reduce the number of impurities),sanitize(reduce the number of microorganisms to safe levels),or disinfect(remove microorganisms to safe levels),or disinfect(remove most microorganisms but not highly resistant ones)are most microorganisms but not highly resistant ones)are not sufficient to prevent infection.not sufficient to prevent infection.针尖上的细菌针尖上的细菌第一节 微生物检验基本知识二、分离纯化（二、分离纯化（Isolation）n n含有一种以上的微生物培养物称为混和培养含有一种以上的微生物培养物称为混和培养物（物（Mixed culture）。如果在一个菌落中所）。如果在一个菌落中所有细胞均来自于一个亲代细胞，那么这个菌有细胞均来自于一个亲代细胞，那么这个菌落称为纯培养（落称为纯培养（Pure culture）。）。n n在进行菌种鉴定时，所用的微生物一般均要在进行菌种鉴定时，所用的微生物一般均要求为纯的培养物。得到纯培养的过程称为分求为纯的培养物。得到纯培养的过程称为分离纯化，方法有许多种。离纯化，方法有许多种。第一节 微生物检验基本知识二、分离纯化二、分离纯化n n、倾注平板法、倾注平板法(Pour plate)第一节 微生物检验基本知识二、分离纯化二、分离纯化n n、涂布平板法、涂布平板法,Spread plate 第一节 微生物检验基本知识二、分离纯化二、分离纯化n n、平板划线法、平板划线法,Streak plate n n常见的比较容易出现单个菌落的划线方法有常见的比较容易出现单个菌落的划线方法有斜线法、曲线法、方格法、放射法、四格法斜线法、曲线法、方格法、放射法、四格法等。等。StreakStreak plate plate 第一节 微生物检验基本知识二、分离纯化二、分离纯化n n、富集培养法、富集培养法 富集培养法的方法和原理非常简单。我们富集培养法的方法和原理非常简单。我们可以创造一些条件只让所需的微生物生长，在可以创造一些条件只让所需的微生物生长，在这些条件下，所需要的微生物能有效地与其他这些条件下，所需要的微生物能有效地与其他微生物进行竞争，在生长能力方面远远超过其微生物进行竞争，在生长能力方面远远超过其它微生物。如果要分离一些专性寄生菌，就必它微生物。如果要分离一些专性寄生菌，就必须把样品接种到相应敏感宿主细胞群体中，使须把样品接种到相应敏感宿主细胞群体中，使其大量生长。通过多次重复移种便可以得到纯其大量生长。通过多次重复移种便可以得到纯的寄生菌。的寄生菌。第一节 微生物检验基本知识二、分离纯化二、分离纯化n n、厌氧法、厌氧法、厌氧法、厌氧法n n在实验室中，为了分离某些厌氧菌，可以利用装有原在实验室中，为了分离某些厌氧菌，可以利用装有原在实验室中，为了分离某些厌氧菌，可以利用装有原在实验室中，为了分离某些厌氧菌，可以利用装有原培养基的试管作为培养容器，把它放在沸水浴中加热培养基的试管作为培养容器，把它放在沸水浴中加热培养基的试管作为培养容器，把它放在沸水浴中加热培养基的试管作为培养容器，把它放在沸水浴中加热数分钟，以便逐出溶解氧。然后快速冷却，并进行接数分钟，以便逐出溶解氧。然后快速冷却，并进行接数分钟，以便逐出溶解氧。然后快速冷却，并进行接数分钟，以便逐出溶解氧。然后快速冷却，并进行接种。接种后，加入无菌石蜡于培养基表面，使与空气种。接种后，加入无菌石蜡于培养基表面，使与空气种。接种后，加入无菌石蜡于培养基表面，使与空气种。接种后，加入无菌石蜡于培养基表面，使与空气隔绝。另一种方法是，在接种后，利用隔绝。另一种方法是，在接种后，利用隔绝。另一种方法是，在接种后，利用隔绝。另一种方法是，在接种后，利用N N2 2或或或或COCO2 2取代取代取代取代培养基中的气体，然后在火焰上把试管口密封。培养基中的气体，然后在火焰上把试管口密封。培养基中的气体，然后在火焰上把试管口密封。培养基中的气体，然后在火焰上把试管口密封。n n有时为了更有效地分离某些厌氧菌，可以把所分离样有时为了更有效地分离某些厌氧菌，可以把所分离样有时为了更有效地分离某些厌氧菌，可以把所分离样有时为了更有效地分离某些厌氧菌，可以把所分离样品接种于培养基上，然后再把培养皿放在完全密封的品接种于培养基上，然后再把培养皿放在完全密封的品接种于培养基上，然后再把培养皿放在完全密封的品接种于培养基上，然后再把培养皿放在完全密封的厌氧培养装置中。厌氧培养装置中。厌氧培养装置中。厌氧培养装置中。第一节 微生物检验基本知识三、培养三、培养 n n1、根据培养时是否需要氧气，可分为好氧、根据培养时是否需要氧气，可分为好氧培养和厌氧培养。培养和厌氧培养。n n好氧培养好氧培养(Aerobic Incubation)：也称也称“好气培养好气培养”。n n厌氧培养厌氧培养(Anaerobic Incubation)：也也称称“厌气培养厌气培养”。第一节 微生物检验基本知识三、培养三、培养 n n、根据培养基的物理状态，可分为固体培、根据培养基的物理状态，可分为固体培养和液体培养两大类。养和液体培养两大类。n n固体培养固体培养固体培养固体培养：solid incubationsolid incubationn n液体培养液体培养液体培养液体培养：liquid incubation liquid incubation 第二节 微生物常规鉴定技术n n一、形态结构和培养特性观察一、形态结构和培养特性观察n n二、生理生化试验二、生理生化试验n n三、血清学试验三、血清学试验第二节 微生物常规鉴定技术一、形态结构和培养特性观察一、形态结构和培养特性观察n1、微生物的形态结构观察、微生物的形态结构观察n微生物的形态结构观察主要是通过染色，在显微微生物的形态结构观察主要是通过染色，在显微镜下对其形状、大小、排列方式、细胞结构（包镜下对其形状、大小、排列方式、细胞结构（包括细胞壁、细胞膜、细胞核、鞭毛、芽孢等）及括细胞壁、细胞膜、细胞核、鞭毛、芽孢等）及染色特性进行观察，直观地了解细菌在形态结构染色特性进行观察，直观地了解细菌在形态结构上特性，根据不同微生物在形态结构上的不同达上特性，根据不同微生物在形态结构上的不同达到区别、鉴定微生物的目的。到区别、鉴定微生物的目的。n2、微生物培养特性观察、微生物培养特性观察E.Coli(GE.Coli(G-)绿脓杆菌单鞭毛绿脓杆菌单鞭毛绿脓杆菌单鞭毛绿脓杆菌单鞭毛S.aureus(GS.aureus(G+)梭状芽孢杆菌梭状芽孢杆菌梭状芽孢杆菌梭状芽孢杆菌曲霉曲霉曲霉曲霉青霉青霉青霉青霉n n酵母酵母酵母酵母n n炭疽芽孢炭疽芽孢炭疽芽孢炭疽芽孢革兰染色法，丹麦病理学家革兰染色法，丹麦病理学家C.Gram C.Gram 创立（创立（1884 1884）n n（1 1）涂片：）涂片：）涂片：）涂片：（2 2）晾干：）晾干：）晾干：）晾干：（3 3）固定）固定）固定）固定n n（4 4）结晶紫色染色：）结晶紫色染色：）结晶紫色染色：）结晶紫色染色：1min1min。水洗水洗水洗水洗n n（5 5）媒染：滴加卢哥氏碘液，媒染媒染：滴加卢哥氏碘液，媒染媒染：滴加卢哥氏碘液，媒染媒染：滴加卢哥氏碘液，媒染1min1min。水洗水洗水洗水洗n n（6 6）脱色：将玻片倾斜，连续滴加脱色：将玻片倾斜，连续滴加脱色：将玻片倾斜，连续滴加脱色：将玻片倾斜，连续滴加95%95%乙醇脱色乙醇脱色乙醇脱色乙醇脱色2025s2025s至流出液无色，立即水洗。至流出液无色，立即水洗。至流出液无色，立即水洗。至流出液无色，立即水洗。n n（7 7）复染：滴加蕃红复染复染：滴加蕃红复染复染：滴加蕃红复染复染：滴加蕃红复染5min5min。水洗。水洗。水洗。水洗n n（8 8）晾干：晾干或者用吸水纸吸干。晾干：晾干或者用吸水纸吸干。晾干：晾干或者用吸水纸吸干。晾干：晾干或者用吸水纸吸干。n n（9 9）镜检：先用低倍，再用高倍，最后用油镜。镜检：先用低倍，再用高倍，最后用油镜。镜检：先用低倍，再用高倍，最后用油镜。镜检：先用低倍，再用高倍，最后用油镜。n n（1010）实验完毕后的处理：）实验完毕后的处理：）实验完毕后的处理：）实验完毕后的处理：n n浸过油的镜头：浸过油的镜头：浸过油的镜头：浸过油的镜头：a.a.先用擦镜纸将油镜头上的油擦去。先用擦镜纸将油镜头上的油擦去。先用擦镜纸将油镜头上的油擦去。先用擦镜纸将油镜头上的油擦去。b.b.用擦镜纸沾少许二甲苯将镜头擦用擦镜纸沾少许二甲苯将镜头擦用擦镜纸沾少许二甲苯将镜头擦用擦镜纸沾少许二甲苯将镜头擦2323次。次。次。次。c.c.再用干净的擦再用干净的擦再用干净的擦再用干净的擦镜纸将镜头擦镜纸将镜头擦镜纸将镜头擦镜纸将镜头擦2323次。注意擦镜头时向一个方向擦拭。次。注意擦镜头时向一个方向擦拭。次。注意擦镜头时向一个方向擦拭。次。注意擦镜头时向一个方向擦拭。n n细菌染色玻片用废擦镜纸将香柏油擦干细菌染色玻片用废擦镜纸将香柏油擦干细菌染色玻片用废擦镜纸将香柏油擦干细菌染色玻片用废擦镜纸将香柏油擦干Grams staining第二节 微生物常规鉴定技术一、形态结构和培养特性观察一、形态结构和培养特性观察n1、微生物的形态结构观察、微生物的形态结构观察n2、微生物培养特性观察、微生物培养特性观察n微生物培养特性的观察是微生物检验鉴别中的一项重要内微生物培养特性的观察是微生物检验鉴别中的一项重要内容。容。）细菌的培养特征）细菌的培养特征 包括以下内容：在固体培养包括以下内容：在固体培养基上，观察菌落大小、形态、颜色（色素是水溶性基上，观察菌落大小、形态、颜色（色素是水溶性还是脂溶性）、光泽度、透明度、质地、隆起形状、还是脂溶性）、光泽度、透明度、质地、隆起形状、边缘特征及迁移性等。在液体培养中的表面生长情边缘特征及迁移性等。在液体培养中的表面生长情况（菌膜、环）混浊度及沉淀等。半固体培养基穿况（菌膜、环）混浊度及沉淀等。半固体培养基穿刺接种观察运动、扩散情况。刺接种观察运动、扩散情况。n n细菌在液体培养基中生长性状观察细菌在液体培养基中生长性状观察细菌在液体培养基中生长性状观察细菌在液体培养基中生长性状观察A.A.深浊度：观察是否透明、轻度浑浊、中度浑浊或极度浑浊，深浊度：观察是否透明、轻度浑浊、中度浑浊或极度浑浊，还有均匀浑浊、颗粒状浑浊、絮状浑浊。还有均匀浑浊、颗粒状浑浊、絮状浑浊。B.B.沉淀：试管底有无沉淀，沉淀物呈颗粒状、粘稠状或絮状。沉淀：试管底有无沉淀，沉淀物呈颗粒状、粘稠状或絮状。轻摇时云雾状、絮状或发辫状升起。轻摇时云雾状、絮状或发辫状升起。C.C.表面：有无菌膜及附着于管壁的菌环表面：有无菌膜及附着于管壁的菌环D.D.色素及气味色素及气味细胞在固体培养基上菌落生长性状观察细胞在固体培养基上菌落生长性状观察细胞在固体培养基上菌落生长性状观察细胞在固体培养基上菌落生长性状观察A.A.大小：菌落直径在大小：菌落直径在1mm1mm以下为露滴状菌落；以下为露滴状菌落；1-2mm1-2mm为小菌为小菌落；落；2-42-4为中等大菌落；为中等大菌落；4-6mm4-6mm或更大为大菌落。或更大为大菌落。B.B.形状：有圆形，有规则形、根足形、菌丝状等形状：有圆形，有规则形、根足形、菌丝状等C.C.边缘：有整齐、锯齿状、纤毛状、卷发状等边缘：有整齐、锯齿状、纤毛状、卷发状等D.D.表面：有光滑、湿滑、粗糙、颗粒状、皱丝状、同心状、放表面：有光滑、湿滑、粗糙、颗粒状、皱丝状、同心状、放射状等射状等E.E.降起度：有角平、隆起、脐状、扭扣状降起度：有角平、隆起、脐状、扭扣状F.F.颜色：有无色、白色、灰白色、金黄色、柠檬色、绿色、红颜色：有无色、白色、灰白色、金黄色、柠檬色、绿色、红色等色等G.G.透明度：有透明、半透明、不透明等透明度：有透明、半透明、不透明等一、形态结构和培养特性观察一、形态结构和培养特性观察n1、微生物的形态结构观察、微生物的形态结构观察n2、微生物培养特性观察、微生物培养特性观察 ）细菌的培养特征）细菌的培养特征 ）霉菌酵母菌的培养特征：）霉菌酵母菌的培养特征：大多数酵母菌没有丝状大多数酵母菌没有丝状体，在固体培养基上形成的菌落和细菌的很相似，只体，在固体培养基上形成的菌落和细菌的很相似，只是比细菌菌落大且厚。液体培养也和细菌相似，有均是比细菌菌落大且厚。液体培养也和细菌相似，有均匀生长、沉淀或在液面形成菌膜。匀生长、沉淀或在液面形成菌膜。霉菌有分支的丝状体，菌丝粗长，在条件适宜的霉菌有分支的丝状体，菌丝粗长，在条件适宜的培养基里，菌丝无限伸长沿培养基表面蔓延。霉菌的培养基里，菌丝无限伸长沿培养基表面蔓延。霉菌的基内菌丝、气生菌丝和孢子丝都常带有不同颜色，因基内菌丝、气生菌丝和孢子丝都常带有不同颜色，因而菌落边缘和中心，正面和背面颜色常常不同，如青而菌落边缘和中心，正面和背面颜色常常不同，如青霉菌：孢子青绿色，气生菌丝无色，基内菌丝褐色。霉菌：孢子青绿色，气生菌丝无色，基内菌丝褐色。霉菌在固体培养表面形成絮状、绒毛状和蜘蛛网状菌霉菌在固体培养表面形成絮状、绒毛状和蜘蛛网状菌落。落。第二节 微生物常规鉴定技术二、生理生化试验二、生理生化试验n微生物生化反应：指用化学反应来测定微生物的代谢产物，生微生物生化反应：指用化学反应来测定微生物的代谢产物，生化反应常用来鉴别一些在形态和其它方面不易区别的微生物。化反应常用来鉴别一些在形态和其它方面不易区别的微生物。因此微生物生化反应是微生物分类鉴定中的重要依据之一。因此微生物生化反应是微生物分类鉴定中的重要依据之一。n微生物检验中常用的生化反应有：微生物检验中常用的生化反应有：糖或醇类发酵试验糖或醇类发酵试验 淀粉水解试验淀粉水解试验 V-P试验试验 甲基红（甲基红（MR）试验）试验 靛基质（靛基质（Indole）试验）试验 过氧化氢酶试验过氧化氢酶试验 硝酸盐还原试验硝酸盐还原试验 明胶液化试验明胶液化试验 尿素酶（尿素酶（Urease）试验）试验 氧化酶试验氧化酶试验 硫化氢（硫化氢（H2S）试验）试验 三糖铁（三糖铁（TSI）琼脂试验）琼脂试验 氨基酸脱羧酶的测定氨基酸脱羧酶的测定 耐盐性试验耐盐性试验 卵磷脂酶的测定卵磷脂酶的测定 石蕊牛奶反应石蕊牛奶反应 酪蛋白水解酪蛋白水解 苯丙氨酸脱氨试验苯丙氨酸脱氨试验 氰化钾试验氰化钾试验 对叠氮化钠的抗性对叠氮化钠的抗性 硫化氢硫化氢-靛基质靛基质-动力（动力（SIM）琼脂试验）琼脂试验 含碳化合物的利用（柠檬酸盐或丙酸盐利用）含碳化合物的利用（柠檬酸盐或丙酸盐利用）Biochemical and Metabolic Properties of Microbesn nMicroorganisms can be classified,or distinguished Microorganisms can be classified,or distinguished from one another,by the ability to(1)from one another,by the ability to(1)grow on grow on different substrates and/or production of different substrates and/or production of different end productsdifferent end products,(2),(2)produce specific produce specific enzymesenzymes,(3),(3)use oxygenuse oxygen,or(4),or(4)be motilebe motile.n nFor example,certain microbes can use different For example,certain microbes can use different carbohydrates as sources of energy and/or carbon.carbohydrates as sources of energy and/or carbon.n nBecause such variability exists in carbohydrate Because such variability exists in carbohydrate utilization between different microbes,this can aid in utilization between different microbes,this can aid in the group,genus,or species identification.the group,genus,or species identification.第二节 微生物常规鉴定技术三、血清学试验三、血清学试验n血清学反应是指：相应的抗原与抗体在体外血清学反应是指：相应的抗原与抗体在体外一定条件下作用，可出现肉眼可见的沉淀、一定条件下作用，可出现肉眼可见的沉淀、凝集现象。在食品微生物检验中，常用血清凝集现象。在食品微生物检验中，常用血清学反应来鉴定分离到的细菌，以最终确认检学反应来鉴定分离到的细菌，以最终确认检测结果。测结果。n在细菌的检测中，应用最多的是凝集试验、在细菌的检测中，应用最多的是凝集试验、沉淀反应和补体结合试验。沉淀反应和补体结合试验。Serological testing n nSerology is a medical blood test to detect the presence of antibodies against a microorganism.n nCertain microorganisms(antigens)stimulate the body to produce antibodies during an active infection.血清学试验血清学试验的一般特点：的一般特点：n1)抗原体的结合具有抗原体的结合具有特异性特异性，当有共同抗原体存在，当有共同抗原体存在时，会出现交叉反应。时，会出现交叉反应。n2)抗原体的结合是分子表面的结合，这种结合虽相抗原体的结合是分子表面的结合，这种结合虽相当稳定，但是当稳定，但是可逆的可逆的。n3)抗原体的结合是按抗原体的结合是按一定比例一定比例进行的，只有比例适进行的，只有比例适当时，才能出现可见反应。当时，才能出现可见反应。n4)血清学反应大体分为血清学反应大体分为两个阶段两个阶段进行，但其间无严进行，但其间无严格界限。第一阶段为抗原体特异性结合阶段，反应格界限。第一阶段为抗原体特异性结合阶段，反应速度很快，只需几秒至几分钟反应即可完毕，但不速度很快，只需几秒至几分钟反应即可完毕，但不出现肉眼可见现象。第二阶段为抗原体反应的可见出现肉眼可见现象。第二阶段为抗原体反应的可见阶段，表现为凝集、沉淀、补体结合反应等。反应阶段，表现为凝集、沉淀、补体结合反应等。反应速度慢，需几分、几十分以至更长时间。而且，在速度慢，需几分、几十分以至更长时间。而且，在第二阶段反应中，电解质、第二阶段反应中，电解质、PH、温度等环境因素的、温度等环境因素的变化，都直接影响血清学反应的结果。变化，都直接影响血清学反应的结果。第二节 微生物常规鉴定技术三、血清学试验三、血清学试验n、凝集反应（、凝集反应（Agglutination reaction）颗粒性抗原（细菌、红细胞等）与相应颗粒性抗原（细菌、红细胞等）与相应抗体结合，在电解质参与下所形成的肉眼可抗体结合，在电解质参与下所形成的肉眼可见的凝集现象，称为凝集反应。其中的抗原见的凝集现象，称为凝集反应。其中的抗原称为凝集原，抗体称为凝集素。在该反应中，称为凝集原，抗体称为凝集素。在该反应中，因为单位体积抗体量大，做定量实验时，应因为单位体积抗体量大，做定量实验时，应稀释抗体。稀释抗体。n）直接凝集反应：）直接凝集反应：a.玻片凝集法；玻片凝集法；b.试管凝集法试管凝集法 n）间接凝集反应）间接凝集反应 第二节 微生物常规鉴定技术三、血清学试验三、血清学试验n、凝集反应（、凝集反应（Agglutination reaction）n、沉淀反应（、沉淀反应（Precipitation test）可溶性抗原与相应抗体结合，在有适量电解质可溶性抗原与相应抗体结合，在有适量电解质存在下，经过一定时间，形成肉眼可见的沉淀物，存在下，经过一定时间，形成肉眼可见的沉淀物，称为沉淀反应。反应中的抗原称为沉淀原，抗体为称为沉淀反应。反应中的抗原称为沉淀原，抗体为沉淀素。由于在单位体积内抗原量大，为了不使抗沉淀素。由于在单位体积内抗原量大，为了不使抗原过剩，故应稀释抗原，并以抗原的稀释度作为沉原过剩，故应稀释抗原，并以抗原的稀释度作为沉淀反应的效价。淀反应的效价。n）环状沉淀反应）环状沉淀反应 n）絮状沉淀反应）絮状沉淀反应n）琼脂扩散试验）琼脂扩散试验 第二节 微生物常规鉴定技术三、血清学试验三、血清学试验n、凝集反应（、凝集反应（Agglutination reaction）n、沉淀反应（、沉淀反应（Precipitation test）n、补体结合反应、补体结合反应(Complement fixation reaction)补体结合反应是在补体参与下，以绵羊红细胞和补体结合反应是在补体参与下，以绵羊红细胞和溶血素作为指示系统的抗原抗体反应。补体无特异性，溶血素作为指示系统的抗原抗体反应。补体无特异性，能与任何一组抗原抗体复合物结合而引起反应。如果能与任何一组抗原抗体复合物结合而引起反应。如果补体与绵羊红细胞、溶血素的复合物结合，就会出现补体与绵羊红细胞、溶血素的复合物结合，就会出现溶血现象溶血现象;如果与细菌及相应抗体复合物结合，就会如果与细菌及相应抗体复合物结合，就会出现溶菌现象。因此，如果出现溶菌，说明抗原抗体出现溶菌现象。因此，如果出现溶菌，说明抗原抗体是相对应的（试验结果阳性）；如果出现溶血，说明是相对应的（试验结果阳性）；如果出现溶血，说明抗原抗体不相对应（阴性）。抗原抗体不相对应（阴性）。n此反应操作复杂，敏感性高，特异性强，能测出少量此反应操作复杂，敏感性高，特异性强，能测出少量抗原和抗体，所以应用范围较广。抗原和抗体，所以应用范围较广。第二节 微生物常规鉴定技术三、血清学试验三、血清学试验n、凝集反应（、凝集反应（Agglutination reaction）n、沉淀反应（、沉淀反应（Precipitation test）n、补体结合反应、补体结合反应(Complement fixation reaction)n其它方法：其它方法：n荧光抗体技术荧光抗体技术nELISAn免疫组化免疫组化 。第三节 食品微生物检验新技术微生物检验新方法n n1 1 检查某些细菌的专有酶及代谢产物进行快速鉴定检查某些细菌的专有酶及代谢产物进行快速鉴定检查某些细菌的专有酶及代谢产物进行快速鉴定检查某些细菌的专有酶及代谢产物进行快速鉴定n n2 2 应用免疫学方法检测微生物抗原或抗体：应用免疫学方法检测微生物抗原或抗体：应用免疫学方法检测微生物抗原或抗体：应用免疫学方法检测微生物抗原或抗体：n n放射免疫分析放射免疫分析放射免疫分析放射免疫分析(RIA)(RIA)、酶免疫分析、酶免疫分析、酶免疫分析、酶免疫分析(EIA)(EIA)、荧光免疫分析、荧光免疫分析、荧光免疫分析、荧光免疫分析(FIA)(FIA)、化学发光免疫分析、化学发光免疫分析、化学发光免疫分析、化学发光免疫分析(CIA)(CIA)、生物发光免疫分析、生物发光免疫分析、生物发光免疫分析、生物发光免疫分析(BIA)(BIA)等等等等n n3 3 细菌毒素的快速检测细菌毒素的快速检测细菌毒素的快速检测细菌毒素的快速检测n n4 4 细菌对抗菌药物敏感性的快速检测细菌对抗菌药物敏感性的快速检测细菌对抗菌药物敏感性的快速检测细菌对抗菌药物敏感性的快速检测n n5 5 分子生物学技术在检测微生物中的应用分子生物学技术在检测微生物中的应用分子生物学技术在检测微生物中的应用分子生物学技术在检测微生物中的应用n n核酸探针、聚合酶链反应、基因芯片技术核酸探针、聚合酶链反应、基因芯片技术核酸探针、聚合酶链反应、基因芯片技术核酸探针、聚合酶链反应、基因芯片技术n n6 6 快速检测细菌生化反应及成套鉴定系统快速检测细菌生化反应及成套鉴定系统快速检测细菌生化反应及成套鉴定系统快速检测细菌生化反应及成套鉴定系统n n7 7 病原微生物的自动化系统：病原微生物的自动化系统：病原微生物的自动化系统：病原微生物的自动化系统：n n最有代表性的是最有代表性的是最有代表性的是最有代表性的是AMSAMS微生物自动分析系统微生物自动分析系统微生物自动分析系统微生物自动分析系统。n nAMS微生物自动分析系统微生物自动分析系统n n3M快速检验方法快速检验方法n n放射免疫分析放射免疫分析(RIA)n n酶免疫分析酶免疫分析(EIA)n n荧光免疫分析荧光免疫分析(FIA)n n化学发光免疫分析化学发光免疫分析(CIA)n n生物发光免疫分析生物发光免疫分析(BIA)微生物与免疫学方法微生物与免疫学方法分子生物学方法n n核酸探针核酸探针(Nuclear acid probe)n n聚合酶链反应聚合酶链反应(Polymerase chain reaction，PCR）n n核酸分子杂交技术核酸分子杂交技术n n基因芯片技术（基因芯片技术（microarray）n n16S rRNA 序列分析n nRAPD基因分型技术n n。一些参考文献：一些参考文献：n n食品微生物检验技术的研究进展食品微生