微生物标本采集.pptx

临床微生物标本规范化采集和送检中国专家共识中华预防医学会医院感染控制分会2017年1月0101微生物标本采集的基本原则微生物标本采集的基本原则020203030404目录目录微生物标本运送的基本原则微生物标本运送的基本原则微生物实验室对标本的拒收标准微生物实验室对标本的拒收标准微生物标本采集及注意事项微生物标本采集及注意事项一、微生物标本采集的基本原则一、微生物标本采集的基本原则1.在抗菌药物使用前采集标本。2.无菌部位的标本更具有临床价值，有菌部位采集的标本需要清除正常菌群和定植细菌才有意义。尤其是血培养。有菌部位标本应避免“正常菌群导致标本的污染”。3.标本的标签和申请单信息要完整。对于每一份标本，实验室都需要了解该患者和标本的详细信息以及医生的送检目的。4.严格无菌操作。应严格执行无菌操作，避免标本被污染。盛放标本的容器须经灭菌处理。采集无菌标本时应注意对局部及周围皮肤的消毒。如使用消毒液消毒皮肤，须作用一定时间，待其干燥后采样。二、生物标本运送的基本原则二、生物标本运送的基本原则1.所有标本采集后都应尽快送往实验室，多数标本应在2小时内送达。有些样本量小的标本应在采样后15-30分钟内送达。2.保证必要的运送条件：不同种类的标本因检测的目标致病微生物不同，对标本保存和运送的环境条件有不同的要求（详见附表）。对温度敏感的细菌如脑膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌和流感嗜血杆菌等应保温并立即送检。二、生物标本运送的基本原则二、生物标本运送的基本原则三、微生物实验室对标本的拒收标准三、微生物实验室对标本的拒收标准1.标本采集至实验室接收过程间隔过长，或无标本采集时间，或保存的温度不当。2.标本运送条件不正确：如厌氧培养标本却在有氧条件下送检。3.容器不规范：如容器有裂缝或被打破导致标本泄露、容器非无菌等。4.未贴标签或贴错标签：标本与检验目的不符合，如痰培养送检尿标本；患者信息与标本不符，如女性患者送检前列腺标本。5.标本明显被污染，如痰标本中混有食物残渣等。三、微生物实验室对标本的拒收标准三、微生物实验室对标本的拒收标准6.拭子上的标本已经干涸。7.标本不符合检验要求，如痰标本以唾液为主。8.标本使用了固定剂或防腐剂。9.标本量太少。10.一支拭子要求检验项目太多。11.24小时内重复送检的标本（血培养除外）。四、标本采集四、标本采集血培养血培养一、临床采样指征：1.菌血症：T:38或36，或寒战；WBC计数10.0109/L，中性粒增多，或者1天或者拔除导管38、寒颤或低血压等全身感染表现，不能除外由血管内导管引起感染可能的，应多次进行血培养检测。四、标本采集四、标本采集血培养血培养二、标本采集：1.菌血症：采血时机：寒战开始时，发热高峰前30-60min内；使用抗菌药物治疗前采集，如已用药，则在下一次用药之前采集最佳。采血部位：通常为肘静脉，切忌在静滴抗菌药物的静脉处采血。除非怀疑有导管相关的血流感染，应避免从留置静脉或动脉导管取血，因为导管常伴有定植菌存在。采血工具：真空血培养瓶，如培养瓶的储存温度为2-8，应先复温30min左右，平衡至室温再采血。同一部位双瓶采集时不建议更换针头。采血次数、血培养瓶选择：对于成人患者，应同时分别在两个部位采集血标本；每个部位应需氧和厌氧培养各一瓶。采血量：影响阳性率的重要因素，过少明显降低阳性率，5-10ml/瓶。皮肤、血培养瓶消毒：穿刺前皮肤和培养瓶口进行消毒并充分干燥。避免采血管内空气注入厌氧血培养瓶。四、标本采集四、标本采集血培养血培养二、标本采集：2.感染性心内膜炎建议在经验用药前30分钟内在不同部位采集2-3套外周静脉血培养标本。如果24小时内3套血培养标本均为阴性，建议再采集3套血培养标本送检。怀疑左心心内膜炎时，采集动脉血提高血培养阳性率。3.导管相关血流感染：分为保留导管和不保留导管两种情况。保留导管：分别从外周静脉和导管内各采取1套血培养标本，在培养瓶上标注采集部位，送往微生物实验室，同时进行上机培养。2套血培养检出同种细菌，且来自导管的血培养标本报阳时间比来自外周的血培养标本报阳时间早2小时以上，可诊断导管相关血流感染。不保留导管：在外周静脉采集2套血培养标本。同时，通过无菌操作剪取已拔出的导管尖端5cm，在血平板上交叉滚动4次进行送检。或采用超声震荡法留取菌液接种。从导管尖端和外周血培养培养出同种同源细菌，且导管尖端血平皿的菌落计数超过15CFU有意义。四、标本采集四、标本采集血培养血培养三、标签和申请单：1.每套血培养瓶上标签应有唯一标识号或条码，并注明标本采集时间和部位。2.如疑似感染性心内膜炎或疑似导管相关血流感染患者的标本，申请单除应包括患者基本信息外，一定要注明疑似诊断。四、标本运输：1.采集后立即送检，2h内送达实验室。不能及时送检应置室温暂存。禁止冰箱存放。2.运送的装置要足够安全，避免血培养瓶的运送过程中因碰撞发和破裂。四、标本采集四、标本采集咽拭子咽拭子(上呼吸道感染上呼吸道感染)一、临床采样指征：突发的咽痛、扁桃体肿大、颈部或颌下淋巴结肿痛，常伴有发热，通常没有咳嗽和明显的鼻溢。二、标本采集嘱病人张口发“啊”音，以暴露咽喉部，必要时用压舌板；取出咽拭子中的无菌长棉签，快速擦拭两侧腭弓和咽、扁桃体的分泌物，扁桃体有脓点时最好挤破脓点并采集脓性物；将棉签插入运送管，盖紧送检。四、标本采集四、标本采集咽拭子咽拭子(上呼吸道感染上呼吸道感染)三、标签和申请单 申请单除应包括患者基本信息外，注明患者的临床诊断、症状、是否使用了抗菌药物、检测目的，一定要注明标本采集时间。标本盒上的标签要求有唯一标识号或条码，注明标本采集时间、检测目的。四、标本运送咽拭子标本的运送宜采用带保湿功能的运送培养基，避免由于送检时间过长而干燥。如未采用运送培养基，应于半小时内送检。即使采用运送培养基，室温保存也不应超过24小时。四、标本采集四、标本采集痰标本痰标本(下呼吸道感染下呼吸道感染)一、临床采样指征 咳嗽、脓性痰，伴有发热，影像学检查出现新的或扩大的浸润影；气道开放患者，出现脓痰或血性痰；考虑下呼吸道感染患者采集痰液标本，同时送血培养标本。二、采集要求 细菌（肺炎链球菌、流感嗜血杆菌、卡他莫拉菌等）在室温环境下很容易自溶死亡，如不能在采集标本后2小时内接种将明显影响检出率。因此痰标本的采集时机十分关键，应严格遵循以下原则采集标本：争取首剂抗菌药物治疗使用前及更换抗菌药物前采集；标本采集后保证2小时内送达实验室并得到接种；只要有可能得到合格的痰标本，应马上采集、送检；宜在医护人员直视下留取合格痰标本；送检痰标本后三天内不主张再次送检，同一项目同一天不重复送检。四、标本采集四、标本采集痰标本痰标本(下呼吸道感染下呼吸道感染)三、标本采集 采集前准备无菌杯（螺口、有盖、密封）、清水。并向患者提供口头及书面采样指导，以保证患者充分理解口腔清洁、深咳、避免口咽部菌群污染的意义和方法。1.用清水漱口2-3次，有假牙者应先取下假牙；再用力咳嗽咳出深部痰液；2.将痰液咳入无菌杯内；3.盖好并拧紧杯盖，尽快送达实验室。四、标本采集四、标本采集痰标本痰标本(下呼吸道感染下呼吸道感染)四、标签及申请单 申请单除应包括患者基本信息外，注明患者的临床诊断、症状、是否使用了抗菌药物、检测目的，标识是普通培养、抗酸杆菌还是真菌培养。一定要注明标本采集时间。标本盒上的标签要求有唯一标识号或条码，注明痰标本采集时间和检测目的。五、标本运输1.标本采集后需尽快送到实验室，不能超过2小时。不及时运送可导致肺炎链球菌、流感嗜血杆菌等苛养菌由于不适应外界环境和自溶现象而死亡；2.不能及时送达或待处理标本应置于4冰箱保存（疑为肺炎链球菌和流感嗜血杆菌等苛养菌不在此列），以免杂菌生长。但不能超过24小时；四、标本采集四、标本采集支气管镜支气管镜-肺泡灌洗液（肺泡灌洗液（BALBAL）采集肺泡灌洗液进行检测，可减少口咽部菌群的污染，提高检测结果的准确性。须做定量或半定量接种培养。一、临床采样指征 对于疑似肺炎患者，如有机会进行气管镜检查，则可同时采集肺泡灌洗液进行培养。不能进行深部咳痰的患者，也可考虑通过气管镜获取标本。二、标本采集患者咽喉局部麻醉后，导入纤维支气管镜；通过纤维支气管镜对病灶所在支气管以下肺段或亚肺段水平，用37或室温无菌生理盐水多次灌洗，每次注入2060ml（常规进行45次），直到总共灌洗100300ml，并充分吸引回收，从回收液中取出10ml标本；放入无菌管中，旋紧盖子，即刻送达实验室。四、标本采集四、标本采集支气管镜支气管镜-肺泡灌洗液（肺泡灌洗液（BALBAL）三、标签及申请单 申请单除应包括患者基本信息外，注明患者的临床诊断、症状、是否使用了抗菌药物、检测目的，标识是普通培养、抗酸杆菌还是真菌培养。一定要注明标本种类为肺泡灌洗液，以及采集时间。无菌管上的标签要求有唯一标识号或条码，注明标本采集时间、检测目的。四、标本运输标本采集后需尽快送到实验室；不要冷藏标本。四、标本采集四、标本采集气道吸取标本气道吸取标本一、临床采样指征 有气管插管或气管切开等人工气道患者，无法自行咳痰，可通过吸痰管从气道吸取标本。二、标本采集 通过气管内插管将一次性无菌吸痰管推进呼吸道直至遇到阻力后开始抽吸，留取标本在吸痰杯内。四、标本采集四、标本采集气道吸取标本气道吸取标本三、标签及申请单 每个标本都应在申请单上详细填写患者姓名、病历号、采集日期时间、诊断、检验项目等。在标本上粘贴条码，条码中应包括患者姓名、病历号、采集时间等。标本标识要求有唯一标识号或条码。四、标本运输标本采集后需尽快送到实验室，不能超过2小时。不及时运送可导致肺炎链球菌、流感嗜血杆菌等苛养菌由于不适应外界环境和自溶现象而死亡；不能及时送达或待处理标本应置于4冰箱保存（疑为肺炎链球菌和流感嗜血杆菌等苛养菌不在此列），以免杂菌生长。但不能超过24小时；对可疑烈性呼吸道传染病（SARS、肺炭疽、肺鼠疫等）的患者标本，在采集、运送或保存过程中必须注意生物安全保护。四、标本采集四、标本采集胸水胸水一、临床采样指征：患者听诊、影像学检查发现胸腔积液，胸腔穿刺后发现胸腔积液浑浊、乳糜性、血性或脓性，考虑感染性胸腔积液(肺结核、肺炎、胸膜炎)患者应送检，进行涂片染色、细菌培养等细菌学检测。二、标本采集：尽可能在抗菌药物使用前采集。由临床医师经皮穿刺或外科方式获得；标本采集后可注入可直接注入血培养瓶送检，或将标本收集到带螺旋帽内无菌管送检，以便微生物室进行涂片检查。标本量分别为细菌培养1ml，真菌培养10ml，分枝杆菌培养10ml。不要拭子蘸取标本。如送检T-SPOT.TB，还需注意添加肝素抗凝。四、标本采集四、标本采集胸水胸水三、标签及申请单：申请单除应包括患者基本信息外，注明患者的临床诊断、症状、是否使用了抗菌药物、标本来源、检测目的，注明胸水的类型、性状，以及特殊检验需求。血培养瓶及无菌管要求有唯一标识号或条码。需标注患者基本信息、标本来源、标本采集时间、送检目的等。四、标本运输：标本采集后应立即送检，通常室温15分钟内应送至实验室，若不能及时送检，不可冷藏。室温保存不得超过24小时。四、标本采集四、标本采集尿标本尿标本一、临床采样指征：当患者出现尿频、尿急、尿痛、血尿、肾区疼痛等症状，同时可能伴有寒战、高热、白细胞计数升高，怀疑存在泌尿系感染时；尿常规结果提示泌尿系感染时；无症状的患者不建议常规进行尿培养检测；留置导尿管患者出现发热时。四、标本采集四、标本采集尿标本尿标本二、标本采集：1.清洁中段尿：尽可能在未使用抗菌药物前送检，晨尿最佳。采集方法如下：A.A.女性：女性：分开两腿；用肥皂水清洗尿道口部位，或用碘酒、碘伏消毒尿道口；手持采样杯外侧，避免接触杯口边缘。先将少量尿液排入厕所，然后用采样杯采集半杯尿液；将盖子盖好、旋紧；检查杯盖是否密封，避免溢洒。B.B.男性：男性：缩回包皮充分暴露龟头；用肥皂清洗尿道口；手持采样杯外侧，避免接触杯口边缘。先将少量尿液排入厕所，然后用采样杯采集半杯尿液；将盖子盖好、旋紧；检查杯盖是否密封，避免溢洒。四、标本采集四、标本采集尿标本尿标本2.2.导尿管采集尿液：导尿管采集尿液：从导尿管近端侧壁采集标本，禁止从集尿袋中采集夹闭导尿管不超过30分钟；用酒精棉球消毒清洁导管近端采样部位周围外壁；将注射器针头穿刺进入导管腔，抽吸出尿液；收集的尿液置于无菌尿杯或试管中；检查杯盖是否密封，避免洒溢。3.3.耻骨上膀胱穿刺：耻骨上膀胱穿刺：进行厌氧菌培养或儿童及其他无法配合获得清洁标本时消毒脐部至尿道之间区域的皮肤；对穿刺部位进行局麻；在耻骨联合和脐部中线部位将针头插入充盈的膀胱；用无菌注射器从膀胱吸取尿液；无菌操作将尿液转入无菌螺口杯，尽快送至实验室培养。四、标本采集四、标本采集尿标本尿标本三、标签及申请单 申请单除应包括患者基本信息外，一定注明患者的临床诊断、症状、是否使用了抗菌药物、标本留取方式和采集时间。尿杯上的标签要求有唯一标识号或条码，注明标本种类和采集时间，此信息尤其重要。四、标本运输尿标本采集后应立即送检。如不能在采集30分钟内进行培养，应放入4冰箱保存，但也不能超过24小时。四、标本采集四、标本采集粪便标本粪便标本一、临床采样指征：当患者出现腹痛、腹泻（水样便、脓血便），或伴有发热；粪便常规镜检异常，建议采集粪便标本，进行细菌培养。二、标本采集与要求 标本的采集尽可能在应用抗菌药物治疗前，标本应收集在宽口便盒内，并加盖密封。如考虑空肠弯曲菌需要无血弯曲菌琼脂培养基。艰难梭状杆菌需在厌氧环境中生存，建议在床旁进行标本的采集及接种。接种后的标本立即放入厌氧袋内，送至实验室。重复采集标本，可提高阳性检出率。四、标本采集四、标本采集粪便标本粪便标本二、标本采集与要求1.1.自然排便法自然排便法患者在干燥清洁便盆（避免使用坐式或蹲式马桶）内自然排便后，挑取有脓血、黏液部分的粪便2-3g（液体粪便则取絮状物1-3ml）放入无菌便盒内送检。若无黏液、脓血，则在粪便上多点采集送检。2.2.直肠拭子法直肠拭子法（排便困难的患者或婴幼儿）用肥皂水将肛门周围洗净，将占有无菌生理盐水的棉拭子插入肛门4-5cm（儿童为2-3cm）。棉拭子与直肠粘膜表面接触，轻轻旋转拭子，可明显在拭子上见到粪便。将带有粪便标本的棉拭子插入运送培养基，立即送检。四、标本采集四、标本采集粪便标本粪便标本三、标签及申请单申请单上应包括患者姓名、病历号、采集日期时间、诊断、相关旅行史等。标本标识要求有唯一标识号或条码。标本上的标签中应包括患者姓名、病历号、采集时间等。送检的新鲜标本应报告粪便的性状，标本表面或标本里面存在血液也应注明。四、标本运输粪便标本应尽快送检，室温下运送标本时间不超过2小时。不能及时送检，可加入pH7.0磷酸盐甘油缓冲保存液或使用Cary-Blair运送培养基置于4冰箱保存，保存时间不超过24小时。直肠拭子采集的标本必须置入Cary-Blair运送培养基或GN肉汤中送检。室温下运送时间不应超过2小时，4冰箱保存不超过24小时。高度怀疑霍乱弧菌感染的标本需专人运送，必须符合特殊标本的安全要求。谢谢聆听