微生物学试验.pptx

微生物学实验微生物学实验实验一实验一 微生物实验规则与安全、无菌概微生物实验规则与安全、无菌概 念及无菌操作技术的介绍念及无菌操作技术的介绍实验二实验二 培养基的制备培养基的制备 实验三实验三 消毒与灭菌消毒与灭菌一一.微生物实验规则与安全微生物实验规则与安全轻松的心态，认真的实验态度轻松的心态，认真的实验态度微生物实验的特殊性微生物实验的特殊性 -把所有的微生物都看成是具有潜在致病性把所有的微生物都看成是具有潜在致病性充分预习充分预习 -了解实验目的、原理和方法，实验中要思路清楚了解实验目的、原理和方法，实验中要思路清楚实验记录实验记录 -观察的结果或现象，分析观察的结果或现象，分析实验报告实验报告1.1.实验目的和原理实验目的和原理2.2.实验材料实验材料3.3.实验方法或步骤实验方法或步骤4.4.实验结果或绘图实验结果或绘图5.5.思考题思考题实验操作应严格按操作规程进行实验操作应严格按操作规程进行l有机溶液或溶剂不要接触火源，如乙醚或丙酮等有机溶液或溶剂不要接触火源，如乙醚或丙酮等 （酒精（酒精灯的使用）灯的使用）l使用一些贵重仪器：显微镜，灭菌锅、电泳装置、凝胶成使用一些贵重仪器：显微镜，灭菌锅、电泳装置、凝胶成像仪等，要细心操作，特别爱护像仪等，要细心操作，特别爱护l称量药品时严禁药匙交叉使用，也严禁取出的药品又倒回称量药品时严禁药匙交叉使用，也严禁取出的药品又倒回药瓶中，造成污染药瓶中，造成污染l嘴吸取试剂或菌液？遇有盛菌的试管或试剂瓶打破要及时嘴吸取试剂或菌液？遇有盛菌的试管或试剂瓶打破要及时报告报告 二二.无菌概念及无菌操作技术无菌概念及无菌操作技术无菌概念无菌概念 -实际上只是一种习惯用语，因为实验，科研，或生实际上只是一种习惯用语，因为实验，科研，或生产实践中使用的微生物必须是单一的纯种或菌株，也就是除产实践中使用的微生物必须是单一的纯种或菌株，也就是除实验用菌外，无其他实验用菌外，无其他杂菌的污染杂菌的污染。介绍器具的使用：介绍器具的使用：-标记，接种环，培养皿，涂布棒，接种等，超净台的标记，接种环，培养皿，涂布棒，接种等，超净台的使用，培养皿的倒置，斜面的形成使用，培养皿的倒置，斜面的形成组号日期菌名ABCD实验二实验二 培养基的制备培养基的制备 一、实验目的一、实验目的 了解培养基的配制原理；掌握配制培养基的一般方法和步骤了解培养基的配制原理；掌握配制培养基的一般方法和步骤 二、实验原理二、实验原理 培养基培养基是人工按一定比例配制的供微生物生长繁殖和合成代是人工按一定比例配制的供微生物生长繁殖和合成代谢产物所需要的营养物质的混合物。谢产物所需要的营养物质的混合物。原材料原材料可分为碳源、氮源、无机盐、生长因素和水。根据微可分为碳源、氮源、无机盐、生长因素和水。根据微生物的种类和实验目的不同，培养基也有不同的种类和配制生物的种类和实验目的不同，培养基也有不同的种类和配制方法。方法。-目前可培养微生物仅占微生物总量的目前可培养微生物仅占微生物总量的1%1%左右左右牛肉膏蛋白胨培养基牛肉膏蛋白胨培养基：一种应用最广泛和最普一种应用最广泛和最普通的通的细菌细菌基础培养基，有时又称为普通培养基。基础培养基，有时又称为普通培养基。高氏高氏I号培养基（号培养基（Gause I）：培养和观察培养和观察放线放线菌菌形态和特征的合成培养基。形态和特征的合成培养基。马铃薯培养基（马铃薯培养基（PDA）：培养基是分离培养基是分离真菌和真菌和细菌细菌的常用培养基。的常用培养基。用于培养用于培养霉菌霉菌的加入蔗糖，用的加入蔗糖，用于培养于培养酵母菌酵母菌的加入葡萄糖。的加入葡萄糖。2216E培养基培养基：分离分离海洋微生物海洋微生物的培养基配方的培养基配方 蛋白胨蛋白胨 5克克 酵母膏酵母膏 1克克 磷酸高铁磷酸高铁 0.01克克 琼脂琼脂 15-20克克（固体培养基）（固体培养基）陈海水陈海水 1000毫升毫升（已过滤）（已过滤）煮沸氢氧化纳（煮沸氢氧化纳（5%）的溶液调）的溶液调PH值值7.67.8 LB:(溶菌肉汤，溶菌肉汤，lysogeny broth）：）：培养的菌种一般是经过改造的无法在外界环境单独存活和扩增的培养的菌种一般是经过改造的无法在外界环境单独存活和扩增的工程菌。通过培养工程菌。通过培养工程菌工程菌，我们可以表达大量的外源蛋白，也可，我们可以表达大量的外源蛋白，也可以拿到带有外源基因的质粒。以拿到带有外源基因的质粒。胰蛋白胨胰蛋白胨(Tryptone)10g/L 酵母提取物酵母提取物(Yeast extract)5g/L 氯化钠氯化钠(NaCl)5g/L 补水至补水至1000ml根据经验值用根据经验值用NaOH调节该培养基的调节该培养基的pH-7.4(该该pH适合目前适合目前使用最广的原核表达菌种使用最广的原核表达菌种E.coli的生长的生长)三、注意事项三、注意事项调调pH:1mol/L NaOH，1mol/L HCl 避免回调避免回调-影响培养基内各离子的浓度影响培养基内各离子的浓度定容定容分装：分装：液体液体-试管试管(管高）管高）1/41/4，三角瓶（容积）三角瓶（容积）1/21/2 固体固体-试管（斜面）试管（斜面）1/51/5，三角瓶，三角瓶1/21/2 半固体半固体-试管试管1/31/3 Gause I:淀粉淀粉先用冷水调成糊状后先用冷水调成糊状后加入沸水中使之完全溶解，加入沸水中使之完全溶解，然后然后按配方顺序依次溶解各成分按配方顺序依次溶解各成分（磷酸盐和镁盐混合易产生（磷酸盐和镁盐混合易产生沉淀）。沉淀）。PDA:用土豆应用土豆应去皮切小块去皮切小块，避免带入杂质，产生泡沫，影，避免带入杂质，产生泡沫，影响通气。响通气。灭菌：灭菌：含糖培养基用含糖培养基用0.06MPa，112，15min或将其他成或将其他成分先行灭菌分先行灭菌0.1MPa，121，20min 实验三实验三 消毒与灭菌消毒与灭菌消毒消毒-指消灭病原菌和有害微生物的营养体，指消灭病原菌和有害微生物的营养体，但不一定能杀死细菌芽孢的方法但不一定能杀死细菌芽孢的方法灭菌灭菌-指消灭一切微生物的营养体，包括芽孢指消灭一切微生物的营养体，包括芽孢和孢子。和孢子。灭菌的类型灭菌的类型干热灭菌：干热灭菌：利用高温使微生物细胞内的蛋白质凝利用高温使微生物细胞内的蛋白质凝固变性而达到灭菌。固变性而达到灭菌。160170 ，12h高压蒸汽灭菌：高压蒸汽灭菌：增加锅内压力，使沸点增高，高增加锅内压力，使沸点增高，高于于100 100 ，导致细胞内的蛋白质凝固变性而达到灭，导致细胞内的蛋白质凝固变性而达到灭菌菌 蛋白质含水量增加蛋白质含水量增加 湿热穿透力大湿热穿透力大 蒸汽有潜热蒸汽有潜热紫外线灭菌：紫外线灭菌：波长波长200300nm，Thymine dimer（胸腺嘧啶二聚体，（胸腺嘧啶二聚体，TDdimer），），O2-O3 紫外线对细菌、病毒的杀菌作用一般在一秒内完紫外线对细菌、病毒的杀菌作用一般在一秒内完成，而对臭氧方法来说，要达到紫外线的效果一般成，而对臭氧方法来说，要达到紫外线的效果一般需要需要 20分钟至一小时的时间分钟至一小时的时间 过滤除菌：过滤除菌：微孔滤膜过滤器微孔滤膜过滤器 -孔径孔径0.22um除大部分细菌除大部分细菌