微生物实验实验一培养基的配制和灭菌法.pptx

微生物学实验微生物学实验本学期本学期本学期本学期农业微生物学农业微生物学农业微生物学农业微生物学实验课共开设实验课共开设实验课共开设实验课共开设6 6 6 6个实验个实验个实验个实验项目。项目。项目。项目。p 培养基的配制及培养基的配制及培养基的配制及培养基的配制及灭灭菌法；菌法；菌法；菌法；pp 微生物微生物微生物微生物测测数技数技数技数技术术；pp 微生物菌落形微生物菌落形微生物菌落形微生物菌落形态观态观察、察、察、察、纯纯种分离及接种技种分离及接种技种分离及接种技种分离及接种技术术；pp 细细菌的染色技菌的染色技菌的染色技菌的染色技术术及基本形及基本形及基本形及基本形态态、特殊构造、特殊构造、特殊构造、特殊构造观观察；察；察；察；pp 放放放放线线菌、霉菌形菌、霉菌形菌、霉菌形菌、霉菌形态观态观察；察；察；察；pp 化学化学化学化学药剂对药剂对微生物的作用及拮抗微生物的微生物的作用及拮抗微生物的微生物的作用及拮抗微生物的微生物的作用及拮抗微生物的筛选筛选。实验课课程安排实验课课程安排 一个连续的大实验一个连续的大实验“环境微生物分离、纯化、观察及功能检测环境微生物分离、纯化、观察及功能检测”实验课考核办法实验课考核办法 实验成绩实验成绩（占课程总成绩（占课程总成绩30%30%）平时成绩平时成绩技能考核：技能考核：操作考试操作考试实验报告实验报告:按时交。按时交。操作：操作：实验室室规则和要求和要求实验一实验一 培养基的配制和灭菌法培养基的配制和灭菌法 培养基培养基：按照微生物生长发育的需求，将不同组合的营养物按照微生物生长发育的需求，将不同组合的营养物质调制成的营养基质质调制成的营养基质。一、实验原理一、实验原理营养成分营养成分n 水分水分n 碳源碳源n 氮源氮源n 无机盐无机盐n 生长因子生长因子 不同微生物的生长对于培养基有不同的要求不同微生物的生长对于培养基有不同的要求（细菌、放线菌：（细菌、放线菌：pHpH值中性至偏碱性；真菌喜好酸性）值中性至偏碱性；真菌喜好酸性）n 天然培养基天然培养基:用生物的组织、器官以及提取物配制用生物的组织、器官以及提取物配制成的培养基。成的培养基。通常其化学成分难以确切知道。通常其化学成分难以确切知道。n 合成培养基合成培养基：用成分和数量已知的化学试剂配制而成。用成分和数量已知的化学试剂配制而成。成成分明确，重复性好。分明确，重复性好。n 半合成培养基半合成培养基:部分天然材料和部分纯化学试剂配制而成。部分天然材料和部分纯化学试剂配制而成。培养基的种类培养基的种类 1.1.按照培养基成分不同分为：按照培养基成分不同分为：培养基的种类培养基的种类2.按照培养基形态的不同分为：按照培养基形态的不同分为：n 液体培养基液体培养基：将配方中的成分溶解而成，不含凝固剂。n 固体培养基：固体培养基：加入琼脂凝固剂加入琼脂凝固剂1%-2%.n 半固体培养基：半固体培养基：加入琼脂凝固剂0.2%-0.5%。培养基凝固剂培养基凝固剂琼脂琼脂：常用常用；海藻多糖，不易被分解利用；透明度海藻多糖，不易被分解利用；透明度 好；凝固点：好；凝固点：4545 ，溶解点：，溶解点：96 96；明胶明胶;易被分解，融化温度低，不耐高温灭菌易被分解，融化温度低，不耐高温灭菌硅胶：硅胶：n 基础培养基基础培养基:n 选择培养基选择培养基：n 加富培养基加富培养基n 鉴别培养基鉴别培养基 培养基的种类培养基的种类 3.按照培养基用途不同分为：按照培养基用途不同分为：培养基配制流程培养基配制流程 原料称量原料称量加热溶解、搅拌加热溶解、搅拌定容定容调节调节pHpH值值过滤澄清过滤澄清分装分装塞棉塞和包扎、注明培养基名称、班级、塞棉塞和包扎、注明培养基名称、班级、组组高压蒸汽灭菌高压蒸汽灭菌冷藏、待用冷藏、待用（配制（配制1000mL用量）用量）牛肉膏牛肉膏 3.0g3.0g蛋白胨蛋白胨 10.0g10.0gNaCl NaCl 5.0g5.0g琼脂琼脂 101015g15g水水 1000mL1000mLpHpH 7.27.27.47.4（配制（配制1000mL用量）用量）可溶性淀粉可溶性淀粉 20g20gKNOKNO3 3 1.0g1.0gNaCl NaCl 0.5g0.5gK K2 2HPOHPO4 4 0.5g0.5gMgSOMgSO4 47H7H2 2O O 0.5g0.5gFeSOFeSO4 47H7H2 2O O 0.01g0.01g琼脂琼脂 101015g15g水水 1000mL1000mLpHpH 7.47.47.67.6 牛肉膏蛋白胨培养基牛肉膏蛋白胨培养基高氏高氏1 1号培养基号培养基马丁氏培养基马丁氏培养基（配制（配制1000mL用量）用量）葡萄糖葡萄糖 10g10g蛋白胨蛋白胨 5.0g5.0gKHKH2 2POPO4 4 1.0g1.0gMgSOMgSO4 47H7H2 2O O 0.5g0.5g孟加拉红孟加拉红（1/3001/300)1010mL琼脂琼脂 101015g15g水水 1000mL1000mLpH pH 自然自然马丁氏培养基马丁氏培养基培养基配方培养基配方二、实验内容二、实验内容1以小组为单位，分别配制以小组为单位，分别配制牛肉膏蛋白胨培养基牛肉膏蛋白胨培养基（第一组、第（第一组、第四组）、四组）、高氏一号培养基高氏一号培养基（第二组）、（第二组）、马丁氏培养基马丁氏培养基（第三（第三组）各组）各400mL400mL。234每组制备无菌水：每组制备无菌水：1 1个个90mL 90mL 三角瓶无菌水、三角瓶无菌水、6 6只只9mL9mL试管无试管无菌水。菌水。每人包每人包1mL移液管一支。移液管一支。学习灭菌、消毒方法；操作高压蒸汽灭菌。学习灭菌、消毒方法；操作高压蒸汽灭菌。灭菌和消毒技术（灭菌和消毒技术（P16)P16)灭菌：灭菌：用物理或化学的方法杀死物体上全部微生物的过程。用物理或化学的方法杀死物体上全部微生物的过程。消毒消毒：用物理或化学的方法杀死物体上大部分微生物用物理或化学的方法杀死物体上大部分微生物(特别是特别是 病原微生物病原微生物)，尚存少数无害微生物，尚存少数无害微生物。灭菌（消毒）技术灭菌（消毒）技术过滤除菌过滤除菌辐射杀菌辐射杀菌高温灭菌高温灭菌化学药剂灭菌化学药剂灭菌常用灭菌方法常用灭菌方法干热灭菌干热灭菌时间：时间：1-21-2小时小时温度：温度：160-170160-170压力：压力：常压常压仪器：仪器：电烘箱电烘箱高压蒸汽灭高压蒸汽灭菌菌时间：时间：15-3015-30分钟分钟温度：温度：121121压力压力:0.1MPa(1.05kg/cm0.1MPa(1.05kg/cm2 2)仪器：仪器：高压蒸汽灭菌锅高压蒸汽灭菌锅巴氏消毒法巴氏消毒法时间：时间：15-3015-30分钟分钟 温度：温度：60-85 60-85 压力：压力：常压常压仪器：仪器：蒸锅蒸锅 实验作业：实验作业：微生物实验报告册微生物实验报告册P2P2：1-31-3