微生物染色.pptx

微 生 物 染 色染色的意义微生物细胞小而透明，在普通光学显微镜下不易观察。染色后微生物细胞与背景形成明显的色差，从而能清楚的观察到其形态；用于鉴别猪链球菌染色照片染色染料简介主要有三大类：碱性染料、酸性染料、中性染料。碱性染料的离子带正电荷，可与带负电荷的物质结合。微生物蛋白质常带负电荷，故碱性染料常用。常用碱性染料有：美蓝、结晶紫、碱性复红和孔雀绿。染色染料简介酸性染料的离子带负电荷，能与带正电荷的物质结合。中性染料是碱性染料和酸性染料的结合物，故又称复合染料。染色方法普通染色法：利用一种染料使微生物着色革兰氏染色：细菌学中的鉴别性染色法芽孢染色法：区分芽孢和营养体的不同菌仪实验材料种：大肠杆菌和四联球菌混合液，杀螟杆菌染色液：石炭酸复红液，结晶紫液，路哥尔碘液，芽孢染色液器：显微镜，载玻片，接种环，二甲苯，香柏油，擦镜纸，吸水纸，煤气灯实验步骤1.涂片 烧红无菌环，稍冷后无菌操作取试管中菌液于洁净的玻片中央，涂成薄层。如为固体培养基上的菌种，先在洁净的玻片中央放一滴蒸馏水，无菌操作取少许菌体与水滴混合，涂成薄层。干燥 室温中自然干燥，或在火焰高处烘干，但不能过烫，以手试不烫为宜固定 手执玻片一端，有菌膜的一面朝上，于火焰中通过3次。冷却后再加染料。普通染色法（1）4.染色 将玻片放平，在其上加适量（以盖满菌膜为度）结晶紫染色液（或石炭酸复红染色液），染色约一分钟。5.水洗 染色时间到后，用水冲去染料只流下的水无色为止。6.干燥 自然干燥或用吸水纸吸去水分。普通染色法（2）7.镜检 用油镜观察所制标本片并绘出其形态图革兰氏染色（1）初染：加草酸铵结晶紫染色液，染色，约一分钟后自来水小心冲洗。媒染：加路哥尔碘液，约一分钟水洗脱色：95%乙醇脱色20秒水洗复染：石炭酸复红染色液染色30秒水洗革兰氏染色（2）干燥 自然干燥或用吸水纸吸去水分。镜检 用油镜观察所制标本片并绘出其形态图。判断革兰氏染色反应。芽孢染色（1）染色 加5%孔雀绿水溶液于玻片上，微火加热至冒气，维持约5min，（期间需添加染色液，火焰要小。）冷却后水洗。用石炭酸复红染30秒水洗。干燥 自然干燥或用吸水纸吸去水分。芽孢染色（2）镜检 用油镜观察所制标本片并绘出其形态图。注意芽孢和营养体各自的颜色注意事项1.涂片的无菌操作；2.火焰烘干及固定时的温度控制；3.染色时间的掌握；4.水洗时水流不能急，不能冲有菌的一面；5.吸水时勿擦去菌体；6.革兰氏染色特别注意乙醇脱色时间的掌握，且勿使染色液干涸；7.芽孢染色加热要用微火，且要添加染色液。思考题1.芽孢染色加孔雀绿时为什麽要加热？2.如何判断视野中的景象是否确系标本？