液相数据处理.pptx

1 11Shimadzu International Trading(Shanghai)Co.Limited岛津液相色谱培训岛津液相色谱培训-定量基础知识定量基础知识岛津国际贸易（上海）有限公司岛津国际贸易（上海）有限公司分析中心分析中心2 22Shimadzu International Trading(Shanghai)Co.Limited定量分析基本公式Ci=fi AiCi=fi Hi被测组分的浓度与检测器的响应值，在某些条件限定下成正比的关系。Ci：组分浓度,fi :响应因子，与组分的物理化学性质和检测器的性质有关Ai：组分响应面积Hi：组分响应高度实际修饰公式：实际修饰公式：Y=aX+bY=aX+b3 33Shimadzu International Trading(Shanghai)Co.Limited定量分析的基本要求需要有纯物质作标准被定量组分峰要与其它峰达到基线分离符合定性参数要求选择合适的定量方法4 44Shimadzu International Trading(Shanghai)Co.Limited定性方法色谱峰的定性鉴别F 通过保留值(通常是保留时间)进行定性F 需要指定保留时间误差范围（时间窗、时间带）在相同的分析条件下F 保留时间相同并不肯定是同样的组份F 保留时间不同肯定不是同样的组份5 55Shimadzu International Trading(Shanghai)Co.Limited定性确证F仅仅通过保留时间并不能完全确证该物质 通过加入标准物确认通过改变色谱条件确认光谱和质谱信息也可以作为进一步确证手段其他仪器方法确证6 66Shimadzu International Trading(Shanghai)Co.Limited定量方法面积归一化外标法内标法标准加入法7 77Shimadzu International Trading(Shanghai)Co.Limited面积归一化法公式：公式：特点：1）无需做校正，简便，快速2）进样量不严格要求3）所有组分都流出并且被检测到4）所有组分的响应因子都相同不能作为准确定量的方法，仅在特定情况下使用8 88Shimadzu International Trading(Shanghai)Co.Limited外标法浓度C1C4C3C2浓度面积A1A2A3A4C1C2C3C4A1A2A3A4峰面积标准曲线标准曲线9 99Shimadzu International Trading(Shanghai)Co.Limited 外标法特点特点：1）不需所有峰都流出或被检测到2）需要标准样品3）进样量必须准确4）仪器必须有良好的稳定性5）只对所测组分作校正是实验室最常用的定量方法，定量结果准确101010Shimadzu International Trading(Shanghai)Co.Limited内标法目标C1C4C3C2浓度面积A1A2A3A4C1/CISC2/CISC3/CISC4/CISA1/AISA2/AISA3/AISA4/AIS浓度比:目标/内标面积比:目标/内标Calibration curveCalibration curve内标CISCISCISCISAISAISAISAIS111111Shimadzu International Trading(Shanghai)Co.Limited内标法特点特点：1）进样量不严格要求2）只对所测组分作校正3）必须在样品中加一内标组分4）操作较为繁琐5）选择内标物比较困难多用在国际标准和规定比较严格的方法中121212Shimadzu International Trading(Shanghai)Co.Limited选择内标物应注意理化性质与待测物相近色谱响应与待测物相近与待测物有良好的分离，但不能相距太远与待测物的峰面积比为0.7-1.3最好，因此要根据待测物的浓度确定内标物的添加量131313Shimadzu International Trading(Shanghai)Co.LimitedIntegration parameters：积分参数，规定计算出峰面积的方法。Channel：通道，指检测波长或选定要定量计算的波长Quantification method：定量方法，选择定量方法(外标法,内标法等)Curve fit Type：曲线拟合类型，包括线性、二次方程等Compound table：化合物表，定义要进行定量计算的组分，其中 包括定性和定量参数。定量计算常用术语FType：组分类型，指组分的分析类别Target：要计算的目标组分ISTD：指该组分为添加的内标组分Reference：指该组分为参比组分，用来对目标组分进行确认ISTD&Ref.：指该组分既是内标组分，又是参比组分FConc.：浓度，指目标组分的计算结果141414Shimadzu International Trading(Shanghai)Co.Limited定量计算常用术语Sample Type：样品类型，规定该数据的计算类别FStandard：标样，浓度已知的标准品，用来制作标准曲线FUnknown：未知样，浓度待测的目标组分，Sample Amt.：样品量，待测样品的原始称样量，在计算结果中会除以该数值Dil.Factor：稀释因子,待测样品的稀释倍数，在计算结果中会乘以该数值ISTD Amt.：内标量，内标组分的添加量Level：样品浓度水平，规定数据的浓度级别，Unknown为，Standard为整数，浓度由低到高依次为1、2、3、4、5 151515Shimadzu International Trading(Shanghai)Co.Limited数据处理参数积分参数：（Width,Slope,Drift,T.DBL等）定性参数：保留时间及允许误差（时间窗，时间带）定量参数：F F定量方法：外标法、内标法、面积归一法等F曲线点数：一点或多点F曲线拟合：线性、折线、曲线161616Shimadzu International Trading(Shanghai)Co.Limited峰面积处理参数171717Shimadzu International Trading(Shanghai)Co.Limited峰面积处理参数181818Shimadzu International Trading(Shanghai)Co.Limited基本积分参数 Width：半峰宽，峰的半高宽，排除峰宽小于最小峰宽的峰 Slope：斜率，用来判断出峰起点、终点以及滤除低平噪声 Drift：漂移，判断相邻峰的积分方式F设定值为0时，积分仪将自动判断F如Drift与基线至峰谷连线较接近时，积分面积值可能变化较大 T.DBL：时间变参，根据时间自动改变峰宽和斜率 Minimum area：最小峰面积，排除面积小于该值的峰191919Shimadzu International Trading(Shanghai)Co.LimitedSlope的设定Slope峰斜率，积分不稳定，须手动设定SlopeSlope峰斜率，作为噪声滤除SlopeSlopeSlope212121Shimadzu International Trading(Shanghai)Co.LimitedDrift值的设定(自动校正)谷宽半峰高宽度T2半峰高宽度T2T1222222Shimadzu International Trading(Shanghai)Co.Limited.DBL的设定T.DBL：时间变参，根据时间自动改变峰宽和斜率F等度洗脱时，出峰时间越长，峰越宽F设定值为0时，根据宽度自动判断F默认值为1000，此时该参数不起作用在实际使用中，一般使用默认设定232323Shimadzu International Trading(Shanghai)Co.LimitedIntegration Off to On：锁定某一时间范围的峰，使之不计算积分积分锁定Integration Off to On242424Shimadzu International Trading(Shanghai)Co.Limited拖尾处理Tailing On to Off：强制执行拖尾处理252525Shimadzu International Trading(Shanghai)Co.Limited方法认证准确度精确度重复性中间重复性重现性检出限检测限线性范围 回收率范围稳定性评价方法的典型参数评价方法的典型参数262626Shimadzu International Trading(Shanghai)Co.Limited影响定量结果的因素保留时间的重现性（对GPC影响很大）样品问题（杂质、溶剂、稳定性、配制）进样问题（准确度和精密度）检测器的性能（影响线性、检出限、灵敏度）方法的可靠性积分参数的设定272727Shimadzu International Trading(Shanghai)Co.Limited表征色谱柱性能的参数容量因子 理论塔板数理论塔板高度分离度拖尾因子282828Shimadzu International Trading(Shanghai)Co.Limited容量因子,kt1 =组分峰的保留时间t0=死时间(非保留时间)t0t1k=t0 t1-t0292929Shimadzu International Trading(Shanghai)Co.Limited理论塔板数,N中国/日本药典:N=5.54 x(Rt/W 1/2)2美国药典:N=16 x(Rt/W)2WW1/2H1/2HRtArea303030Shimadzu International Trading(Shanghai)Co.Limited理论塔板高度,HH=L/NL：色谱柱长N：理论塔板数313131Shimadzu International Trading(Shanghai)Co.Limited分离度,Resolution相邻两峰完全分离其分离度 Rs1.5.323232Shimadzu International Trading(Shanghai)Co.Limited完全分离时的分离度 Rs=1.0Rs=1.5峰形不是三角形峰形不是三角形 ，而是高斯分布，而是高斯分布333333Shimadzu International Trading(Shanghai)Co.Limited拖尾因子，TT=W0.05/2d0.05 W0.05：5峰高处峰宽d0.05：5峰高处的前半峰宽d0.05W0.05H0.05H