顶空固相微萃取—气相色谱法测定环境中挥发性有机物.pdf

中国公 共卫 生 2 0 0 2年 第 1 8卷第 8期 C HI NA PU B LI C HEA LTH Vo 1 1 8 No 8 Au g2 0 0 2 9 7 9 文章编号：1 0 0 1 0 5 8 0(2 0 0 2)0 8 0 9 7 9 0 3 【检验技术】顶 空 固相 微萃 取 一气 相 色 谱 法测 定 环境 中挥发 性 有机 物 四川大 学 华西公 共 卫生 学 院卫 生检 验教 研 室(成 都 6 1 0 0 4 1)刘红 河 黎源 倚 摘要：目的 建 立 顶 空 固相 微萃 取 一气 相色 谱 法 同 时测 定 环境 样 品 中苯 系物、氯 代 甲烷 类等 挥 发性 有 机 物 的方 法。方 法采 用 未涂 任 何 固定液 的光 纤 作为 萃取 头，自行 制 作 的 固相 微 萃 取 S P ME装 置，通 过顶 空 固相 微 萃 取 气 相 色 谱 法(HSS P MEGC)测定氯代 甲烷和苯 系物。并对测定的萃取条件和色谱条件进行了优化。结果 方法的线性范 围 为二 氯 甲烷 0 1 4 7 5 7 g L、三氯 甲烷 0 2 4 8 4 5 g L、四氯 化碳 0 4 5 1 3 7 1“g L、苯 0 0 3 1 2 6 t g L、甲苯 0 1 0 -2 4 8 g L、乙 苯 0 0 6 2 4 7 z g L、二 甲 苯 0 1 3 2 4 8 t t g L，相 关 系 数 为 0 9 9 1 5 0 9 9 7 9；检 出 限 为 二 氯 甲 烷 0 1 4 t g L、三 氯 甲烷 0 2 4 t g L、四氯 化碳 0 4 5 t g L、苯 0 0 3 t g L、甲苯 0 1 0 t g L、乙苯 0 0 6 t g L、二 甲苯 0 1 3 t g L；样 品加 标 回收 率为 8 0 0 1 1 1 6，相 对 标准 偏差 为 4 4 8 1 。结 论该 法 简 便、快 速、灵 敏 度 高、重 现 性 好、分 析成 本 低。关 键词：固相 微 萃取；气 相色谱 法；顶 空分 析；苯 系 物；氯 代 甲烷 中图分 类 号：Rl 1 5 文献 标 识 码：A Det e r m i nat i on of Vol at i l e s i n En vi r o nme nt Us i ng S ol i d Ph a s e M i c r o e xt r ac t i on a nd Ga s Ch r o mat o gr aphy L儿 Ho n g-he LI Yu a n q i a n De p a r t me n t o f S a n i t a r y T e c h n o l o g y，We s t Ch i n a S c h o o l of Pu b l i c He a l t h，S i c h u an Un i v e r s i t y(C h e n g du 6 1 0 0 0 4，C i n a)Ab s t r a c t：Ob j e c t i v e s A me t h od f o r t h e s i mu l t a n e o u s d e t e r mi n a t i o n o f me t h y l c h l o rid e s(d i c h l o r o me t h a n e，t r i c h l o r o me t h a n e a n d t e t r a c hlo mme t ha n e)a n d BTEX(b e n z e n e，t o l u e n e，e t h y l b e n z e n e a n d x y l e n es i s o me r s)i n e n v i r o n me n t a l s a mp l es we r e s t u d i e d u s i n g h e a d s p a c e s o l i d p h a s e mi c r o e x t r a c t i o n(S PME)a n d g a s c h r o ma t o g r a p h y Me t h o d s S o l i d p ha s e mi cr oe xt r a c t i o n wi t h un c o a t e d f i b er i n t he he ads pa c e a nd c a pi l l a r y g as c hr oma t o gr a p hy we r e u s e d t o de t e rm i na t e m e t hy l c hlo ride s a nd BTEX The e xt r a c t i v e a nd c hr o m a t o gr a phi c c ond i t i o ns we r e o pt i m i z e d Resul t s Li ne a r l i m i t s o f t h e me t ho d：d i c h l o rm e t h a n e 0 1 47 5 7 g L，t r i c hlo rome t h a n e 0 2 4 8 4 5 t g L，t e t r a c hlo rm e t h a n e 0 4 51 3 7 1 t g L，b e n z e n e 0 0 3 1 2 6 t g L，t o l u e n e 0 1 02 4 8 g L，e t h y l b e n z e n e 0 0 62 4 7 g L，x y l e n es i some r s 0 1 32 4 8 i t g L Th e c o f f i c i e n t o f c o r r e l a t i o n r a n g ed f o rm 0 9 9 1 50 9 9 7 9 1 i mi t o f d e t e c t i o n o f v o l a t i l es a b o v e we r e 0 1 4 t g L、0 2 4 t g L、0 4 5 t g L、0 0 3 t g L、0 1 0 t g L、0 0 6 t g L、0 1 3 t g L Th e r e c o v e ri es a n d c o e f f i c i e n t o f v a ria t i o n i n s a mp l e d e t e rm i n a t i o n r a n g ed f r o m 8 0 0 一 1 11 6a nd f r o m 4 4 一 8 1。r espec t i ve l y Conc l u si o n Thi s me t h od was s i mpl e，f as t，a c c u r a t e wi t h hi gh r e p r od u c i bi l i t y，hi gh s e ns i t i v i t y a nd l o w c o s t Ke y wo r d s：s o l i d ph a s e mi c ro e xt r a c t i o n；g as c hr o m a t o gr ap hy；BTEX；m e t hy l c hlo r i de 苯 系物、氯代 甲烷 类 等 有 机物 作为 有 机 化学 工 业 的基 本 原 料。应 用广 泛。是 重 要 的 环 境 污 染物。因此 建 立 一种 快 速、灵敏 而 简便 的 测 定环 境 样 品 中 苯 系物、氯 代 甲烷 类 等 挥 发 性 有 机物 的方 法 具 有重 要 的意 义。对 于这 些 低 沸点 有 机 化 合物，多 采 用气 相 色 谱 法 进 行 测 定。但 由 于样 品基 底 成 分 复 杂，待 测有 机 污 染 物含 量很 低，在 分 析 前通 常需 对 样 品进 行分 离、提 取和 富集 等繁 琐 的预 处 理。固相微 萃取 技 术 对样 品 中有 机 分 子进 行萃 取 和 预 富 集，具有 避 免使 用 溶 剂、操 作 简 单、成 本 低、选 择 性 和 适 应 性 好 等 优 点【1 。挥 发 性成 分 采 用顶 空 固相 微 萃 取(HSS P ME)与 GC 联 用，将 样 品萃 取、富 集、进 样 合而 为 一。可大 大提 高分 析 速 度 和 方 法 的灵敏 度。目前 S P ME与 GC联 用 已用 于药 物、食 品、环 境分 析 C 2 ，但 国 内在 这 方 面的 工 作报 道 较 少。目前 商 品 化 S P ME装 置，价 格 昂 贵。本 文采 用 自行 制 作 S P ME装 置，选 用未 涂 任何 固定液 的光 纤 作 为 萃取 纤 维，通 过 HSS P ME G C法 测 定样 品 中挥 发 或 半 挥 发 性 有 机 物 包 括 苯 系 物、氯 代 甲烷 类，取得 了较 好的 结 果。1 材料 与 方法 1 1仪 器 设 备 与 试 剂 1、1 1 1 0 0 2型气 相色 谱 仪(上 海分 析 仪器 厂)；S E一3 0石 英 毛细 管 色谱 柱，0 2 5 mm 3 0 m。膜 厚 0 2 5 t m；KQ 一2 5 0超 声*本 文 由国家 自然 科学 基金 资助(项 目批 准编号 3 0 0 7 0 6 7 8)波清 洗 器(昆山市 淀 山湖检 测 仪器 厂)；光导 纤维(成都 西 门子 光纤 公 司提 供)；微 量 注 射 器；1 4 0 ml 顶 空 瓶；电热 恒 温 水 浴 箱；电热 磁力 搅拌 计。1 1 2 标 准溶 液：配制 一 定 浓 度 的 CH 2 C 1 2、C HC 1 3、c c h、苯、甲苯、乙苯、二 甲苯 混 合 标 准 溶 液 于 冰 箱 中 保 存，临 用 时，在 1 0 0 ml 容 量 瓶 中加入 适 量 去离 子 水(约 9 0 m 1)，用 微 量 注 射 器 准 确 吸取 适量 标准 储备 液，以水 定 容 至 1 0 0 ml，混匀 配 成标 准 应 用液，各 物质浓 度 分别 为：C H2 C1 2 7 5 7 t g ml、C HC 1 3 8 4 5 t g ml、C C h 1 3 7 1 t g ml、苯 1 2 6 t g ml、甲 苯 2 4 8 t g ml、乙 苯 2 4 7 t g ml、二 甲苯 2 4 8 t g ml。实验 用 水 为 重 蒸 水。所 用 试 剂 除 注 明 外 均 为 分 析 纯(AR)。1 2操 作 步骤 1 2 1 萃 取头 制备将 直径 为 0 0 5 mm，经 表 面处 理 的石 英 光 纤 一端 固 定在 注射 器 的 活 塞 帽上，控 制 纤 维 通过 注 射 器针 头伸 出 的 长 度 为 0 5 1 5 c m 之 间。将 制 好 的 萃 取 头 放 入 GC气化 室 内在 氮气 保护 下 2 0 0 老化 2 h备 用。1 2 2色 谱 条 件采 用 S E一3 0石 英 毛 细 管 柱(0 2 5 mm 3 0 m，膜厚 0 2 5 m)；气化 室温度 1 7 0 C：F I D检 测器 1 7 0 C；柱 温 8 0 ；载气 流速 2 2 ml mi n。1 2 3标 准 曲 线 的 绘 制 分 别 取 0 0 5，0 1 0，0 2 0，0 3 0，0 5 0 ml 标 准应 用液 于 1 4 0 ml 顶 空 瓶 中，加入 1 0 g Na C 1，加 重 蒸 水 至 1 4 0 ml，加 入磁 力 搅拌 子，将 固 相微 萃 取 装 置 的萃 取 头插 入 加 有 标 准 或 样 品 的 顶 空 瓶 中，在 7 0 恒 温 水 浴 中 保 温 维普资讯 http:/ 9 8 0 CHI NA PU BL I CHE ALT H V o 1 1 8No 8Au g 2 0 0 2中国 公共 卫生 2 0 0 2年 第 1 8卷 第 8期 6 0 mi n后，在 加热 磁 力搅 拌 下 顶 空萃 取 1 0 mi n。将 S P ME装置 取 出，立即 插入 气 相色 谱气 化 室进 行热 解吸。分 别 测 定标 准和 样品 的 各色 谱峰 峰高，以峰 高 对 相应 的含 量 作 图 得 标 准 曲线 或 求 出回 归方 程。1 2 4 样 品测 定 将 塑 料 包 装 袋、一 次 性 泡 沫 饭 盒 样 品 剪 碎，称取适 量 置于 1 4 0 ml 顶 空 瓶 中；取 适 量水 样 于 顶 空 瓶 中。在 加好 样品 的 顶空 瓶 中加 入 1 0 g Na C 1，加 重 蒸 水 至 1 0 0 ml，加 入磁 力 搅拌 子 后密 闭，按 标 准溶 液 的 分析 步 骤 进 行 操 作。与 标 准 曲线 比较，根 据 保 留时 间定性，色谱 峰高 定 量。2结果 与讨论 2 1革 取 条件 的优 化 2 1 1 S P ME 固相 涂 层 选 择 比较 了 5种 固相 涂 层(0v l、0V 一1 1、D C一2 0 0、P E G一2 0 M 及 不 涂 任 何 固 定 液 的 光 纤)，分 别用 HSS P ME法 测 定水 中 7种氯 代 甲烷 和苯 系 物，5种 固相 涂 层 对 氯 代 甲烷 和 苯 系物 的 萃 取 效 果 比较 见 图 l。结 果表 明未 涂 固 相涂 层的 光纤 萃取 效果 最好。由于 光纤 表 面 有一 层 弱极 性 或非 极性 的 聚酯 类 保 护 层，对 待 测 化 合 物 的 萃 取 效 果较 好。挺 誊 圉 1 HS与 14 SS P ME测定效 果 比较 2 1 2气 一液平 衡 温度 的选 择温 度 变 化在 H SS P ME分 析中 起着 重要 作 用。提高 温 度可使 气 一液 平衡 中气 相 中待 测 物质 的浓 度提 高 达 到 平 衡 的 时 间缩 短；但 是温 度 升高，导 致 涂层 吸 附能力 降 低；同时 提 高 温度 对 顶 空 瓶 的气 密性 等 也 提 出 了较高 要求。在 3 0 8 0 范 围内，比较 了 温度 对 待 测 化 合物 HS S P ME 的 影响。结 果 显示，在 相 同平 衡 时 间下，温 度达 6 5 以上时，萃取 效 果最 好，实际 应用 时，选择 气 一液 平 衡 温 度 为 7 0 。2 1 3恒温 时 间及 萃取 时 间的 影 响 平 衡 时间 的长 短，主要 决 定 于 顶空 瓶 中待测 物 固 一液 一气三 相 是否达 到 平衡。比较 了在 7 0 恒温水 浴 中 恒 温 时 间 为 0 1 2 0 mi n H SS P ME的 萃取 效 果。结 果 发现，恒温 时 间在 6 0 mi n以上萃 取 效果最 好。由于 待测 物在 萃取头 涂 层 与 气 相 之 间 的平 衡 需 要 一 定 时 间，比较 了萃取 时 间 22 0 mi n时 HSS P ME的 效 果，结 果 表 明 待测 化 合物 的萃 取 量随 着萃 取 时 间的增 长而 不断增 加。1 0 mi n 时基 本达 到 恒 定。本 实 验选 择 7 0 恒温 6 0 mi n后 萃取 1 0 mi n 进行 测 定。2 1 4搅 拌影 响搅 拌可 促进 样 品均 匀化。尽 快达 到 分配 平 衡。通过 搅拌 气 一液 和气 一固平衡 可快 速 达到。实验 表 明。搅拌 可 缩短 分析 时 间 提 高 了分析 灵敏 度。2 1 5解 吸温 度和 时 间的 选择温 度 升高 可使 解 吸加 快，但 会缩 短 S P ME萃 取 纤 维 的 使 用 寿 命。综 合 考 虑，我 们 采 用 1 7 0 作 为 解吸 温度。取得 了满意 的结 果。气化 室 中载 气 气流 也影 响分 析物 的解 吸。在 适 当的 载气 流 速 下，比较 了不 同解 吸 时 间下峰 高 的变 化情 况。结 果表 明，在 1 7 0 时，l mi n左右 解 吸基 本 完全。2 1 6 Na C 1 用 量 在 顶 空 瓶 内 水 样 中 加 入 一 定 量 的 Na C l 可 以增 加挥 发性 有 机 物在 气 相 中的 浓 度，有 利于 提 高 分 析 的 灵敏 度，当在 1 0 0 ml 水 中 Na C 1 的量 为 1 0 g时 待 测物 的 色谱 峰 达 到最 大 并保 持稳 定。本 实验 加入 1 0 g Na C 1。2 2方 法 考察 及性 能指 标 2 2 1 标准 曲线 及线 性 范 围HSS P ME 对样 品 有 着较 大 的 富 集 作用，测得 7种 化 合物 的标 准 曲线 的 回归 方 程和 线 性 范 围 见表 1。标 准及 样 品色 谱 图见 图 2。2 2 2 方 法 精 密 度 将 混 合 标 准 使 用 液(含 有 二 氯 甲 烷 7 5 g、三 氯 甲烷 8 0 烬、四 氯 化 碳 1 4 0 g、苯 2 5 0 g、甲 苯 5 0 g、乙苯 5 0 g、二 甲苯 5 0 )分 别 加 入 7个 1 4 0 ml 顶 空 瓶，按 上 述 方法 测 定(”=7)，相对 标 准 偏差 为 3_ 8 7 2。量 取 7份 洗车 厂废 水 样，按 操 作方 法 进 行 色 谱测 定。样 品 测 定 结 果 的 相 对 标 准 偏 差 在 4 4 8 1 之 间，符 合 分 析 要 求。2 2 3方法 检 出限 以基 线 噪 声 的 2倍 对 应 待 测 物 的 浓 度 作为 方法 的检 出限。7种 有 机 化 合 物 的 检 出 限 分 别 为：二 氯 甲烷 0 1 4 g L、三氯 甲烷 0 2 4 g L、四 氯 化 碳 0 4 5 g L、苯 0 O 3 g L、甲苯 0 1 0 g L、乙苯 0 0 6 g L、二 甲苯 0 1 3 g L，考虑 到气 相色 谱 仪灵 敏 度 尚未 达 到 最 高，故 该方 法 的检 出限 还 可 进 一步 降 低。2 2 4加 标 回收试验 对 多 种 样 品 分 别进 行 了不 同浓 度 水 平 的 加 标 回 收 实验 取 同 一样 品 9份，3份测 定本 底，另 6份 加入 不 同量 的标 准，按 测定 方法 进 行 操 作。结 果表 明，5种 样 品 中，7种化 合物 的加 标 回收 范 围为 8 0 0 1 1 1 6，平 均 回收 率 为 9 6 6 。5 4t(m i n 3)2 1 (m 混 合 标 准 色 谱 图 一 次 甚 i 辑 I饭 盒 样 一 次 性 塑 料 饭 盒 样 1 二氯 甲烷，2 三 氯甲烷，3 四氯 化碳，4 苯，5 甲苯，6 乙苯+对二 甲苯 7间二 甲苯，8 邻二 甲苯 圉 2标准 及样 品色 谱图 表 1 7种化 合物 回 归方 程 及线性 范 围 I 脚 J _|1 一 lJ _ l 1 一 J苯 li；一 三 J 一 一 维普资讯 http:/ 中 国公共卫 生 2 0 0 2年第 l 8卷 第 8期 C HI NA PU B LI CHE ALTH V o l 1 8N o 8Au g2 0 0 2 9 8 l 表 2样 品的加 标 回收 实 验(，l=6)童 犍 量 图 3 HS与 H SS P ME测定 效果 比较 2 2 5 顶 空与 顶 空 固相 微 萃 取 比较 在 优化 实 验 条 件 下 对 同一样 品 分别进 行 HSS P ME和 顶空 测 定，以 比较 两种 方 法 对 7种 待 测 物 的 测 定 效 果。结 果 见 图 3。从 图 中可 以 看 出 HS-S P ME法与 HS法 相 比灵 敏 度 要 高 得 多，对 挥 发性 稍 弱 的有机 物 比强挥 发性 化合 物 的富 集作 用更 大。3 结 语 通 过 对未 涂 固定液 的 固 相微 萃取纤 维 测 定氯 代 甲烷 和 苯 系物 的研 究，拓 宽 了固相微 萃 取 法的应 用，为新 型萃 取纤 维 的 开发 和研 制提 供 了思路。随着 对 固相微 萃取 方 法 的研究 不断 深入 它在 实际样 品 前处 理 中的 应用 潜力 将不 断 得到 发展。作 者简介：刘红 河(1 9 7 0一)，男 江 西 余 干 人 检 验 师 硕士 研 究 生 从 事仪器 分析 工作。参考文献 1 B e r l a r d i R，P a wh s z y n J T h e a p p l i c a t io no f c h e mi c a l l ym o d i fi e df u s e d s i l i ca f i b e r s in t h e e x t r a c ti o n o f o r g 霉【c s f r o m wa t e r ma t r i x s a mp l e s a n d t h e i r r a p idt r a n s f e r t ocaC l y c o l u n m s J Wa t e r P o ll u t io nRe s e a r c h J Ca n a d a 1 9 8 9 2 4：1 7 9 1 91 2 Mi l s son T L a r s e n T Mo n t a n a r e U a L，Ma d s e n J J Ap p l i c a t i o n O f h e a d s p a c e s o l i d p h a s e m i c r o e x t r a c t i o n f o r t h e an a l y s i s o f v o l a t i l e me t a b o l i t e s e mi t t e d b y p e n i c i l i u m s p e c i es，Mi c r o b i o l J M e t h o ds 1 9 9 6 2 5：2 4 5 2 5 0 3 P a n L，A d a ms M P a wl i s z y n J D e t e r mi n a t i o n o f f a t t y a c id s u s i n g s o l i dp h a s e mi c r o e x t r a c t i o n J An a 1 C h e m 1 9 9 5 6 7：4 3 9 6 4 4 03 4 S t e v e n B Ha wt h o rne J P a w l is z y n D J Mi ll e r S o l v e n t l e s s d e t e r mi n a t io n o f c a f f e i ne i n b e v e r a ges u s i n g s o l i d p ha s e mi c r o e x t r a c t io n wi t h f U S ed s i l i c a f i ber s J J C h r o ma t o g r，1 9 9 2 6 0 3：1 8 5一l 9 1 5 Yu Y，D a v i d J M，Ha wt h o rne S B S o l i dp h ase mi c r o e x t r a c t i o n O f p o l y c h l o r i n a t ed b i p h e n y l s J J J C h r o ma t o g r A 1 9 9 8 8 0 0：2 5 7 2 6 6(2 0 0 1，0 7 0 9收 稿2 0 0 1 1 0 2 5修 回 宋 艳萍 编辑赵 来复 校对)文章编号：1 0 0 1 0 5 8 0(2 0 0 2)0 8 0 9 8 1 0 1 【检验技术】抗 酸 菌冷 染 纸 片 法 的制备 与 应 用 辽 宁省 鞍 山市卫 生 防疫 站(1 1 4 0 0 2)廖 文 高海 燕 胡 伟 中图分 类号：R1 1 5 文献 标识 码：B 传统 的抗 酸 染色 方法 是 采用 加热 石炭 酸 复红 的齐 一 尼 氏 洗。滴 加 3 盐 酸 酒精 脱 色 2 mi n，至 无红 色 为止，水 洗。取 孑 L 抗 酸 染色 法 这 种使 用 溶 液 并 加热 的 染 色 方 法操 作起 来 较 为 雀绿 复染 纸 片，覆 盖 于 涂 菌 部 位，摘 1滴 蒸 馏 水 润 湿，复 染 复 杂，染 料也 容 易污 染 衣物 和周 围 环境，而 且 染色剂 也 有一 定 3 0 s，水 洗。待 干 油浸 镜 检。的保存 时 效。我 们在 此 法 基础 上，摸 索 出 一 种冷 染纸 片染 色 结果抗 酸 菌染成 红 色，L型 细 菌呈 淡红 色，其他 菌 染 法。以滤 纸为 载 体将 染 料 附 着其 上，染 色 过 程 中 不需 要 加热 成绿 色。分 别 用 传 统 法 与 本 法 对 堪 沙 分 枝 杆 菌(阳性 质 控 不 仅 简化 了操 作步 骤，方 便 了操 作者，而其 与 传统 的染 色法 具 菌)、大肠 埃希 菌(阴性 质 控 菌)进 行抗 酸 染 色，结 果 完全 相 符 有 相 同的效 果。现 介 绍如 下。合。另对 耻垢 分 枝杆 菌 和 结 核病 患 者痰 片 8 7例进 行 染 色 比 材 料与 方法(1)石 炭酸 复红 纸 片：称取 5 8碱 性 复 红 溶 较，结 果，两 种方 法符 合率 为 9 8 9(8 6 8 7)。于 2 0 ml 9 5 酒 精 中，加蒸 馏 水 至 1 0 0 ml，再 加 入 1 2 石 炭 酸 注意 事项 与讨 论 碱性 复红 要 用乳 钵 研 成 细 细 的粉 末，溶 液 l O ml，混匀；蘸滤 纸 直到 饱和，阴干，剪成 1 5 c ml c m 小 使其 能 充分 溶解；碱性 复红 和 石碳 酸 的 混 合液 至 少要 在 3 7 1 2 片，棕 色 瓶避 光 保 存 备 用。(2)3 盐 酸 酒 精：取 浓 盐 酸 3 ml，温箱 中放 2周时 间，以便 使 其 充 分 混合，溶 液 中不 能 有 沉渣。加 9 5 酒 精 9 7 ml。静 静 混 匀。(3)孔 雀 绿 纸 片：称 取 孔 雀 绿 期 问装 染料 的容 器 密 闭性 要 好，以免 溶 液挥 发。涂 片要 涂 得 4 8。溶 于 5 0 ml 9 5酒 精 中，然 后 取 出 2 0 ml，加 蒸馏 水 1 0 0 m1 稍 稍厚 一些，以免 脱色 过 度，出现 假 阴性。混 匀；蘸 滤纸 直 至饱 和。阴干，剪 成 1 5l c m 小 片，棕 色 瓶 避(本题承哈尔滨医科大学徐迪诚教授悉心指导，再次表示衷心感谢。)光 保存 备用。(4)涂 片：自然 干燥，火 焰 固 定。取 石 碳 酸 复 红 作者简介：廖文(1 9 7 2 一)女，大学 主管医师 主要从事微生物检 纸 片 一 片。覆 盖 涂 菌 部 位，加一 滴 蒸 馏 水 将 其 湿 润，染 色 5 上作。1 0 mi n(如室 温 低于 1 0 12可 将 其放 入 温 箱 中，效 果 会 更 好)，水(2 0 0 2 0 6 F 2 1 收橱任旭红编辑郭长胜校对)维普资讯 http:/