淋巴细胞标志检测.pptx

细胞免疫学检测细胞免疫学检测（cellular immunoassaycellular immunoassay）一、淋巴细胞表面标志物检测一、淋巴细胞表面标志物检测 (Assay of membran molecules for(Assay of membran molecules for lymphocyteslymphocytes）l一、免疫细胞分离技术一、免疫细胞分离技术 (Technic of separation for(Technic of separation for immunocyte)immunocyte)l二、免疫细胞表面标志检测技术二、免疫细胞表面标志检测技术 （Assay of membran molecules for Assay of membran molecules for ）l三、免疫细胞功能检测技术三、免疫细胞功能检测技术 （Assay for Immunocyte Tuntion Assay for Immunocyte Tuntion）l四、细胞因子与黏附分子检测技术四、细胞因子与黏附分子检测技术（Assay for Cytokine and Adhesion Assay for Cytokine and Adhesion moleculemolecule）免疫系统免疫系统(Immune system)(Immune system)l免疫器官免疫器官(Immune Organs)(Immune Organs)l免疫细胞免疫细胞(Immunocyte)(Immunocyte)l免疫球蛋白免疫球蛋白(Immunoglobulin)(Immunoglobulin)l主要组织相容性复合体主要组织相容性复合体 (Major Histocompatibility Complex;MHC)(Major Histocompatibility Complex;MHC)l细胞因子细胞因子(Cytekine)(Cytekine)l白细胞分化抗原和粘附分子白细胞分化抗原和粘附分子(Leukocyte(Leukocyte Differentiation Antigen and Adhesion Differentiation Antigen and Adhesion molecule)molecule)免疫细胞免疫细胞(immune cells)(immune cells)l指指:所有参与免疫应答或与免疫应答有关所有参与免疫应答或与免疫应答有关的细胞的细胞l包括包括T T细胞、细胞、B B细胞、细胞、NKNK细胞、单核吞噬细胞、单核吞噬细胞、树突状细胞及其他细胞细胞、树突状细胞及其他细胞免疫细胞分离技术免疫细胞分离技术(Separation of immunocytes)(Separation of immunocytes)人外周血人外周血(peripheral blood)(peripheral blood)白细胞分离白细胞分离l一、一、原理原理(principle)(principle)：红细胞红细胞/白细胞比例不同（白细胞比例不同（60060010001000）：）：1 1，密度不同，沉降速度不同。密度不同，沉降速度不同。l二、方法二、方法(method)(method)：1 1、自然沉降法、自然沉降法（直立静置（直立静置RT30RT3060min60min，紧贴红细胞层上的白，紧贴红细胞层上的白膜层）膜层）2 2、聚合物加速沉降法、聚合物加速沉降法（加某些高分子物使（加某些高分子物使RBCRBC凝集成串加速沉降，凝集成串加速沉降，如如明胶）明胶）人外周血单个核细胞人外周血单个核细胞（peripheral blood peripheral blood mononuclear cellsmononuclear cells，PBMCPBMC）的分离的分离加入对倍稀释的血液样本加入对倍稀释的血液样本 水平式离心水平式离心20min时结果时结果聚蔗糖聚蔗糖-泛影葡胺泛影葡胺(ficoll-hypaque)(ficoll-hypaque)(1.0770.001g/L)l 分离人外周血淋巴细胞以密度为分离人外周血淋巴细胞以密度为1.0770.001/g/LPercollPercoll混悬液混悬液(处理过的硅胶处理过的硅胶颗粒颗粒)原液密度原液密度(density)(density)为为1.135g/L+1.135g/L+等量等量PBS,PBS,高速离心高速离心 (centrifugation)(centrifugation)由下而上的逐减的连续密度梯由下而上的逐减的连续密度梯度度(density gradient)(density gradient)淋巴细胞纯度淋巴细胞纯度98%,98%,单核细胞单核细胞纯度纯度78%78%流程长流程长,步骤繁步骤繁,成本高成本高人外周血淋巴细胞人外周血淋巴细胞(亚群亚群)的分纯的分纯(purificcation)(purificcation)l人外周血单个核细胞（人外周血单个核细胞（PBMC）主含淋巴细胞）主含淋巴细胞,但混有但混有单核细胞、粒细胞、红细胞和血小板等。淋巴细胞的分纯：单核细胞、粒细胞、红细胞和血小板等。淋巴细胞的分纯：（一）红细胞的去除（一）红细胞的去除（0.83%氯化铵、蒸馏水）氯化铵、蒸馏水）（二）血小板的去除（离心、洗涤）（二）血小板的去除（离心、洗涤）（三）单核、粒细胞的去除（黏附去除，羰基铁粉吞噬）（三）单核、粒细胞的去除（黏附去除，羰基铁粉吞噬）（四）淋巴细胞亚群的分离（四）淋巴细胞亚群的分离淋巴细胞亚群的分离淋巴细胞亚群的分离l分离依据：分离依据：1、淋巴细胞不同亚群其细胞表面标志（淋巴细胞不同亚群其细胞表面标志（specific specific membrane molecule/surface markermembrane molecule/surface marker）2 2、淋巴细胞不同亚群其细胞分化抗原（、淋巴细胞不同亚群其细胞分化抗原（antigen of antigen of cluster differentiation cluster differentiation；CDCD）l分离方法：分离方法：l1、Precipitation of E rosettePrecipitation of E rosettelErythrocyte Rosette forming cell;ERFCErythrocyte Rosette forming cell;ERFC The sueface of T lymphocyte contains the The sueface of T lymphocyte contains the receptor(CDreceptor(CD2 2)of sheep erythrocyte,which)of sheep erythrocyte,which is called E receptor for short.T lympho-is called E receptor for short.T lympho-cytes can form E rosette with sheep cytes can form E rosette with sheep erythro-cytes by its E receptor.erythro-cytes by its E receptor.lLymphocytes+sLymphocytes+sRBCRBC,centrifugation-,centrifugation-T lympho-cytes(T lympho-cytes(底底)/B lympho-cytes)/B lympho-cytes（界面界面）l2、黏着性（理化）：、黏着性（理化）：B淋巴细胞易黏附聚酰胺纤维（尼龙纤维）表面，而淋巴细胞易黏附聚酰胺纤维（尼龙纤维）表面，而T淋淋巴细胞则不易附着巴细胞则不易附着（例）尼龙棉柱分离（例）尼龙棉柱分离 直接流出的是直接流出的是T淋巴细胞。淋巴细胞。l3、免疫学：用特异性抗体并使其固相化，捕获具特定膜、免疫学：用特异性抗体并使其固相化，捕获具特定膜抗原的细胞抗原的细胞（例）（例）1、亲和板结合分离、亲和板结合分离 (affinity(affinity)2 2、免疫磁珠分离、免疫磁珠分离 （immunomagnetic beadsimmunomagnetic beads）3 3、流式细胞术分离、流式细胞术分离 (FCM)(FCM)磁性微珠磁性微珠(magnetic beads):(magnetic beads):磁性微珠是以金属离子为核心，外磁性微珠是以金属离子为核心，外层均匀包裹高分子聚合体的固层均匀包裹高分子聚合体的固相颗粒。相颗粒。磁性微珠上既可标记针对某种细胞磁性微珠上既可标记针对某种细胞表面抗原的特异性抗体（直接表面抗原的特异性抗体（直接法）法）;也可标记羊抗鼠也可标记羊抗鼠IgG抗体抗体(间接法），使分离细胞的范围间接法），使分离细胞的范围大大扩大大大扩大l正选正选（positive selectionpositive selection）法：法：磁珠结合的细胞就是所要分离获得的细胞磁珠结合的细胞就是所要分离获得的细胞l负选（负选（negtive selectionnegtive selection）法：）法：磁珠结合不需要的细胞，游离于上清液的磁珠结合不需要的细胞，游离于上清液的细胞为所需细胞细胞为所需细胞l一般而言，负选法比正选法的磁珠用量大一般而言，负选法比正选法的磁珠用量大l评价评价(evalution)(evalution)：l免疫磁珠分离法具有高纯度（免疫磁珠分离法具有高纯度（8080 9999），高得率），高得率（9090 9595）、高细胞活性（）、高细胞活性（99100%99100%）的特点，仅次）的特点，仅次或相当于流式细胞仪（或相当于流式细胞仪（FACSFACS）的分选效率。）的分选效率。与与FACS FACS 相比，本方法操作简单、省时、经济；可用相比，本方法操作简单、省时、经济；可用做做FACSFACS分选前的预分离，以减少分选前的预分离，以减少FACSFACS所用时间。所用时间。另外连续两次过柱分选可进一步提高分选细胞纯度，另外连续两次过柱分选可进一步提高分选细胞纯度，通常可达通常可达95959999。注意事项（注意事项（AttentionsAttentions）l如果分离细胞用作培养，全过程在超净台中完成。如果分离细胞用作培养，全过程在超净台中完成。l分离柱一般只能一次应用，再用时分离效率降低。分离柱一般只能一次应用，再用时分离效率降低。l抗体包被磁珠和死细胞常有非特异性结合，因而分选抗体包被磁珠和死细胞常有非特异性结合，因而分选前应去除死细胞；上分离柱前，充分振荡混悬细胞，前应去除死细胞；上分离柱前，充分振荡混悬细胞，打散细胞团块。打散细胞团块。l用分离柱分选，应用真空抽滤水，减少水中气泡，使用分离柱分选，应用真空抽滤水，减少水中气泡，使分离柱不被气泡阻滞分离柱不被气泡阻滞荧光激活细胞分离仪原理荧光激活细胞分离仪原理(principle)(principle)（fluorescence activated cell sorterfluorescence activated cell sorter，FACSFACS）n细胞经荧光染色后，通过高速流动系统，细胞排成单行，细胞经荧光染色后，通过高速流动系统，细胞排成单行，逐个流经检测区。逐个流经检测区。n当细胞从流动室喷嘴处流出时，超声振荡搅动液流，使液当细胞从流动室喷嘴处流出时，超声振荡搅动液流，使液流断裂成一连串的均匀小滴，每小滴内最多含一个细胞流断裂成一连串的均匀小滴，每小滴内最多含一个细胞（其中只有百分之几的液滴中含细胞）。（其中只有百分之几的液滴中含细胞）。n细胞经激光照射产生荧光和散射光，信号经计算机系统处细胞经激光照射产生荧光和散射光，信号经计算机系统处理，分辨细胞的类型。如识别的是所需的细胞时（如理，分辨细胞的类型。如识别的是所需的细胞时（如T细细胞），使液滴瞬即感应阳电荷、阴电荷或不带电荷，使所胞），使液滴瞬即感应阳电荷、阴电荷或不带电荷，使所需的细胞在电场偏转下进入不同的收集管。需的细胞在电场偏转下进入不同的收集管。n评价评价(evalution)(evalution)：用用FACS分离细胞准确快速、纯度高、回收分离细胞准确快速、纯度高、回收率高，能保持细胞活力，并可在无菌条件下进率高，能保持细胞活力，并可在无菌条件下进行。行。仪器昂贵，极少用于常规，而多数仅作为研仪器昂贵，极少用于常规，而多数仅作为研究的手段究的手段吞噬细胞吞噬细胞(phagocytosis)(phagocytosis)分离分离lPhagocytes-Phagocytes-mononuclearmononuclear macrophage macrophage neutrophil neutrophil、eosinophileosinophil、basophilbasophill分离（分离（SeparationSeparation）：）：Mononuclear Mononuclear 参照参照PercollPercoll分层液法分层液法 Macrophage Macrophage 斑蝥敷贴（诱发无菌性皮炎）斑蝥敷贴（诱发无菌性皮炎）Other Other 很少分纯很少分纯树突状细胞树突状细胞（Dendritic cellDendritic cell）lDendritic cellsDendritic cells（DCsDCs）are the most are the most potent antigen presenting potent antigen presenting cellcell（APCAPC）knownknown，which have numerous which have numerous specialized features that make them specialized features that make them extremely efficient at capturing and extremely efficient at capturing and presenting antigen and activating T presenting antigen and activating T cells and mediating immune response.cells and mediating immune response.树突细胞是体内功能最强的专职抗原提呈细胞，可把抗树突细胞是体内功能最强的专职抗原提呈细胞，可把抗 原特异性地提呈给原特异性地提呈给T淋巴细胞而产生抗原特异性免疫应淋巴细胞而产生抗原特异性免疫应 答。答。树突状细胞（树突状细胞（Dendritic cellDendritic cell）制备）制备lDCs can be generatedDCs can be generated，in vitroin vitro，from many from many different samples of human beings.different samples of human beings.lDCs only constitue 0.5DCs only constitue 0.51.0%of the 1.0%of the peripheral blood mononuclear cells.peripheral blood mononuclear cells.lDCs can be generated from monocyto/MDCs can be generated from monocyto/M +IL-4 and GM-CSF +IL-4 and GM-CSFlIdentifing DCs by CD markerIdentifing DCs by CD marker免疫细胞功能检测免疫细胞功能检测(Assays for immunocytes)(Assays for immunocytes)一、功能简介一、功能简介二、测定方法二、测定方法T lymphocytesT lymphocytesl 外周血中外周血中T细胞占淋巴细胞总数的细胞占淋巴细胞总数的65%70%l来源于骨髓干细胞（胚胎期为卵黄囊和胎肝，来源于骨髓干细胞（胚胎期为卵黄囊和胎肝，Bone-marrow stem cellsBone-marrow stem cells），在胸腺中发育，在胸腺中发育和分化。和分化。l分化成熟分化成熟（be derivedbe derived）后离开胸腺进入外）后离开胸腺进入外周免疫器官的胸腺依赖区定居。周免疫器官的胸腺依赖区定居。l淋巴细胞再循环淋巴细胞再循环(recycle)(recycle)（血液（血液组织组织淋淋巴巴血液）血液）T T细胞亚群（细胞亚群（SubsetSubset）l根据根据TCRTCR不同分为不同分为TT细胞和细胞和T T细胞细胞l根据表面标志和分化抗原的不同，根据表面标志和分化抗原的不同，T T可分为可分为CD4CD4和和CD8 CD8 T T细胞细胞lCD4 CD4 T T细胞根据其分泌的细胞因子和介导的功能细胞根据其分泌的细胞因子和介导的功能在分为在分为Th1Th1和和Th2Th2lCD8 CD8 T T细胞依据其功能不同分为细胞毒性细胞依据其功能不同分为细胞毒性(cytotoxicity)T(cytotoxicity)T细胞和抑制性细胞和抑制性(suppresion)T(suppresion)T细细胞胞lNK 1.1 NK 1.1 T T细胞专一识别脂类细胞专一识别脂类(lipid)(lipid)抗原、非抗原、非MHCMHC限制限制Type-I/2 T helperType-I/2 T helper（Th1,Th2Th1,Th2）lTh1Th1细胞主要分泌细胞主要分泌IL-2IL-2、IFN-IFN-和和TNF-TNF-，介导细胞免疫，介导细胞免疫lTh2Th2细胞主要分泌细胞主要分泌IL-4IL-4、IL-5IL-5、IL-6IL-6、IL-10IL-10，介导体液免疫，介导体液免疫lTh1Th1和和Th2Th2是一对重要的调节是一对重要的调节(regulation)(regulation)细胞，同时又互为抑制细胞，同时又互为抑制(inhibition)(inhibition)细胞，二类细胞的相互平细胞，二类细胞的相互平衡衡(balance)(balance)与否直接影响与否直接影响(influence)(influence)机体的免疫功能机体的免疫功能T-cytotoxic cells,Tc/CTLT-cytotoxic cells,Tc/CTL（1 1）lCD8CD8+T T细胞细胞l免疫应答的主要效应免疫应答的主要效应(effect)(effect)细胞细胞l特异性杀伤靶细胞特异性杀伤靶细胞(target cells)(target cells)l在肿瘤免疫和抗病毒感染的免疫中发挥在肿瘤免疫和抗病毒感染的免疫中发挥重要作用重要作用l功能发挥受功能发挥受MHC IMHC I类限制类限制Tc/CTLTc/CTL（2 2）l除细胞毒效应外，除细胞毒效应外，CTLCTL还可分泌一系列细还可分泌一系列细胞因子，调节胞因子，调节(regulation)(regulation)免疫功能；也免疫功能；也分泌趋化性分泌趋化性(tend to)(tend to)细胞因子如细胞因子如IL-8IL-8、IP-10IP-10（IFN inducible protein 10IFN inducible protein 10）、）、IP-1IP-1（巨噬细胞炎症蛋白）等，介导炎（巨噬细胞炎症蛋白）等，介导炎症反应症反应(inflammatory reaction)(inflammatory reaction)。l依据依据CTLCTL分泌细胞因子的不同可分为分泌细胞因子的不同可分为Tc1Tc1和和Tc2Tc2。T-suppresion cells,TsT-suppresion cells,Tsl通过过继转移实验通过过继转移实验(passive transfer test)(passive transfer test)加以确认加以确认(confirm)(confirm)。l可能可能(may be)(may be)作为单独的功能细胞群体存在作为单独的功能细胞群体存在l多年来未能找到多年来未能找到TsTs特有（特有（specificspecific）的表）的表面标志（面标志（surface markersurface marker）。）。B B淋巴细胞的分化成熟（淋巴细胞的分化成熟（be derived be derived）骨髓干细胞骨髓干细胞前前B B细胞细胞未成熟未成熟B B细细胞胞成熟成熟B B细胞细胞激活激活B B细胞细胞浆细浆细胞（胞（plasma cellsplasma cells）经过）经过IgIg基因重基因重排、活化、转录最终表达排、活化、转录最终表达BCRBCR。（B-cell-receptor complex,BCRB-cell-receptor complex,BCR）前（前（pro/prepro/pre）B B细胞细胞l细胞浆出现细胞浆出现链，并诱导轻链的重排链，并诱导轻链的重排 （rearrangerearrange）；）；l不表达不表达BCRBCRl不具有任何已知的生物学功能不具有任何已知的生物学功能 BCR(BCR(B-cell-receptor)B-cell-receptor)B-cell-receptor)B-cell-receptor):B-cell surface immunoglobulin and B-cell surface immunoglobulin and its associated signalling its associated signalling molecules,CD79a and CD79b.molecules,CD79a and CD79b.未成熟（未成熟（immatureimmature）B B细胞细胞l替代轻链（替代轻链（SLSL）preBCR preBCR 细胞质细胞质IgM IgM 膜膜IgMIgMl膜膜IgMIgM是是B B细胞分化成熟中首先出现的细胞分化成熟中首先出现的BCRBCR，也是未成熟也是未成熟B B细胞的表面标志细胞的表面标志l此时此时B B细胞具有识别（细胞具有识别（recognitionrecognition）抗原的能）抗原的能力，但还不能介导免疫应答力，但还不能介导免疫应答l处于抗原敏感期，受到相应刺激后会导致细胞处于抗原敏感期，受到相应刺激后会导致细胞凋亡（凋亡（apoptosisapoptosis），是），是B B细胞自身免疫耐受细胞自身免疫耐受（immunological toleranceimmunological tolerance）的重要机制）的重要机制成熟（成熟（maturemature）B B细胞细胞l细胞浆和细胞膜都表达细胞浆和细胞膜都表达IgMIgM和和IgDIgDl能识别抗原能识别抗原(recognition of antigen)(recognition of antigen)，介导特异性免疫应答，介导特异性免疫应答lB B细胞此时完成在骨髓中的分化和成熟细胞此时完成在骨髓中的分化和成熟活化（活化（activeactive）B B细胞和浆细胞细胞和浆细胞l无抗原刺激时，无抗原刺激时，B B细胞在外周免疫器官中仅细胞在外周免疫器官中仅存活存活7 71010天天l当受到抗原刺激时，当受到抗原刺激时，B B细胞可被活化并增殖细胞可被活化并增殖和分化，进入激活状态和分化，进入激活状态l最终向浆细胞分化最终向浆细胞分化l浆细胞大量合成和分泌浆细胞大量合成和分泌IgIg，BCRBCR数量减少数量减少B B细胞亚群（细胞亚群（Subset Subset）l为异质性群体，显示不同的功能和标志，为异质性群体，显示不同的功能和标志，依据依据CD5CD5将将B B细胞分为细胞分为B1B1和和B2B2。（一）（一）B1B1细胞：细胞：CD5 CD5+，主要识别非蛋白质抗原，如细菌，主要识别非蛋白质抗原，如细菌脂多糖。无须脂多糖。无须ThTh细胞辅助，可直接介导对细胞辅助，可直接介导对非胸腺依赖抗原的免疫应答，产生特异性非胸腺依赖抗原的免疫应答，产生特异性抗体为低亲和力，不产生免疫记忆细胞抗体为低亲和力，不产生免疫记忆细胞（二）（二）B2B2细胞：细胞：CD5 CD5-，主要识别蛋白质抗原，主要识别蛋白质抗原 在在ThTh细胞辅助下，被完全激活并介导对细胞辅助下，被完全激活并介导对 胸腺依赖抗原的免疫应答，产生特异性胸腺依赖抗原的免疫应答，产生特异性 抗体抗体Other immune cellsOther immune cellslNKNK（natural killernatural killer）细胞）细胞l单核吞噬（单核吞噬（mononuclear phagocytemononuclear phagocyte）细胞）细胞l粒细胞（粒细胞（granulocytesgranulocytes）l肥大（肥大（mastmast）细胞）细胞NKNK细胞细胞l大颗粒淋巴细胞、裸细胞（大颗粒淋巴细胞、裸细胞（nakednaked）l来源于骨髓造血干细胞来源于骨髓造血干细胞l参与细胞免疫参与细胞免疫l在肿瘤免疫、抗病毒感染中起重要作用在肿瘤免疫、抗病毒感染中起重要作用l细胞表面标志较少：细胞表面标志较少：CD2CD2，CD16CD16，CD56CD56，CD69CD69 mononuclear phagocytemononuclear phagocyte l血液中血液中单核细胞（单核细胞（mononuclear mononuclear）l组织中组织中巨噬细胞（巨噬细胞（macrophagemacrophage，M M）l来源于骨髓干细胞，发育成单核细胞后，进来源于骨髓干细胞，发育成单核细胞后，进入血流分布于各种组织器官，并有不同命名入血流分布于各种组织器官，并有不同命名l非特异免疫功能（非特异免疫功能（non-specificnon-specific）l特异性（特异性（specificspecific）免疫功能（免疫调节、）免疫功能（免疫调节、抗原递呈，抗原递呈，antigen-presentingantigen-presenting）Different denomination Of Different denomination Of mononuclear phagocytemononuclear phagocytelBlood mononuclear cellsBlood mononuclear cellslGeneral tissue macrophageGeneral tissue macrophage，M MlConnective tissue tissue cellsConnective tissue tissue cellslLiver KupfferLiver Kupffers cells celllLung alveolar cellsLung alveolar cellslSkin LangerhanSkin Langerhans cells celllNervous system micro-glia cellsNervous system micro-glia cellsAbdomen abdomen(Abdomen abdomen(腹腔腹腔)M)MMarkers of mononuclear phagocyteMarkers of mononuclear phagocyte l成熟的单核吞噬细胞表达成熟的单核吞噬细胞表达MHC I MHC I 类和类和IIII类分子，协同刺激类分子，协同刺激(co-stimulatory)(co-stimulatory)分分子（子（CD40CD40、B7B7）lCD1CD1，CD2CD2，CD14CD14，CD64CD64，CD32CD32，CD16CD16，CD23CD23，CD35CD35（C3bC3b受体）和受体）和CR3 CR3（C3biC3bi受受体）体）树突细胞树突细胞（Dendritic cellDendritic cell，DCDC）l由骨髓中髓样前体细胞分化而来，由骨髓中髓样前体细胞分化而来，DCDC成成熟经历熟经历2 2个阶段：个阶段：l1 1）经血流迁徙到外周组织和器官，此时）经血流迁徙到外周组织和器官，此时MHCMHC和和B7B7分子的表达水平很低，无功能，分子的表达水平很低，无功能，但可以吞噬和吞饮抗原但可以吞噬和吞饮抗原l2 2）这些细胞经输入淋巴管进入局部淋巴）这些细胞经输入淋巴管进入局部淋巴结，分化为成熟结，分化为成熟DCDC，但不再具有吞噬，但不再具有吞噬活活性。性。DC DC 的组织分布和命名的组织分布和命名l淋巴样器官：淋巴样器官：T T细胞区（并指状细胞区（并指状DCDC）和）和B B细胞区（滤泡细胞区（滤泡DCDC）l非淋巴样器官：皮肤和黏膜（朗罕细胞）非淋巴样器官：皮肤和黏膜（朗罕细胞）、器官（间质、器官（间质DCDC）l循环体液：血液（血液循环体液：血液（血液DCDC）、淋巴液）、淋巴液（隐蔽细胞）（隐蔽细胞）DCDC的生物学功能的生物学功能l向向T T细胞递呈抗原（细胞递呈抗原（CD1CD1，CD40CD40，MHCMHC）l参与天然免疫和参与天然免疫和T T细胞亚群的分化细胞亚群的分化l诱导免疫耐受：淋巴样诱导免疫耐受：淋巴样DCDCl调节免疫应答（抑制调节免疫应答（抑制T T细胞增殖）细胞增殖）l向向B B细胞递呈抗原（滤泡细胞递呈抗原（滤泡DCDC）Granulocyte and Mast cellsGranulocyte and Mast cellslGranulocyteGranulocyte来源于来源于BMBM（bone marrowbone marrow），参与），参与特异和非特异免疫应答，在炎症中发挥作用，特异和非特异免疫应答，在炎症中发挥作用，主要分布于血液主要分布于血液l肥大细胞主要分布于黏膜和结缔组织中（血液肥大细胞主要分布于黏膜和结缔组织中（血液中即嗜碱性粒细胞），表达中即嗜碱性粒细胞），表达FcRFcR，在，在IgEIgE作用作用下发生脱颗粒反应，参与下发生脱颗粒反应，参与I I型变态反应。型变态反应。l主要标志：主要标志：MHCMHC，B7B7，CD40CD40，CD40LCD40LAssay for the surface markers Assay for the surface markers of T lymphocyteof T lymphocytelT T细胞表面标志（细胞表面标志（ThTh，TsTs，TiTi）l抗体致敏细胞花环抗体致敏细胞花环(E-rosette)(E-rosette)法（法（CD58CD58受受体）体）l免疫细胞化学法免疫细胞化学法(immunochemistry(immunochemistry)l免疫荧光法免疫荧光法(immunofluorescent(immunofluorescent)lT T细胞亚群检测（细胞亚群检测（flow cytometry sorter,flow cytometry sorter,FCMSFCMS）Assay for the surface markers Assay for the surface markers of B lymphocyteof B lymphocytelSmIgM(surface membrane SmIgM(surface membrane )检测检测lFcFc受体受体(receptor)(receptor)和补体和补体(complement)(complement)受受体的检测（体的检测（EACEAC花环）花环）sRBC+sRBC+溶血素（溶血素（EAEA）+C+C（补体）（补体）-EAC-EAClB B细胞亚群（细胞亚群（CDCD）检测（）检测（FACSFACS）Assay for the surface markers Assay for the surface markers of NK cellsof NK cellslNatural Killer(NK)cells express neither T Natural Killer(NK)cells express neither T cell nor B cell antigen receptors.cell nor B cell antigen receptors.lCD16 and CD56 molecule are important CD16 and CD56 molecule are important markere of NK cells.markere of NK cells.lADCC(ADCC(抗体依赖细胞毒性抗体依赖细胞毒性)(antibody-dependent cellular cytotoxicity)(antibody-dependent cellular cytotoxicity)Assays of Cellular immune TunctionAssays of Cellular immune TunctionLymphocyte Transformation TestLymphocyte Transformation TestlPrinciple:Principle:Antigens or mitogens(such as PHA Antigens or mitogens(such as PHA and ConA)are incubated with T and ConA)are incubated with T lymphocytes in culture medium,lymphocytes in culture medium,allowing stimulation of T lymphocyte allowing stimulation of T lymphocyte activity to transform into activity to transform into lymphoblasts.lymphoblasts.lMethods:morphologic countingMethods:morphologic counting 3 3H-thymidine incorporationH-thymidine incorporation MTT colorimetry MTT colorimetrylLymphocyte proliferation rate:Lymphocyte proliferation rate:Blast cell count Blast cell count=-100%=-100%Small lymphocyte+Blast cell count(200)Small lymphocyte+Blast cell count(200)lReference valueReference value：70%70%3H-thymidine incorporationl3 3H H标记的胸腺嘧啶核苷（标记的胸腺嘧啶核苷（3 3H TdR)+H TdR)+细胞培养细胞培养液中液中,转化淋巴母细胞的转化淋巴母细胞的DNADNA合成增加合成增加,增加增加的的DNADNA中有中有3 3H TdRH TdR。检测培养后淋巴细胞内放。检测培养后淋巴细胞内放射性核素量，通过计算判断淋巴细胞的转化程射性