果蝇饲养与性状观察-杂交2011.pptx

请确定分组请确定分组2 2 注意安全注意安全有毒、危险品严格按操作规程有毒、危险品严格按操作规程使用与废弃，不得随意丢弃。使用与废弃，不得随意丢弃。易燃物品必须远离火源。易燃物品必须远离火源。严防触电，禁止湿手取拿电源开关。严防触电，禁止湿手取拿电源开关。一旦发生事故，及时报告。一旦发生事故，及时报告。实验房间严禁进食与饮水。实验房间严禁进食与饮水。进入实验室必须身着工作服。进入实验室必须身着工作服。实验课要求实验课要求1 1 实验室纪律实验室纪律安静、整洁、认真操作。安静、整洁、认真操作。爱惜仪器、物品，节约材料、药品。爱惜仪器、物品，节约材料、药品。试剂的使用：试剂的使用：及时盖上瓶塞，不要及时盖上瓶塞，不要“张冠李戴张冠李戴”。倒出的溶液严禁回倒，滴管、玻棒不可混用。倒出的溶液严禁回倒，滴管、玻棒不可混用。按规则使用仪器。按规则使用仪器。值周安排值周安排实验结束后必须做好清洁。实验结束后必须做好清洁。实验结束后请签到实验结束后请签到3 3 显微镜和解剖镜的使用显微镜和解剖镜的使用防湿、防高温、防药品侵蚀。防湿、防高温、防药品侵蚀。染液等溶液：不得污染镜头和镜台。染液等溶液：不得污染镜头和镜台。不得在高倍镜下取放标本片。不得在高倍镜下取放标本片。移动时小心、轻放，防止滑落损坏。移动时小心、轻放，防止滑落损坏。用后关闭灯源，清洁，套上防尘罩。用后关闭灯源，清洁，套上防尘罩。仪器、工具损坏或丢失：及时报告。仪器、工具损坏或丢失：及时报告。违反操作规程所致不应有损失，按学校规定处理。违反操作规程所致不应有损失，按学校规定处理。4 4 课程评分规则课程评分规则实验报告实验报告实验目的实验目的实验原理实验原理实验用品实验用品实验步骤实验步骤注意事项注意事项实验结果及观察实验结果及观察讨论讨论实验小结实验小结参考格式参考格式实验结果分析实验结果分析6 6次实验完成后装订成册，注明学号次实验完成后装订成册，注明学号实验一实验一 果蝇饲养与性状、生活史观察果蝇饲养与性状、生活史观察实验二实验二果蝇杂交实验的设计果蝇杂交实验的设计伴性遗传的验证伴性遗传的验证实验三实验三 粗糙链孢霉四分子分析粗糙链孢霉四分子分析实验四实验四蚕豆根尖细胞有丝分裂观察蚕豆根尖细胞有丝分裂观察实验五实验五果蝇果蝇唾腺染色体的标本制作唾腺染色体的标本制作实验六实验六减数分裂标本的制备与观察减数分裂标本的制备与观察实验七实验七人群人群PTC味觉基因频率的测定与分析味觉基因频率的测定与分析3.掌握遗传学实验常用的果蝇品系特征及常见掌握遗传学实验常用的果蝇品系特征及常见的突变类型的突变类型一一目的要求目的要求1.了解果蝇的生活史，学会饲养果蝇的方法。了解果蝇的生活史，学会饲养果蝇的方法。2.掌握区别雌雄果蝇技能及处女蝇的选择方法。掌握区别雌雄果蝇技能及处女蝇的选择方法。实验一实验一 果蝇饲养与性状、生活史观察果蝇饲养与性状、生活史观察黑腹果蝇黑腹果蝇Drosophilamelanogaster1.果蝇作为实验材料的优点果蝇作为实验材料的优点饲养容易饲养容易生长迅速生长迅速2n=8，少，少唾腺染色体制作容易，横纹清晰唾腺染色体制作容易，横纹清晰突变性状多，形态、行为等突变性状多，形态、行为等二二实验原理实验原理重要的模式生物重要的模式生物2.果蝇的生活史果蝇的生活史（变态发育）（变态发育）最适温度最适温度20-2520-251-2day1day1day1day1day1.5-2day3.5-4dayWhitingtonLab完全变态昆虫完全变态昆虫生活史：生活史：4阶段阶段WhitingtonLabBP104:axonstaining22c10:sensoryneuronstaining3.模式生物模式生物EmbryodevelopmentWingthreatBoxingBehaviortestFightingExploring1.果蝇培养基配制果蝇培养基配制成分成分数量数量单位单位作用作用水水玉米粉玉米粉绵白糖绵白糖琼脂条琼脂条丙丙 酸酸酵母粉酵母粉12012.39.30.90.8少量少量mlgggml溶溶 剂剂基本成分基本成分基本成分基本成分固固 化化 剂剂防防 腐腐 剂剂菌菌 种种以大组为单位配制，以大组为单位配制，2人人/小组，小组，5瓶培养基瓶培养基/2人人玉米粉培养基配方玉米粉培养基配方(10瓶瓶)三三操作步骤操作步骤2瓶今天用，瓶今天用，3瓶下次实验用瓶下次实验用洗培养瓶，制棉塞洗培养瓶，制棉塞（纱布和棉花），干燥（纱布和棉花），干燥水分成两份，一份用于溶解琼脂和糖，另一份煮玉米粉，水分成两份，一份用于溶解琼脂和糖，另一份煮玉米粉，待两份分别溶解煮好后再混合煮沸。待两份分别溶解煮好后再混合煮沸。煮培养基煮培养基加丙酸加丙酸分装分装去火后再加入丙酸。去火后再加入丙酸。将粘稠的培养基充分搅拌后分装将粘稠的培养基充分搅拌后分装培养瓶，厚度约培养瓶，厚度约1-1.5cm。撒酵母粉撒酵母粉待培养基冷却后，用乙醇棉球擦瓶壁，除去积水，然后待培养基冷却后，用乙醇棉球擦瓶壁，除去积水，然后在培养基表面撒上一层酵母粉，即可接种果蝇。在培养基表面撒上一层酵母粉，即可接种果蝇。江南江南2.乙醚麻醉果蝇乙醚麻醉果蝇果蝇如复苏，应进行第二次麻醉。果蝇如复苏，应进行第二次麻醉。罗雪瑞罗雪瑞乙醚麻醉果蝇乙醚麻醉果蝇麻醉麻醉:两支翅膀仍重叠在背上两支翅膀仍重叠在背上死亡死亡:翅膀外展翅膀外展杂交的亲本杂交的亲本:切不可选翅膀外切不可选翅膀外展果蝇，不管外展程度如何展果蝇，不管外展程度如何张凝张凝3.果蝇观察：雌雄鉴别果蝇观察：雌雄鉴别特特 征征雌雌蝇蝇雄雄蝇蝇个个 体体大大小小腹腹 片片6 64 4腹背部条纹腹背部条纹5 53 3腹部末端腹部末端尖尖圆圆性性 梳梳无无有有雌雌腹片腹片6节节产卵管呈圆锥状凸出产卵管呈圆锥状凸出雄雄腹片腹片4节节交尾器为黑色圆形交尾器为黑色圆形雌雄体雌雄体消化道、生殖腺消化道、生殖腺发育畸形发育畸形雄果蝇在第一对足跗节具有性梳雄果蝇在第一对足跗节具有性梳果蝇雌雄鉴别果蝇雌雄鉴别特特 征征雌雌蝇蝇雄雄蝇蝇个个 体体大大小小腹腹 片片6 64 4腹背部条纹腹背部条纹5 53 3腹部末端腹部末端尖尖圆圆性性 梳梳无无有有野生型野生型体色灰体色灰眼色砖红，饱满，圆形眼色砖红，饱满，圆形刚毛平直，先端略弯刚毛平直，先端略弯长翅，长度约为腹部长度的两倍；长翅，长度约为腹部长度的两倍；圆卵型，静止时平放交叉重叠；圆卵型，静止时平放交叉重叠；翅翅膀有横隔脉膀有横隔脉4.果蝇观察：果蝇观察：突变性状的鉴别突变性状的鉴别影响部位影响部位突变名称突变名称性状特征性状特征基因符号基因符号染色体染色体翅形翅形残翅残翅翅退化，部分残留翅退化，部分残留vg短短翅翅翅翅短，与腹部等长短，与腹部等长m(X)匙匙翅翅翅小似勺翅小似勺nub2翘翅翘翅翅后翻翅后翻cy眼眼白眼白眼复眼白色复眼白色w(X)棒眼棒眼复眼棒状复眼棒状B(X)体色体色黑檀体黑檀体体色黑亮体色黑亮e 黑体黑体体色黑，比体色黑，比e深深b黄体黄体体色浅橙黄色体色浅橙黄色y(X)刚毛刚毛焦刚毛焦刚毛刚毛卷曲刚毛卷曲sn3(X)叉刚毛叉刚毛刚毛近中部分叉刚毛近中部分叉f(X)果蝇突变体果蝇突变体眼色眼色眼睛形状眼睛形状背部颜色背部颜色翅形状翅形状果蝇突变体果蝇突变体突变型性状观察：突变型性状观察：4 4、5 5、6 6、7 7、1818、2222、2525、e e5.果蝇性状观察结果记录果蝇性状观察结果记录编号体色眼色翅长短 翅形 刚毛6.果蝇生活史的观察果蝇生活史的观察尚雨桐尚雨桐郑超郑超实验二实验二果蝇杂交实验的设计果蝇杂交实验的设计伴性遗传的验证伴性遗传的验证2.正确认识伴性遗传与非伴性遗传的区别以及正确认识伴性遗传与非伴性遗传的区别以及伴性基因在正反交中的差异。伴性基因在正反交中的差异。一一目的要求目的要求1.进一步掌握伴性遗传的原理、规律和特点。进一步掌握伴性遗传的原理、规律和特点。果蝇性染色体为果蝇性染色体为XYXY型。型。雌果蝇为雌果蝇为XXXX同配性别；雄果蝇为同配性别；雄果蝇为XYXY异配性别。异配性别。性染色体上的基因在遗传过程中，性状遗传总是和性别性染色体上的基因在遗传过程中，性状遗传总是和性别相联系，因此，把性染色体上的基因遗传叫伴性遗传。相联系，因此，把性染色体上的基因遗传叫伴性遗传。二二实验原理实验原理黑腹果蝇黑腹果蝇品系：品系：选一对形状的选一对形状的野生型野生型突变型突变型三 实验材料实验材料影响部位影响部位突变名称突变名称性状特征性状特征基因符号基因符号染色体染色体翅形翅形残翅残翅翅退化，部分残留翅退化，部分残留vg短短翅翅翅翅短，与腹部等长短，与腹部等长m(X)匙匙翅翅翅小似勺翅小似勺nub2翘翅翘翅翅后翻翅后翻cy眼眼白眼白眼复眼白色复眼白色w(X)棒眼棒眼复眼棒状复眼棒状B(X)体色体色黑檀体黑檀体体色黑亮体色黑亮e 黑体黑体体色黑，比体色黑，比e深深b黄体黄体体色浅橙黄色体色浅橙黄色y(X)刚毛刚毛焦刚毛焦刚毛刚毛卷曲刚毛卷曲sn3(X)叉刚毛叉刚毛刚毛近中部分叉刚毛近中部分叉f(X)果蝇接种方法果蝇接种方法接种：用毛笔扫到平放的培养瓶内，避免沾在接种：用毛笔扫到平放的培养瓶内，避免沾在培养基上，果蝇醒后再将培养瓶直立。培养基上，果蝇醒后再将培养瓶直立。麻醉果蝇：勿麻醉至死麻醉果蝇：勿麻醉至死四四操作步骤操作步骤1.果蝇亲本的饲养果蝇亲本的饲养江南江南2瓶瓶/小组小组 杂交亲本培养杂交亲本培养野生型野生型1瓶瓶突变型突变型1瓶瓶贴上标签，做好标记贴上标签，做好标记果蝇恢复后果蝇恢复后,20-25oC统一培养统一培养1.果蝇亲本的饲养果蝇亲本的饲养成虫至新瓶培养成虫至新瓶培养2.选择杂交亲本：处女蝇与雄蝇选择杂交亲本：处女蝇与雄蝇雌果蝇雌果蝇：受精囊可保存交配所得的大量的精子。受精囊可保存交配所得的大量的精子。处女蝇处女蝇：可保证杂交实验结果的可靠性。可保证杂交实验结果的可靠性。挑选原理挑选原理：羽化开始羽化开始1010小时之内尚未成熟，无交配能力。小时之内尚未成熟，无交配能力。挑选方法挑选方法：除去全部成虫，收集除去全部成虫，收集1010小时之内羽化的新果蝇。小时之内羽化的新果蝇。验证方法验证方法：处女蝇单独培养，处女蝇单独培养，3 3天后看是否产卵。天后看是否产卵。具体步骤：具体步骤：挑处女蝇挑处女蝇野生型和突变型各野生型和突变型各5-10只只挑雄蝇挑雄蝇野生型和突变型各野生型和突变型各5-10只只杂交实验的早晨杂交实验的早晨实验开始之前实验开始之前9-10小时小时保证足够量用于杂交保证足够量用于杂交唾腺染色体唾腺染色体(2周周)(3周周)3.果蝇正反交实验果蝇正反交实验正交：野生型（正交：野生型（）突变型（突变型（）反交：突变型（反交：突变型（）野生型（野生型（）5-10对处女蝇与雄果蝇对处女蝇与雄果蝇/杂交杂交贴上标签，做好标记贴上标签，做好标记4.4.去亲本去亲本5.F15.F1代性状观察代性状观察20-25oC统一培养统一培养7-87-8天后，除去成虫，防止因亲本与天后，除去成虫，防止因亲本与F1F1代混杂代混杂而影响实验效果而影响实验效果F1F1代羽化，计数并观察代羽化，计数并观察F1F1代性状代性状2瓶瓶/小组小组每隔每隔2 2天统计一次，累积天统计一次，累积6-76-7天数据天数据(3周周)(4周周)(5周周)6.F16.F1代自交代自交7.7.去去F1F1代代8.F28.F2代性状观察代性状观察7-87-8天后，除去成虫，防止因天后，除去成虫，防止因F1F1代与代与F2F2代混杂而代混杂而影响实验效果影响实验效果F2F2代羽化，计数并观察代羽化，计数并观察F2F2代性状代性状注意：验证伴性遗传注意：验证伴性遗传挑选反交挑选反交F1代代5-10对转入新培养瓶杂交对转入新培养瓶杂交贴上标签，做好标记贴上标签，做好标记20-25oC统一培养统一培养挑选正交挑选正交F1代代5-10对转入新培养瓶杂交对转入新培养瓶杂交不需处女蝇不需处女蝇每隔每隔2 2天统计一次，累积天统计一次，累积6-76-7天数据天数据(5周周)(6周周)(7周周)正交实验正交实验F1F1代果蝇数量统计结果表代果蝇数量统计结果表 观察结果观察结果统计日期统计日期各类果蝇的数量各类果蝇的数量野生性状野生性状（）野生性状野生性状（）突变性状突变性状（）突变性状突变性状（）预期结果预期结果反交实验反交实验F1F1代果蝇数量统计结果代果蝇数量统计结果表表注意分析实验结果！注意分析实验结果！温馨提示：决定性状的基因在性染色体上，温馨提示：决定性状的基因在性染色体上，正反交的结果会出现性状和性别的差异。正反交的结果会出现性状和性别的差异。