液相色谱应用教程.pptx

怎样用好高效液相色谱福立分析仪器有限公司液 相 色 谱 仪 的 使 用液相色谱仪的正确连接液相色谱仪的正确连接常见的液相色谱仪问题色谱峰加宽分辨率低裂峰柱压比预期值高液 相 色 谱 仪 的 使 用正确连接液相色谱仪系统可使用户受益，原因如下：相对比较便宜不需要花费大量的时间系统中大多数流体连接均易于检修通常有助于避免不必要的硬件替换接头对正确连接至关重要，因此知道接头的一些基本特点也很重要。液相色谱仪的正确连接液相色谱仪的正确连接液 相 色 谱 仪 的 使 用液相色谱仪的正确连接液相色谱仪的正确连接接头的普通特征螺纹（10-32，-28，M6x1）管道外径（1/16”、1/32”、1/8”）端口几何形状（锥形、平底）管套直径接头要素液 相 色 谱 仪 的 使 用液相色谱仪的正确连接液相色谱仪的正确连接套圈固定管道，并且始终以相同方式固定用力按入圆锥形端口，如下图所示套圈锥度（或角度）端口锥度（或角度）接头要素液 相 色 谱 仪 的 使 用液相色谱仪的正确连接液相色谱仪的正确连接然后在套圈接触内套处压紧管壁。接头要素液 相 色 谱 仪 的 使 用液相色谱仪的正确连接液相色谱仪的正确连接通用端口有以下特征：螺纹管道尺寸内部几何形状但并非所有的接头都是通用的!接头要素液 相 色 谱 仪 的 使 用液相色谱仪的正确连接液相色谱仪的正确连接接头要素管套的深度并非通用!即使是最好的接头，如果不正确使用也会产生许多问题。为什么会出现问题？液 相 色 谱 仪 的 使 用液相色谱仪的正确连接液相色谱仪的正确连接接头要素以下示例解释了不匹配的接头导致多种色谱法问题的原因：如果前端太长，套圈如果前端太长，套圈如果前端太长，套圈如果前端太长，套圈不能密封不能密封不能密封不能密封因而会因而会因而会因而会发生泄漏发生泄漏发生泄漏发生泄漏如果前端太短，套圈如果前端太短，套圈如果前端太短，套圈如果前端太短，套圈可以密封可以密封可以密封可以密封但是将但是将但是将但是将会导致会导致会导致会导致无效空间无效空间无效空间无效空间和混和混和混和混合的发生合的发生合的发生合的发生液 相 色 谱 仪 的 使 用接头要素液相色谱仪的正确连接液相色谱仪的正确连接连接出现泄漏后将会引发以下问题：系统压力损失注射假象（鬼峰）出现混合室（死体积）将会引发以下问题：色谱峰加宽分辨率减低显著残留裂峰引发色谱法问题的原因很多时，接头不匹配或使用不当将引发色谱法问题的原因很多时，接头不匹配或使用不当将可能导致液相色谱仪的所有主要问题发生可能导致液相色谱仪的所有主要问题发生!液 相 色 谱 仪 的 使 用接头要素液相色谱仪的正确连接液相色谱仪的正确连接选择匹配的接头时，应首先清楚以下问题：使用的端口螺纹类型（例如，10-32、-28 等。）使用的端口几何尺寸（例如，锥形或平底）所需连接的管道外径（例如，1/16”，1/8”）是否可以手动紧固连接接头应与哪些化学药品兼容接头应该承受多大压力液 相 色 谱 仪 的 使 用管道要素液相色谱仪的正确连接液相色谱仪的正确连接关于液相色谱仪中的管道，以下三个要素必须考虑：管道的正确型号管道的最有效尺寸切割管道的合适工具如果想获取最好的色谱法效果，必须考虑这三个方面！液 相 色 谱 仪 的 使 用管道要素液相色谱仪的正确连接液相色谱仪的正确连接如果您想选择适合应用需要的管道类型，请考虑以下问题：管道在系统中的使用位置哪种管道材料能够实现最好的兼容性产生多少压力可提供多种不同类型的管道高压管道：不锈钢、PEEK、Radel R、PEEKsil等。低压管道:Teflon FEP、Teflon PFA、Tefzel等。液 相 色 谱 仪 的 使 用管道要素液相色谱仪的正确连接液相色谱仪的正确连接选择合适的管道尺寸时，请考虑以下问题：接受端口需要什么尺寸的管道？流速多少？管道将会产生多大压力？接头提供的管道尺寸是多少？请始终注意-高压管道最常见的尺寸为：1/16”OD x.010”ID-低压管道最常见的尺寸为：1/8”OD x 1/16”ID液 相 色 谱 仪 的 使 用管道要素液相色谱仪的正确连接液相色谱仪的正确连接这是系统低压、这是系统低压、这是系统低压、这是系统低压、高流量区域。高流量区域。高流量区域。高流量区域。这是系统高压、这是系统高压、这是系统高压、这是系统高压、低流量区域。低流量区域。低流量区域。低流量区域。这是系统低压、这是系统低压、这是系统低压、这是系统低压、低流量区域。低流量区域。低流量区域。低流量区域。液 相 色 谱 仪 的 使 用管道要素液相色谱仪的正确连接液相色谱仪的正确连接在具体应用中，仅仅选择合适的管道类型和正确的管道尺寸还远远不够，但是如果管道切割不当，那么结果可能仍不理想。液 相 色 谱 仪 的 使 用管道要素液相色谱仪的正确连接液相色谱仪的正确连接正确的切割技术确实能影响色谱法的质量 不正确切割不正确切割 正确切割正确切割液 相 色 谱 仪 的 使 用液相色谱仪的正确连接液相色谱仪的正确连接储液器和泵之间的管道连接管道通常用Teflon材料制造，尺寸为1/8”OD x 1/16”ID。将管道连接至泵上的接头通常为-28螺纹，平底几何形状。泵和检测器之间的管道连接管道通常用PEEK聚合体或不锈钢材料制造，尺寸为：1/16”OD x.010”ID 或稍小。将管道连接至系统部件上的接头通常为10-32 螺纹，锥形几何形状。检测器之后的管道连接管道通常用Teflon材料制造，尺寸为1/16”OD选择正确接头和管道的一般准则液 相 色 谱 仪 的 使 用液相色谱仪的正确连接液相色谱仪的正确连接管道内径的公英制换算内径体积内径体积英寸mmuL/cm英寸mmuL/cm0.0050.130.130.030.754.560.0070.180.250.041.008.110.010.250.510.0461.2010.720.020.52.03液 相 色 谱 仪 的 使 用液相色谱仪的正确连接液相色谱仪的正确连接HPLC系统不同部位的管道部位种类内径/mm长说明储液器泵聚四氟乙烯1.6随意能透氧泵进样器不锈钢管1.0随意进样器定量管不锈钢或PEEK视定量管体积而定进样器柱不锈钢管0.20.25尽量短柱检测器不锈钢或PEEK0.20.25尽量短检测器放空聚四氟乙烯或聚乙烯0.25随意需要时加长到1米，增加流过池出口压力液 相 色 谱 仪 的 使 用液相色谱仪的正确连接液相色谱仪的正确连接不同色谱柱的管道使用指南色谱柱/(1mL/min)不同内径(mm)管柱外峰宽效应5时最大长度/cm柱长(mm)内径(mm)填料粒度um塔板数0.18mm0.25mm0.5mm334.6344002298504.63667733148 1004.6313333672781504.65120001676882504.652000027811482502.0520000502082501.05200001288液 相 色 谱 分 析 分析型液相色谱分析型液相色谱定性及定量分析 a.灵敏度的要求 b.样品的复杂性 c.样品量的要求 d.精度及准确度的要求 e.容易使用液 相 色 谱 分 析 制备型液相色谱制备型液相色谱分离及纯化 a.化合物的稳定性 b.样品的复杂性 c.制备量的要求 d.纯度的要求及纯度的鉴定 e.方法的安全性液 相 色 谱 分 析Q：需要什么样的分离结果？A：分辨率高。液 相 色 谱 分 析什么是色谱的分辨率？什么是色谱的分辨率？分辨率R的公式：液 相 色 谱 分 析影响分辨率的因素：影响分辨率的因素：K K，a a，N N分辨率的方程：K是容量因子，表达了样品与填料的作用强弱。a是选择性系数，描述两化合物分离的好坏程度，是化学因素。N是理论塔板数，描述色谱峰的谱带展宽程度。液 相 色 谱 分 析色谱柱的柱效色谱柱的柱效N N理论塔板数计算公式：液 相 色 谱 分 析提高柱效的方法提高柱效的方法色谱柱本身减小填料的颗粒度找到最佳的流速（根据不同的内径）合适的温度降低溶剂的粘度增加柱长液 相 色 谱 分 析其他影响柱效的因素其他影响柱效的因素柱外效应连接管路进样器检测器进样体积样品浓度液 相 色 谱 分 析容量因子容量因子K K与峰高的关系 与R的关系改变K值的方法：调节流动相的极性、pH、离子强度等梯度淋洗k=(tR-t0)/t0液 相 色 谱 分 析选择性系数选择性系数a a定义：a1时两组分分不开，改变a的途径：改变流动相改变固定相改变温度改变样品的本身性质液 相 色 谱 分 析a a、K K、N N 如何控制分辨率如何控制分辨率 原始分离状态改变 K 后改变 a 后改变 N 后液 相 色 谱 分 析 分析方法建立的实例等度分析等度分析色谱柱：C18，4mm30mm流动相：乙腈/水，不同的溶剂强度，60/40、50/50、40/60，由强渐弱流速：2ml/min.样品：对羟基苯甲酸甲酯(Methyl Paraben)对羟基苯甲酸丙酯(Propyl Paraben)对羟基苯甲酸丁酯(Butyl Paraben)液 相 色 谱 分 析 分析方法建立的实例改变容量因子 K液 相 色 谱 分 析 分析方法建立的实例改变选择性a通过改变流动相改变选择性同样强度的不同溶剂改变色谱柱1231THF/H2O 28:722MeOH/H2O 58:423CH3CN/H2O 38:62液 相 色 谱 分 析 分析方法建立的实例梯度方法的建立梯度洗脱的特点优点单位时间的分离能力增加检测灵敏度提高缺点仪器设备要求高不适合某些检测方式柱需再生定量分析的重复性较低分析时间长液 相 色 谱 分 析 分析方法建立的实例梯度的洗脱方式高压梯度及低压梯度溶剂 A溶剂 B泵 A泵 B混合器A 高压梯度溶剂 A泵溶剂 B比例阀（溶剂混合点）混合器B 低压梯度（溶剂混合点）液 相 色 谱 分 析 分析方法建立的实例梯度洗脱的可变参数A及B(可能还有C和D液)的成分和化学特性梯度的陡度梯度的变化形状液 相 色 谱 分 析 分析方法建立的实例如不用梯度：分离不理想液 相 色 谱 分 析 分析方法建立的实例梯度条件的优化液 相 色 谱 分 析 分析方法建立的实例梯度曲线的变化凹线液 相 色 谱 分 析 分析方法建立的实例梯度曲线的变化凸线液 相 色 谱 分 析 分析方法建立的实例梯度平衡时间的影响（一）10分钟的梯度，6分钟的平衡时间色谱图不重复液 相 色 谱 分 析 分析方法建立的实例梯度平衡时间的影响（二）平衡时间6分钟平衡时间7分钟平衡时间8分钟平衡时间9分钟平衡时间从6到7分钟，第一个峰的保留时间有明显的变化，说明6到7分钟的平衡时间不足，而8到9分钟变化不大因而大于这个时间时，平衡充足。