液相色谱仪器.pptx

高效液相色谱仪器美国美国AgilentAgilent美国美国WatersWaters美国戴安美国戴安日本岛津日本岛津美国美国VARIANVARIAN 日本岛津日本岛津德国诺尔德国诺尔美国美国美国美国LabTechLabTechLabTechLabTech大连依利特大连依利特进样前准备进样前准备样品过滤样品过滤一次性注射器针式（头）过滤器样品瓶1、注意滤膜种类（有机/水系）2、混合后抽滤注意有机相可能比例变小保留时间变大，分离效果变化（特别滤的很慢时）。Agilent1100在线脱气机在线脱气机戴安的注意正相色谱时用的材料不一样。Authoring Division Name File NameSecurity Notice(if required)PurgevalveMotorwithEncoderOutletBallValveActiveInletValve泵的基本原理泵的基本原理串联泵往复活塞泵(单向阀)弹簧隔板/红宝石球串联柱塞泵消除流量脉冲 并联柱塞泵减小流量脉冲 低压四元泵低压四元泵Agilent 1100 Agilent 1100 四元泵工作原理四元泵工作原理DamperPurgevalveMixerABInletvalveOutletvalveWasteInletvalveOutletvalve复式二元泵工作原理（串联单复式二元泵工作原理（串联单泵组合成高压二元）泵组合成高压二元）WatersWaters仪器：手动进样器仪器：手动进样器-六通阀六通阀/定量环定量环手动进样器工作原理手动进样器工作原理 装填状态装填状态样品注入样品注入手动进样器手动进样器满环进样：应3倍以上体积，保证重现性。六通阀滑片（显示沟槽）机械手样品盘仪器：自动进样器仪器：自动进样器自动进样器结构自动进样器结构自动进样器工作原理自动进样器工作原理泵柱子 柱温箱外挂架色谱柱：柱温箱、色谱柱外挂架色谱柱：柱温箱、色谱柱外挂架物理性质物理性质硅胶纯度硅胶纯度色谱柱尺寸色谱柱尺寸颗粒形状颗粒形状粒径粒径表面积表面积孔径孔径键合类型键合类型碳覆盖率碳覆盖率封端封端化学性质化学性质固定相固定相-填充材料填充材料物理性质物理性质硅胶纯度硅胶纯度色谱柱尺寸色谱柱尺寸颗粒形状颗粒形状粒径粒径表面积表面积孔径孔径填料硅胶的纯度填料硅胶的纯度与残留金属离子浓度与残留金属离子浓度固定相固定相-填充材料填充材料键合类型键合类型碳覆盖率碳覆盖率封端封端化学性质化学性质固定相固定相-填充材料填充材料固定相固定相-填充材料填充材料仪器：检测器仪器：检测器UV/Vis双灯，全波长检测检测器流路仪器：检测器仪器：检测器-紫外紫外反射镜反射镜1反射镜反射镜2氘灯氘灯光源透镜光源透镜滤光片（钬玻璃滤光片（钬玻璃/遮光）遮光）入射狭缝入射狭缝光栅光栅分光器分光器参比光电二极管参比光电二极管数模转换板数模转换板样品光电二极管样品光电二极管数模转换板数模转换板流通池流通池紫外检测器工作原理紫外检测器工作原理Agilent 1100 可变波长紫外检测器可变波长紫外检测器(G1314A)DAD紫外检测器紫外检测器(G1315B)荧光检测器荧光检测器蒸发光检测器蒸发光检测器质谱检测器质谱检测器高效液相色谱中常遇见的问题及处理方法高效液相色谱中常遇见的问题及处理方法 一、一、保留时间变化保留时间变化1.1.柱温变化柱温变化2.2.等度与梯度间未能充分平衡等度与梯度间未能充分平衡3.3.缓冲液容量不够缓冲液容量不够4.4.柱污染柱污染5.5.流动相组成变化流动相组成变化6.6.柱快达到寿命柱快达到寿命1.1.柱恒温柱恒温2.2.至少用至少用1010倍柱体积的流动相平衡柱倍柱体积的流动相平衡柱3.3.用用25mmol/L25mmol/L的缓冲液（的缓冲液（*中药少用）中药少用）4.4.每天冲洗柱每天冲洗柱5.5.防止流动相蒸发或盐沉淀在比例阀防止流动相蒸发或盐沉淀在比例阀6、采用保护柱采用保护柱二、二、保留时间缩短保留时间缩短 1.1.流速增加流速增加2.2.样品超载样品超载3.3.键合相流失键合相流失4.4.流动相组成变化流动相组成变化5.5.温度增高不稳温度增高不稳1.1.检查泵检查泵,重新设定流速重新设定流速2.2.降低样品量降低样品量3.3.流动相流动相PHPH值保持在值保持在3 37.57.5 检查柱的方向检查柱的方向4.4.防防止止流流动动相相蒸蒸发发或或盐盐沉沉淀淀在在比比例阀例阀5.5.柱恒温柱恒温三、三、保留时间延长保留时间延长 1.1.流速下降流速下降2.2.硅胶柱上活性点变化硅胶柱上活性点变化3.3.键合相流失键合相流失4.4.流动相组成变化流动相组成变化5.5.温度降低温度降低1.1.管路泄漏管路泄漏,更换泵密封圈更换泵密封圈,排除泵内气泡排除泵内气泡2.2.用用流流动动相相改改性性剂剂,如如加加三三乙乙胺胺,或或采采用用碱碱至钝化柱至钝化柱3.3.流动相流动相PHPH值保持在值保持在37.537.5检查柱的方向检查柱的方向4.4.防止流动相蒸发或沉淀防止流动相蒸发或沉淀5.5.柱恒温柱恒温四四、出现肩峰或分叉出现肩峰或分叉 1.1.样品体积过大样品体积过大2.2.样品溶剂过强样品溶剂过强3.3.柱柱塌塌陷陷或或形形成成微微小小涡涡流流通道通道4.4.柱内烧结不锈钢失效柱内烧结不锈钢失效5.5.进样器损坏进样器损坏五、五、鬼峰鬼峰 1.1.进样阀残余峰进样阀残余峰2.2.样品中未知物样品中未知物3.3.柱未平衡柱未平衡4.4.三氟乙酸三氟乙酸(TFA)(TFA)氧化氧化(肽谱肽谱)5.5.水污染水污染(反相反相)1.1.每每次次用用后后用用强强溶溶剂剂清清洗洗阀阀,改改进进阀阀和和样样品的清洗品的清洗2.2.处理样品处理样品3.3.重重新新平平衡衡柱柱,用用流流动动相相作作样样品品溶溶剂剂 (尤尤其其是离子对色谱是离子对色谱)4.4.每天新配每天新配,用抗氧化剂用抗氧化剂5.5.通通过过变变化化平平衡衡时时间间检检查查水水质质量量，用用HPLCHPLC级的水级的水六、六、基线噪声基线噪声 1.1.气泡气泡(尖锐峰尖锐峰)2.2.污染污染(随机噪声随机噪声)3.3.检测器灯连续噪声检测器灯连续噪声4.4.电干扰电干扰(偶然噪声偶然噪声)5.5.检测器中有气泡检测器中有气泡1.1.流动相脱气流动相脱气,加柱后背压加柱后背压2.2.清洗柱清洗柱,净化样品净化样品,用用HPLCHPLC级试剂级试剂3.3.更换氘灯更换氘灯4.4.采采用用稳稳压压电电源源,检检查查干干扰扰的的来来源源(如如水浴等水浴等)5.5.流动相脱气流动相脱气,加柱后背压加柱后背压七、七、峰拖尾峰拖尾 1.1.柱超载柱超载2.2.峰干扰峰干扰3.3.硅羟基作用硅羟基作用4.4.柱内烧结不锈钢失效柱内烧结不锈钢失效5.5.柱塌陷或形成短路通道柱塌陷或形成短路通道6.6.死体积或柱外体积过大死体积或柱外体积过大7.7.柱效下降柱效下降八、八、峰展宽峰展宽 1.1.进样体积过大进样体积过大2.2.在进样阀中造成峰扩展在进样阀中造成峰扩展3.3.数据系统采样速率太慢数据系统采样速率太慢4.4.检测器时间常数过大检测器时间常数过大1.1.用用流流动动相相配配样样,总总的的样样品品体体积积小小于第一峰的于第一峰的15%15%2.2.进样前后排出气泡以降低扩散进样前后排出气泡以降低扩散3.3.设定速率应是每峰大于设定速率应是每峰大于1010点点4.4.设设定定时时间间常常数数为为感感兴兴趣趣第第一一峰峰半半宽的宽的10%10%八、八、峰展宽峰展宽5.5.流动相粘度过高流动相粘度过高6.6.检测池体积过大检测池体积过大7.7.保留时间过长保留时间过长8.8.柱外体积过大柱外体积过大9.9.样品过载样品过载5.5.增加柱温增加柱温,采用低粘度流动相采用低粘度流动相6.6.用小体积池用小体积池,卸下热交换器卸下热交换器7.7.等度洗脱时增加溶剂含量也可用梯度洗脱等度洗脱时增加溶剂含量也可用梯度洗脱8.8.将连接管径和连接管长度降至最小将连接管径和连接管长度降至最小9.9.进小浓度小体积样品进小浓度小体积样品n1.3 流动相反相色谱系统的流动相首选甲醇-水系统(采用紫外末端波长检测时，首选n乙腈-水系统），如经试用不适合时，再选用其他溶剂系统。应尽可能少用含有缓冲液的流n动相，必须使用时，应尽可能选用含较低浓度缓冲液的流动相。由于C 18链在水相环境中不n易保持伸展状态，故对于十八烷基硅烷键合硅胶为固定相的反相色谱系统，流动相中有机n溶剂的比例通常应不低于5%,否则C 18链的随机卷曲将导致组分保留值变化，造成色谱系n统不稳定。药典附录规定n各品种项下规定的条件除固定相种类、流动相组分、检测器类型不得改变外，其余如色谱n柱内径、长度、载体粒度、流动相流速、混合流动相各组分的比例、柱温、进样量、检测器的灵敏n度等，均可适当改变，以适应供试品并达到系统适用性试验的要求。其中，调整流动相组分比n例时，以组分比例较低者（小于或等于5 0%)相对改变量不超过 3 0%且绝对改变量不超过n 1 0%为限，如3 0%相对改变量的数值超过1 0%时，则改变量以土 1 0%为限。n对于必须使用特定牌号的填充剂方能满足分离要求的品种，可在该品种项下注明。