制片方法及准备工作.pptx

内容简介内容简介植物制片的方法及准备工作植物制片的方法及准备工作石蜡法制作原理与方法石蜡法制作原理与方法其他制片方法其他制片方法植物显微化学制片植物显微化学制片半薄切片和超薄切片半薄切片和超薄切片显微镜的主要光学部件及性能显微镜的主要光学部件及性能各类显微镜简介各类显微镜简介几种显微技术的应用几种显微技术的应用显微摄影技术显微摄影技术研究论文题目：研究论文题目：1几种常绿植物（海桐、洋玉兰、冬青卫矛、桂花、黄杨几种常绿植物（海桐、洋玉兰、冬青卫矛、桂花、黄杨等）叶片解剖结构研究等）叶片解剖结构研究2几种药用植物（地黄、黄精、丹参、乌头、麦冬等）肉几种药用植物（地黄、黄精、丹参、乌头、麦冬等）肉质根解剖结构特征质根解剖结构特征 及其增粗生长机理研究及其增粗生长机理研究3变态器官萝卜、胡萝卜、生姜、莲藕等解剖结构研究变态器官萝卜、胡萝卜、生姜、莲藕等解剖结构研究4松属植物（雪松、白皮松、油松、华山松等）表皮特征松属植物（雪松、白皮松、油松、华山松等）表皮特征及叶片解剖结构研究及叶片解剖结构研究5蔷薇科李属植物（日本樱花、晚樱、红叶李、碧桃）腺蔷薇科李属植物（日本樱花、晚樱、红叶李、碧桃）腺体结构特征研究体结构特征研究第一章第一章 植物制片的方法及准备工作植物制片的方法及准备工作 植物制片的方法植物制片的方法 切片法切片法 用切片刀或刀片将各种组织切成用切片刀或刀片将各种组织切成薄片制成玻片标本的方法。薄片制成玻片标本的方法。1.徒手切片法徒手切片法 2.石蜡切片法石蜡切片法（切片厚度（切片厚度8-10m m）3.火棉胶切片法火棉胶切片法 4.冰冻切片法冰冻切片法 5.滑走切片法滑走切片法 6.半薄切片法半薄切片法（切片厚度（切片厚度1-2m）7.超薄切片法（切片厚度超薄切片法（切片厚度50-60nm）非切片法非切片法 将小形植物体或较大植物将小形植物体或较大植物体的一部分或其组织，不用刀切成薄片体的一部分或其组织，不用刀切成薄片而制成玻片标本的方法。而制成玻片标本的方法。1.整体装片法整体装片法 2.涂片法涂片法 3.压片法压片法 4.平铺法平铺法 5.离析法离析法 6.扫描电镜样品制备扫描电镜样品制备 制片前的准备工作制片前的准备工作 l制片用的主要设备制片用的主要设备 1、显微镜、显微镜 2、石蜡包埋工具、石蜡包埋工具恒温箱恒温箱 用于浸蜡、烤片及染色加温等。用于浸蜡、烤片及染色加温等。包包埋埋箱箱(熔熔蜡蜡箱箱)用用于于浸浸蜡蜡、包包埋埋。温温度度调节在调节在60。3、切片工具、切片工具 旋转切片机旋转切片机 滑走切片机滑走切片机 冰冻切片机冰冻切片机 超薄切片机超薄切片机1、旋转切片机、旋转切片机2、滑走切片机、滑走切片机2、滑走切片机、滑走切片机4、冰冰冻冻切切片片机机5、超薄切片机、超薄切片机6、切片刀及其附件、切片刀及其附件 7、自动磨刀机、自动磨刀机 8、染色工具、染色工具染色缸染色缸 立立式式染染色色缸缸卧式染色缸卧式染色缸染色皿染色皿9、载玻片和盖玻片、载玻片和盖玻片 载玻片的规格载玻片的规格 7626mm，厚度：，厚度：11.2 mm。盖玻片的规格盖玻片的规格 方形方形：1818 mm，2020mm，2222mm，2424mm。长盖玻片长盖玻片:5024 mm或或60 24mm。厚度：厚度：0.130.17mm。盖玻片规格盖玻片规格小型真空泵小型真空泵10、真空泵、真空泵 用于抽出材料中的气体。用于抽出材料中的气体。11、电热温台电热温台 将要配制的酒将要配制的酒精浓度（精浓度（%）量取量取95%95%酒精酒精的量（的量（mlml）应加蒸馏水的应加蒸馏水的量（量（mlml）30306550504570702580801585851090905l常用溶液的配制常用溶液的配制 各级酒精浓度的配各级酒精浓度的配制低浓度溶液的配制低浓度溶液的配制 1%1%番红水溶液的配制：番红水溶液的配制：1g1g番红溶番红溶于于100 ml100 ml蒸馏水中。蒸馏水中。0.1%0.1%固绿酒精溶液的配制：固绿酒精溶液的配制：0.1g0.1g固绿溶于固绿溶于100 ml95%100 ml95%的酒精溶液中。的酒精溶液中。第二章第二章 石蜡法制片原理与方法石蜡法制片原理与方法 材料的选择、采集与分割材料的选择、采集与分割 取样前应注意的问题取样前应注意的问题 1.1.研究正常结构时，应选择健全而具有代表研究正常结构时，应选择健全而具有代表性的部位取材；采取病理材料时，除取其病变性的部位取材；采取病理材料时，除取其病变的部位外，还应从病变的中央部分向四周，连的部位外，还应从病变的中央部分向四周，连同正常组织一起采取，以利观察分析。同正常组织一起采取，以利观察分析。2.2.采取标本前，要根据制片的要求，选择并采取标本前，要根据制片的要求，选择并配制固定液，取材后应立即投入固定液，以防配制固定液，取材后应立即投入固定液，以防组织自溶和腐败。组织自溶和腐败。3.3.切取材料时，刀必须锐利，动作要快但切取材料时，刀必须锐利，动作要快但要仔细，切割时切勿拉锯式的来回切取，镊要仔细，切割时切勿拉锯式的来回切取，镊取时须轻夹轻放，尽量不损伤材料。取时须轻夹轻放，尽量不损伤材料。4.4.材料尽可能新鲜，并切成所需的大小。材料尽可能新鲜，并切成所需的大小。这样有利于固定液的透入。这样有利于固定液的透入。5 5取材时要详细记录日期、采集地点、取材时要详细记录日期、采集地点、标本名称、时期、取材部位、断面和固定液标本名称、时期、取材部位、断面和固定液等。等。样品采集与分割样品采集与分割 1 1、叶、叶取样部位取样部位取样部位取样部位玉玉米米叶叶2、根、根主根主根侧根侧根不定根不定根一级侧根一级侧根二级侧根二级侧根根根尖尖分分区区根的初生构造根的初生构造有丝分裂、核型有丝分裂、核型分析分析3、茎、茎4、花、花花药的发育花药的发育孢原细胞孢原细胞胚囊的发育胚囊的发育单核胚囊单核胚囊第一次有丝分裂第一次有丝分裂二核胚囊二核胚囊第二次有丝分裂第二次有丝分裂四核胚囊四核胚囊八核胚囊八核胚囊植物材料的分割植物材料的分割 材料的固定材料的固定 固定的目的和作用固定的目的和作用 1.防止组织自溶和腐败防止组织自溶和腐败 2.使使细细胞胞内内的的蛋蛋白白质质、糖糖、脂脂肪肪等等各各种种成成分分沉沉淀淀保保存存下下来来，从从而而保保存存细细胞胞的的各各种种组组成成成成分分、形形态和结构。态和结构。3.使使细细胞胞内内不不同同的的成成分分产产生生不不同同的的折折光光率率造造成成光光学学上上的的差差异异，使使原原来来在在生生活活情情况况下下看看不不清清楚楚的结构变得清晰易见。的结构变得清晰易见。4.有有的的固固定定剂剂有有助助染染作作用用(如如醋醋酸酸、苦苦味味酸酸)，从从而使细胞各部分易于染色；而使细胞各部分易于染色；5.固固定定剂剂还还兼兼有有硬硬化化作作用用，使使柔柔软软组组织织硬硬化化而而不易变形，有利于操作。不易变形，有利于操作。固定液的选择固定液的选择 选择固定液时，必须符合下列条件：选择固定液时，必须符合下列条件：1.1.能能迅迅速速杀杀死死细细胞胞，使使细细胞胞内内的的成成分分凝凝固固或或沉沉淀淀，从而使细胞的形态、结构和成分不发生变化。从而使细胞的形态、结构和成分不发生变化。2.2.必必须须具具有有快快的的渗渗透透速速度度，使使组组织织内内、外外迅迅速速固固定。定。3.3.对对组组织织细细胞胞尽尽可可能能不不发发生生收收缩缩或或膨膨胀胀现现象象，以以及不产生人为的产物。及不产生人为的产物。4.4.能增加细胞内各结构的折光率，易于鉴别。能增加细胞内各结构的折光率，易于鉴别。5.5.能能使使组组织织变变硬硬，适适于于切切片片，但但又又不不致致使使材材料料变变得太硬而松脆。得太硬而松脆。6.6.是良好的保存剂，便于材料的保存。是良好的保存剂，便于材料的保存。固定时的注意事项固定时的注意事项 1.固定的材料越新鲜越好。固定的材料越新鲜越好。2.材料与固定液的比例以材料与固定液的比例以1：20为准。为准。3.根根据据材材料料的的性性质质和和制制片片的的目目的的选选择择固固定定液液，固定液一般是以临用前配制的为好。固定液一般是以临用前配制的为好。4.所所固固定定的的植植物物材材料料，若若表表面面有有毛毛茸茸或或其其它它不不易易穿穿透透的的物物质质，则则可可用用含含有有酒酒精精的的固固定定液液固定，如固定，如Carnoy液。液。5.含含有有气气泡泡的的材材料料投投入入固固定定液液后后，材材料料不不会会下沉，必须将气泡抽出，使材料下沉。下沉，必须将气泡抽出，使材料下沉。