凯式定氮法实验方法.pptx

凯氏定氮法凯氏定氮法：凯氏定氮法：仪器：仪器：硝化炉硝化炉 凯氏定氮仪凯氏定氮仪试剂：试剂：浓硫酸浓硫酸 0.5 mol/L 0.5 mol/L 盐酸盐酸 40%NaOH 40%NaOH 2%2%硼酸硼酸 粉末硫酸钾粉末硫酸钾-硫酸铜混合物（硫酸铜混合物（K2SO4:CuSO45H2O=3:K2SO4:CuSO45H2O=3:1 1）混合指示剂：由混合指示剂：由50 ml 0.1%50 ml 0.1%甲基蓝酒精溶液与甲基蓝酒精溶液与100 ml 0.1%100 ml 0.1%甲基红酒精溶液混合而成，酸色为紫红色，碱色为绿色甲基红酒精溶液混合而成，酸色为紫红色，碱色为绿色凯氏定氮法：凯氏定氮法：测定化合物或混合物中总氮量的一种方测定化合物或混合物中总氮量的一种方法。在有法。在有催化剂催化剂的条件下，用的条件下，用浓硫酸浓硫酸硝化样品将有机硝化样品将有机氮都转变成无机铵盐，然后在氮都转变成无机铵盐，然后在碱性条件碱性条件下将铵盐转化下将铵盐转化为氨，随水蒸气馏出并为过量的酸液吸收，再以为氨，随水蒸气馏出并为过量的酸液吸收，再以标准标准酸滴定酸滴定，就可计算出样品中的氮量。由于蛋白质含氮，就可计算出样品中的氮量。由于蛋白质含氮量比较恒定，可由其氮量计算蛋白质含量，故此法是量比较恒定，可由其氮量计算蛋白质含量，故此法是经典的蛋白质定量方法。经典的蛋白质定量方法。凯氏定氮法：凯氏定氮法：硝化：硝化：硝化炉硝化炉实验步骤：取实验步骤：取2ml2ml样液，加入到硝化管中，加入样液，加入到硝化管中，加入1.5g1.5g的催化剂的催化剂（K2SO4:CuSO45H2O=3:1K2SO4:CuSO45H2O=3:1），后在通风橱中进行操作。在），后在通风橱中进行操作。在消化管中加入放入浓硫酸消化管中加入放入浓硫酸6ml6ml消化至消化管内的液体呈现出澄清消化至消化管内的液体呈现出澄清的浅蓝色。去除消化管，将其冷却后定容到的浅蓝色。去除消化管，将其冷却后定容到50mL50mL容量瓶中。容量瓶中。在消化时，电压先调低，约在消化时，电压先调低，约100v100v左右，一小时后再调最大。直左右，一小时后再调最大。直到消化成绿色透明状。到消化成绿色透明状。硝化温度：硝化温度：300400300400 实验原理：被测的天然含氮有机物与浓硫酸共热时，其中的碳、实验原理：被测的天然含氮有机物与浓硫酸共热时，其中的碳、氢元素转变成氢元素转变成CO2CO2和和H2OH2O，而氮元素转变成氨，并进一步与硫酸，而氮元素转变成氨，并进一步与硫酸反应生成硫酸铵，此过程称为反应生成硫酸铵，此过程称为“消化消化”。消化时分解反应进行得。消化时分解反应进行得很慢，需要加入硫酸钾以提高沸点（可由很慢，需要加入硫酸钾以提高沸点（可由290290提高到提高到400400），），加入硫酸铜作为催化剂（其他氧化剂如加入硫酸铜作为催化剂（其他氧化剂如H2O2H2O2也可）。也可）。蒸馏：蒸馏：凯氏定氮仪凯氏定氮仪实验步骤：实验步骤：清洗凯氏定氮仪装置（重要）清洗凯氏定氮仪装置（重要）连接进水口与自来水管，打开水龙头。打开弹簧夹连接进水口与自来水管，打开水龙头。打开弹簧夹2 2，使水进，使水进入夹套至稍高于出水口，关闭弹簧夹入夹套至稍高于出水口，关闭弹簧夹2 2和和3 3，用酒精灯加热使蒸汽，用酒精灯加热使蒸汽通过进气口进入反应室进行洗涤，在冷凝管下口放一个盛有硼酸通过进气口进入反应室进行洗涤，在冷凝管下口放一个盛有硼酸-指示剂混合液的锥形瓶，冷凝管下端应完全浸没于液体中，洗涤指示剂混合液的锥形瓶，冷凝管下端应完全浸没于液体中，洗涤12 min12 min，观察锥形瓶中溶液是否变色，若基本不变色，证明蒸馏，观察锥形瓶中溶液是否变色，若基本不变色，证明蒸馏器已洗涤干净。将火移开，打开弹簧夹器已洗涤干净。将火移开，打开弹簧夹1 1，从加样漏斗加入少量蒸，从加样漏斗加入少量蒸馏水，关闭弹簧夹馏水，关闭弹簧夹1 1，由于夹套内温度降低使压力下降，可把反应，由于夹套内温度降低使压力下降，可把反应室内液体通过进气口吸出到夹套内。如此重复数次清洗反应室，室内液体通过进气口吸出到夹套内。如此重复数次清洗反应室，仪器即可使用。仪器即可使用。蒸馏：蒸馏：凯氏定氮仪凯氏定氮仪实验步骤：实验步骤：蒸馏操作蒸馏操作加入加入5ml5ml的消化稀释液，用的消化稀释液，用20ml20ml的的2%2%的硼酸的硼酸-混合指示剂封住蒸馏混合指示剂封住蒸馏口（关掉口（关掉P1P1和和P3P3），进样），进样20ml20ml的的40%40%的氢氧化钠，后加入少许水冲的氢氧化钠，后加入少许水冲洗，水封住进样口。酒精灯加热蒸馏瓶。当第一滴氨水从冷凝管洗，水封住进样口。酒精灯加热蒸馏瓶。当第一滴氨水从冷凝管中滴下的时候，计时中滴下的时候，计时5min5min，后将硼酸溶液稍微离开蒸馏管口，让，后将硼酸溶液稍微离开蒸馏管口，让蒸馏管口在硼酸液面吹蒸馏管口在硼酸液面吹2min2min，清洗蒸馏管口。，清洗蒸馏管口。蒸馏时，碱液一定要控制好量，硼酸里面的指示剂颜色变为蓝色蒸馏时，碱液一定要控制好量，硼酸里面的指示剂颜色变为蓝色后要再蒸馏五分钟左右。后要再蒸馏五分钟左右。滴定：滴定：滴定管滴定管实验步骤：用实验步骤：用0.5 mol/L 0.5 mol/L 的盐酸滴定的盐酸滴定用用HClHCl滴定兰色蒸馏液和硼酸液的混合物，直至蓝色褪去，稍微有滴定兰色蒸馏液和硼酸液的混合物，直至蓝色褪去，稍微有一点粉色，滴定结束。一点粉色，滴定结束。以上实验再重复以上实验再重复5 59 9两次。两次。计算：此为蛋白质的量，某些地方需要修改计算：此为蛋白质的量，某些地方需要修改谢谢观赏THANKS