龟甲提取物对增强免疫力和抗疲劳的作用研究.pdf

目的 本研究旨在探讨龟甲提取物对小鼠免疫力功能和抗疲劳性的作用。方法 选择清洁级 ICR 健康小鼠，灌胃给予 0.042g/kg.bw、0.083g/kg.bw、0.250g/kg.bw 剂量的龟甲提取物及无菌水 30d，进行增强免疫力和抗疲劳试验。结果 龟甲提取物对细胞免疫、体液免疫、NK 细胞活性三个方面显示阳性；负重游泳试验、血乳酸、血清尿素指标均呈阳性。结论 龟甲提取物对小鼠具有增强免疫力和缓解体力疲劳作用。关键词：关键词：龟甲提取物；小鼠；免疫；疲劳 中图分类号：中图分类号：R28 据记载龟板在公元前二世纪的汉代就已经作为药用。在已知最早的中药学著作神农本草经也收载有龟板，又称神屋。元代时期也盛行用下甲入药。龟常生长在水中，背为阳，腹为阴，其腹甲可称为阴中之阴1，被认为是一种重要的滋阴药物。龟甲在中华人民共和国药典记载为龟科动物乌龟的背甲及腹甲2。龟甲的味咸、甘，性微寒，归肝、肾、心经。龟甲具备着滋润阴气、增强骨骼、补充血液和安抚心灵的功能。本草备要 记载：“补阴益血。性灵故资智，通心益肾以滋阴”。本草通玄言“龟甲咸平，肾经药也”。龟甲作为中药，成分十分复杂，主要有效成分：氨基酸、胶原蛋白和多种微量元素等3。龟甲“滋阴”的特性主要源于龟甲对能量转换过程的管理能力、免疫系统的强化、血液补充和抵抗疲倦等方面的作用。现代药理学研究表明，龟甲能改善阴虚小鼠体重下降情况，并具有抑制小鼠胸腺、脾脏、甲状腺、肾上腺萎缩的功能4。随着龟甲的经济价值和社会效益逐渐突出，在保健食品领域有着巨大的开发潜力和广阔的市场前景。本次试验主要研究龟甲提取物的免疫调节及缓解体力疲劳作用，为开发龟甲类产品提供理论依据。1 实验材料及方法 1.1 受试物 龟甲提取物，由实验室提取制得。临床推荐每日用量为 0.5g/60kg。1.2 实验仪器和试剂 动物天平、电子分析天平、离心机、高速分散器、真空泵、玻璃器皿、试管、离心管、恒温水浴锅、游泳箱、全自动酶标仪（RT 6000）、光学显微镜、血细胞计数器、RPM1-1640 培养基、尿素氮试剂盒、肝糖原试剂盒等。1.2 实验分组 实验室采用清洁级 ICR 小鼠，体重 202g，为了模拟人类的实际用药情况，我们在免疫和疲劳试验中设置了三个不同浓度的剂量组：分别为成人临床推荐用量的 5 倍、10 倍、30 倍(即 0.042g/kg.bw、0.083g/kg.bw、0.250g/kg.bw)。同时，我们也设立了一个空白对照组，该组的小鼠接受的是无菌水的喂养，同样是每日一次，持续 30 天后于最后一天对各种免疫和耐力测试参数进行了测量。1.3 实验数据处理 我们使用 SPSS 16.0 软件对数据进行分析和计算，结果显示 P 值小于 0.05，这表明差异在统计学上具有意义。2 增强免疫力功能实验结果 2.1 龟甲提取物对小鼠体重的影响 经口给予受试物 30 天后，在增强免疫力实验中，各剂量组小鼠体重、体重增加及胸腺、脾脏重量、脏体比均数在各组间差异无统计学意义（P0.05），提示龟甲提取物对小鼠的体重增长无不良影响。2.2 龟甲提取物对小鼠迟发型变态反应（DTH）和小鼠脾淋巴细胞转化的影响（ConA 诱导）在 24 小时的抗原攻击后，0.083g/kg.bw 和中文科技期刊数据库（全文版）医药卫生-26-0.250g/kg.bw 剂量组的小鼠相较于与阴性对照组，其足跖肿胀度都有显著提高（P0.05，P0.01）。见表 1。2.3 龟甲提取物对小鼠血清溶血素抗体积数和抗体生成细胞数的影响 0.083g/kg.bw 剂量组的小鼠相较于阴性对照组，其抗体积数有了明显提升（P0.05）。各剂量组与阴性对照组小鼠相比，其抗体生成细胞数均显著增加（P0.05，P0.01）。见表 2。2.4 龟甲提取物对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞能力和碳廓清的影响 不论是在各剂量浓度组小鼠的碳廓清吞噬指数 a还是腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞的吞噬百分率和吞噬指数与阴性对照组比较，其差异并无明显性(P0.05)。见表 3。2.5 龟甲提取物对小鼠 NK 细胞活性的影响 0.083、0.250g/kg.bw 剂量组与阴性对照组小鼠相 表 1 比较了各剂量小鼠细胞免疫功能指标（）剂量（g/kg.bw）动物数（只）足跖肿胀度（mm）光密度差值 阴性对照组 10 0.510.08 0.340.07 0.042 10 0.540.09 0.431.13 0.083 10 0.650.10*0.381.05 0.250 10 0.690.09*0.400.79 表 2 龟甲提取物对各剂量小鼠体液免疫功能指标比较（）剂量（g/kg.bw）动物数（只）抗体积数 抗体生成细胞数/106（脾细胞）阴性对照组 10 209.5614.87 419.54104.52 0.042 10 216.1411.26 537.57112.61*0.083 10 227.6811.45*554.84114.23*0.250 10 218.7312.80 578.6894.74*表 3 龟甲提取物对各剂量小鼠单核-巨噬细胞功能指标比较（）剂量（g/kg.bw）动物数（只）吞噬百分率（%）吞噬指数 吞噬指数 a 阴性对照组 10 21.472.14 0.200.02 5.140.75 0.042 10 21.482.53 0.200.02 5.490.71 0.083 10 21.391.95 0.210.03 5.520.79 0.250 10 21.351.91 0.200.02 5.250.72 表 4 龟甲提取物对不同剂量小鼠 NK 细胞活性率指标比较（）剂量（g/kg.bw）动物数（只）NK 细胞活性率（%）阴性对照组 10 26.144.52 0.042 10 25.733.98 0.083 10 38.564.57*0.250 10 40.325.71*表 5 展示了龟甲提取物对不同剂量小鼠负重游泳、活动后血清尿素含量及肝糖原指标的比较情况（）剂量（g/kg.bw）动物数（只）负重游泳时间（min）血清尿素（mmol/L）肝糖原（g/100g 肝组织）阴性对照组 10 6.413.26 11.50.71 2.311.05 0.042 10 8.934.54 11.01.13 2.780.99 0.083 10 11.274.48*10.91.05 3.961.38*0.250 10 12.793.85*10.60.79 4.191.43*表 6 显示了龟甲提取物对不同剂量小鼠在 3 个时间点血乳酸曲线下面积的具体情况（）剂量（g/kg.bw）动物数（只）运动前乳酸值（mmol/L）运动后 0 分钟乳酸值值（mmol/L）运动后 20 分钟乳酸值（mmol/L）血乳酸曲线下面积 阴性对照组 10 1.960.59 5.670.91 3.890.83 133.7516.04 0.042 10 1.750.61 4.510.85 3.630.79 112.7018.31 0.083 10 1.680.64 4.470.83 3.120.84 106.6515.93*0.250 10 1.620.41 4.410.88 2.710.57 101.3513.52*中文科技期刊数据库（全文版）医药卫生-27-比，其 NK 细胞活性率显著增加（P0.05）。显示 NK细胞活性测定结果阳性。见表 4。3 缓解体力疲劳功能实验结果 3.1 龟甲提取物对小鼠体重的影响 经口给予受试物 30 天后，在抗疲劳实验中，各剂量组小鼠体重、体重增加及胸腺、脾脏重量、脏体比均数在各组间差异无统计学意义（P0.05），提示龟甲提取物对小鼠的体重增长无不良影响。3.2 龟甲提取物对小鼠负重游泳时间、血清尿素、肝糖原的影响 0.083、0.250g/kg.bw 剂量组与阴性对照组小鼠相比，其游泳耗竭时间明显提高（P0.05，P0.01）；0.083、0.250g/kg.bw 剂量组与阴性对照组小鼠相比，能明显促进小鼠的肝糖原储备（P0.05，P0.01）。见表 5。3.3 龟甲提取物对小鼠运动后血乳酸曲线下面积的影响 在口服给予小鼠不同剂量龟甲提取物后，0.083、0.250g/kg.bw 剂量组与阴性对照组比较，小鼠在 3 个时间点上血乳酸曲线下面积存在很大差异（P0.05，P0.01）。见表 6。4 讨论 社会老龄化程度的加深和环境污染的日益严重，再加上繁重的工作和学习给人们带来的心理及生理上的压力，由此所引发的机体“亚健康状态”已经成为现代人类面临的主要问题之一，近年来免疫力低下、疲劳等亚健康的发生率呈不断上升的趋势，经常生病、食欲下降、精神萎靡、疲乏无力、烦躁不快、肌肉酸痛、困倦等在一定程度上反映出机体的一些异常。为防患于未然，应该对亚健康状态进行重点防治，把预防、消除亚健康定为 21 世纪的一项重点实施的预防性健康策略，进而全面提高全人类的健康水平。中医药是我国劳动人民智慧的结晶，我国有几千年的药用历史，中药资源丰富。李长泉5研究了龟甲的药理作用和现代临床应用，并做了表述，大鼠服用龟甲后，实验结果提示，龟甲能提高大鼠的淋巴细胞转化率，同时增加了血清中 IgG 含量，使细胞免疫和体液免疫得到了很好的恢复。侯喜龙等人6观察了龟甲粉对小鼠免疫功能的作用，试验结果显示，与对照组比较，受试物能升高小鼠 HC50值和溶血空斑数，同时增强小鼠单核-巨噬细胞功能。刘杰等人7研究了龟甲粉的抗疲劳作用，试验结果显示，龟甲粉能提高小鼠的运动耐力，提高抗疲劳作用。在 此 实 验 环 境 中，小 鼠 被 灌 胃 量 分 别 为0.042g/kg.bw、0.083g/kg.bw、0.250g/kg.bw 剂量的龟甲提取物 30 天，实验结果显示其具有增强免疫力和缓解体力疲劳的保健功能。此实验加深了我们对龟甲的功能认知，为后续的开发利用奠定了理论基础。参考文献 1谢仰洲,王迺琪,徐淑玲,等.龟上、下甲滋阴作用的免疫功能研究J.云南中医杂志,1988,9(01):31-32.2国家药典委员会.中华人民共和国药典M.北京:中国医药科技出版社,2020.3李阳春.龟甲有效成分及药理研究进展J.科技视界,2017(06):291-300.4顾迎寒,卢先明,蒋桂华,等.不同品种龟甲滋阴作用的对比研究J.时珍国医国药,2007,18(06):1417-1418.5李长泉.龟甲药理作用及临床应用的现代研究J.长春中医学院学报,2003,19(04):55-56.6 侯 喜 龙,冯 明 明,杜 珂 璠,等.龟 甲 粉 对 小 鼠 免 疫 功 能 的 作 用 研 究 J.食 品 安 全 质 量 检 测 学报,2017,8(02):620-623.7刘杰,邱瑞霞,单凯.石金钱龟龟甲粉小鼠抗疲劳作用初步研究J.中国保健营养,2016,26(26):346-347.8周维,胡昌江,钟磊,等.一测多评法测定龟甲提取物中 6 种氨基酸的含量J.现代中药研究与实践,2016,30(6).9宋述财,许华,周健洪,等.龟甲提取物对骨髓间充质干细胞增殖过程中核受体的影响J.广州中医药大学学报,2006,23(2).