双向电泳试剂配制以及protocol.doc

水化液

8mM Urea
12g
4.8
2%CHAPS
0.5g
0.2
0.5%IPG Buffer
125ul
50
0.002%Bromophend Blue
50ul (1%BB)
2.0
DD H2O
To25ml
To 10ml
分装成500ul每管，冻于—20℃，用前融化。
SDS平衡液

1×
2×
3×
Tris-HCL PH8.8(F液)
0.54ml
1.08
1.8
Urea（Fw60.06）
5.41g
10.82
18.2
Glycerol (87%V/V)
4.53g
9.06
15.1
SDS
0.3g
0.6
1.0
Bromophenol Blue
30ul
60
100
DDH2O
To15ml
To30
To50
第一天配制2管，摇晃过夜
第二天用前，一管加入DTT（100mg/10ml）
另一管加入碘乙酰胺（250mg/10ml）碘乙酰胺较难溶，多摇晃几下

II向SDS胶

1×
2×
3×
Monomer Solution(E液)
50.04ml
83.4
125.1
4×Vesoling gel buffer(F液)
30ml
50
75
10%SDS(G液)
1.2ml
2
3
DDH2O
38.16ml
63.6
95.4
10%Ammonium Peosulfate (0.486---25G)
600ul
1ml
1.5
TEMED (10%AP:0.15→1.5ml)
39.6ul
66
99

E液
Acrylumicle 30%
150g
Bis- Acylumicle 0.8%
4g
DDH2O
To 500ml
4℃贮藏
F液
Tris-base 1.5m
181.7g
DDH2O
To 750ml
HCL
To PH8.8
DDH2O
To 1L
4℃贮藏
G液
SDS 10% (W/V)
5g
DDH2O
To 50ml
室温
二向下槽液
25mM Tris—HCL PH 8.3
12.12g
192mM gly
57.6g
0.1% SDS
4.5g
定容至500ml（DDH2O），搅拌，移至4L试剂瓶，再加入3.5L DDH2O，需前一天加入电泳槽，以消泡。
琼脂葡糖液
二向下槽液
100ml
Agarose(NA or M) 0.5%
0.5g
Bromophenol 0.002%
200ul
87℃溶解，室温保存
1%溴酚蓝液
Bromophend Blue 1%
100mg
Tris-base
60mg
DDH2O
To 10ml
室温保存

固定液
（无水）乙醇
150ml
乙酸
37.5ml
DDH2O
188ml
敏化液

1×
2×
3×
(无水)乙醇
112.5ml
225
337.5
Sodium thiosulfate
0.75g
1.5
2.25
Sodium acetate (17%)
25.5g
51
76.5
DDH2O
To 350ml
To700
To1050
银染液

1×
2×
3×
AgNO3 (2.5%)
0.9375g
1.875
2.8125
DDH2O
To 375 ml
To750
To1125
显色液

1×
2×
3×
Sodiun carbonate(6.26g)
9.375g
18.75
28.125
甲醛（37%）用前加
150ul
300
450
DDH2O
To 375 ml
To750
To1125
终止液

1×
2×
3×
EDTA—2Na（365g）
5.475g
10.95
16.425
DDH2O
To 375ml
To750
To1125