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干细胞治疗工作流程脐带血临床采集流程干细胞是一种未分化的细胞，具有自我更新、分化、发育再生各种组织器官和人体的潜在功能。脐带血广泛的应用前景备受关注,脐带血本属于废弃物,但是医学技术的进步使得它的价值得到了空前的提升。1989年,法国的鲁克罗曼教授用HLA相合的同胞脐带血干细胞进行移植，成功地治疗了一例遗传性疾病 范可尼贫血症，之后短短的15年的时间内，医学界利用脐带血干细胞已成功治愈和改善了多种疾病，包括：血液系统疾病、免疫系统疾病、神经和血管系统疾病、脑部疾病、肿瘤、糖尿病等。现在在儿童的干细胞移植方面，由于可以存在12个HLA位点的不配型,免疫排斥反应小等原因，脐带血干细胞已成为治疗一些重大疾病的有效手段.同时,干细胞的进一步开发，还可用于抗衰老、器官修复、美容等保健领域。干细胞技术和临床应用的飞速发展，给人类的健康带来了新的希望和保障。但是作为采集脐带血最主要的工作人员，我们所需要的操作是非常简单的,但是对于术中操作之外，我们还是会遇到以下的问题.解决这些问题,我们才能放心的采集，存储，备用.但是真正合法，安全，便捷的让脐带血内的干细胞移植到有需要的患者体内，需要按以下流程操作：脐带血采集条件：以初产妇、年龄在45岁以内或35岁以内经产妇，身体健康者为宜。脐带血安全流程 1、传染病检查：孕妇在产前要做好身体检查。这些检查包括:肝功能是否正常，有无梅毒螺旋体，艾滋病病毒（HIV ）、乙型肝炎病毒(HBV ）、丙型肝炎病毒（HCV）等病原体检测。如果其中有一样是阳性的话,就不要再进行采集了. 2、采集和储存的无菌观念:在自然分娩的情况下，一定要注意消毒.被厌氧菌和需氧菌污染，检测为阳性时都不能储存和使用.在脐血被采集后,应该尽快保存在28的恒温箱中，并远离辐射源,不要让X射线照到。这样的脐带血经科学实验证实，放置24小时或在23以下48小时，其中的干细胞的活性是没有明显影响的,但最长不应该超过72小时。采集流程 何种方法采集脐带血更好些呢？Solves5等证实了剖宫产情况下，以下两种采集方法体内采集法对得到的脐带血除血细胞比容及血小板外，其他各项没有明显不同。体内采集法:产妇施行常规的子宫横切术，将胎儿取出后，立即用两把止血钳夹住脐带,将其与胎儿分离，然后用碘酒和70酒精消毒脐带，做脐静脉穿刺后，脐带血通过重力的作用流人内含抗凝剂的无菌采集袋，采集完将其放入4冰箱中保存.体外采集法：同样对产妇行子宫横切术，待胎盘自然或人工剥离后，立即将其置于采集区，胎盘取出与进行采集之间时间尽可能缩短,将胎盘放在一个中间有孔的可供脐带自然垂下的采集台上，对脐带进行严格消毒后行脐静脉穿刺，血液在重力的作用下流人采集袋中,将其放人4冰箱保存。脐带血贮存因为脐血的采集、运输、储存和应用事实上有别于一般血液，国际上通行的管理法规都将血液和组织细胞分别管理，而我国目前的法规对脐血干细胞库只简单归属血液管理，严重阻碍了干细胞产业的发展。首先,来源不一样，脐带血是产妇和新生儿血循环以外的胎盘和脐带中的血液，一直是医院产科的废弃物,采集对产妇和新生儿无任何风险,然而其采集作为产妇生产过程的一部分，只能由产科医护人员进行，不可能由其他人员采集；而其应用主要是其中的干细胞,不会发生一般血液的公共安全问题.我们所在的手术室其实是脐带血采集的主要场所，手术室护士以及产科医生也将是脐带血采集主要人员,因此对于脐带血的采集问题还是需要有必要的认识。1、采集足月妊娠的健康产妇脐血，以肝素抗凝（40u/ml)，脐血采集量50100ml，采集后2h内进行分离纯化处理。2、胎儿分娩后立即抽取脐血，经抗凝,28冰箱保存。骨髓采集流程接受干细胞治疗的病人在术前应加强营养，改善体质。签署知情同意书,干细胞治疗志愿书，手术同意书,及相关法律文书。对病人进行生命体征的观测,有发热和炎症患者需要待炎症控制后再进行移植治疗，女性病人避开月经期。全身衰竭，严重肝肾功能损害的病人不宜进行自体骨髓干细胞移植治疗。此外，根据移植途径的不同给病人做好相应的术前处理。1： 术前心理疏导，消除患者紧张情绪。 重组人粒细胞刺激因子每天注射一支(皮下注射),打1-2天;病人身体状态好，可不用做动员。2：术前准备普通骨穿针2个，10ml注射器20个，在采集骨髓前将每个注射器中加入1ml肝素(抗凝），一次性采血袋或准备一个200ml以上容量的瓶子，术前消好毒，上盖橡胶盖或者软木盖,以便插针头，方便采集的骨髓往瓶中注入.术前30min行常规剂量头孢二代抗菌。3:骨髓采集一般为24个点的采集，在两个点不能够采集好的情况下,采集最大4个点.4：将采集好的骨髓或脐带血用医用纱布包裹，送分离。送病人回病房。5：将分离好的干细胞用生理盐水稀释成4-5ml干细胞悬液备用.6：术后进行48小时体温监测。适应症理论上干细胞能够治疗一切细胞损伤性疾病。目前已经使用宁夏中联达生物有限公司产品应用技术成熟、疗效可靠、安全性高的疾病主要有：肝炎肝硬化、溃疡性结肠炎、糖尿病足、闭塞性脉管炎下肢坏死、神经损伤性疾病、老年痴呆症、肌萎缩性脊髓侧索硬化症、帕金森氏病、糖尿病等禁忌症一切非细胞损伤性疾病；血液病；肝肾功能严重不足;发烧病人；有严重出血倾向病人;孕妇或哺乳期女性；合并大量腹腔、肺部或其他系统严重感染；心、肺、肾等重要脏器功能不全/衰竭不能配合治疗;过敏体质等其他严重情况影响治疗等。科室运作流程选择病例术前准备(术前相关检查、谈话记录、知情同意书,干细胞来源选择脐带血、骨髓血）标准收费脐带血通知妇产科或厂家 治疗前两日通知细胞分离室骨髓血不能在细胞分离室采则通知手术室（术前一日通知） 需介入的通知介入科（术前一日通知）或再次通知手术室治疗当日；进行骨髓血、脐带血采集送细胞分离室分离分离时间3小时左右结束干细胞送治疗室（介入科或手术室治疗)病人送回病房。神经系统病变适应症脑外伤、脑外伤后遗症 脑梗塞、脑出血脊髓损伤性截瘫急性期末(一周） 脑发育不全、脑萎缩老年性痴呆、智力低下、帕金森病 脑瘫、长期昏迷、植物生存状态 肌萎缩侧索硬化症运动神经元病治疗方法经颈内动脉介入干细胞移植1、选择符合适应症患者，排除心、肺、肝、肾等脏器重大疾患。2、行头部磁共振、血、尿常规，凝血功能，输血四项,乙肝三系，生化全套,胸部DR、心电图等,排除手术禁忌。3、采用骨髓或脐带血分离纯化（负收集混合法）收集干细胞，总数需2106/L.4、患者转移至介入室，常规经右腹股沟穿刺放置导管鞘，用5F多功能造影管分别行双侧颈内动脉及椎基底动脉造影，排除脑血管畸形等疾病，并经双侧颈内动脉注入充分稀释后干细胞悬液45ml,续推2ml生理盐水。5、术后配合单唾液酸四己神经节苷脂注射液等营养神经治疗。6、采用美国功能独立性评测评分对患者术前、术后3个月、6个月进行评定。主要评价 6个方面的能力：生活自理能力，括约肌控制能力，活动能力，行动能力，理解交流能力，社会认识能力。腰穿注射干细胞移植1、 术前心理疏导，消除患者紧张情绪。2、 患者侧卧，“抱膝凸腰”打开腰椎间隙。3、 选择L34间隙为穿刺点，术野消毒铺巾。4、 穿刺成功后引出脑脊液23ml。5、 取干细胞浓度2106/L的提取液4ml缓慢推注至蛛网膜下腔，续推2ml生理盐水。6、 留针35min观查病人,正常后拔针，无菌纱布覆盖穿刺点，术后去枕平卧6小时.立体定向移植 采用立体定向技术定位病变部位,在局麻状态下，颅骨钻孔，插入穿刺针，应用微量泵将事先准备的干细胞缓慢注入靶点。脑室引流管注入静脉滴注用生理盐水稀释至100ml一小时内缓慢静脉滴入肝病科适应症:肝炎后肝硬化失代偿期 酒精性肝硬化失代偿期 原发性胆汁淤积性肝硬化 丙肝后肝硬化失代偿期 不明原因性肝硬化失代偿期 自身免疫性肝病 药物性肝病 急性重型肝炎 慢性重型肝炎 肝炎后肝硬化合并肝癌 重症肝炎合并肝癌 治疗方法肝固有动脉介入：在DSA下经股动脉穿刺插管，置管于肝固有动脉进行造影，观察肝内血管情况及有无占位性病变。将待用的细胞悬液1015ml于1015分钟内经肝固有动脉或左右肝动脉缓慢注入；术毕拔管,穿刺点加压包扎后返回病房,穿刺侧下肢制动6h。 内分泌科适应症:型糖尿病 型糖尿病糖尿病足治疗方法型糖尿病 采用环磷酰胺+兔抗胸腺细胞球蛋白方案预处理，两日将分离好的干细胞稀释至100ml静脉回输或在DSA引导下经股动脉穿刺插管置管于胰背动脉将干细胞悬液10ml缓慢注入。型糖尿病在DSA引导下经股动脉穿刺插管置管于胰背动脉将干细胞悬液10ml缓慢注入。型、型观察治疗前后胰岛素注射剂量、HbA1c、平胰岛功能、等变化。糖尿病足 将分离好的干细胞用生理盐水稀释至60ml腿干细胞悬液备用.消毒、铺巾，双下肢贴皮肤保护膜。将干细胞悬液注射到患者缺血的下肢。从上向下顺序注射，每个点注射约1ml,注射深度在1。52cm之间，相邻的最大间距离为1-1.5cm。注射完毕后,注射点用无菌敷料包扎。血管外科闭塞性脉管炎治疗方法：将分离好的干细胞用生理盐水稀释至60ml腿干细胞悬液备用。消毒、铺巾,双下肢贴皮肤保护膜。将干细胞悬液注射到患者缺血的下肢.从上向下顺序注射，每个点注射约1ml，注射深度在1。52cm之间,相邻的最大间距离为1-1。5cm。注射完毕后,注射点用无菌敷料包扎.骨科股骨头坏死干细胞治疗方法:方法一:用脐带血或在局麻下穿刺髂骨,取出自体骨髓150 mL,获得干细胞悬液约1020 mL,于获得干细胞后12 h内先行股骨头髓芯减压,然后再行动脉灌注,灌注完成后选择旋股内侧动脉注射入部分干细胞悬液后拔除导管及鞘管，随后用特制刮勺伸入环锯内搔刮坏死区后，再将剩余干细胞悬液注射入环锯内，由环锯内填入大粗隆处正常松质骨及少量明胶海绵（或生物胶）以防止干细胞漏出，拔除环锯,皮肤缝合。方法二：在DSA引导下行股动脉穿刺，将导管超选插入旋股内动脉、旋股外动脉及闭孔动脉，将获得的干细胞悬液10ml20ml缓慢注入动脉内。术后采用髋关节Harris评分及影像学(主要为MRI)情况评定疗效合骨不连 治疗方法：x线透视下将1枚骨穿针准确穿入骨不连部位，并用针尖轻轻剥离骨不连部位的瘢痕组织及硬化骨质；用注射器抽取已制备并稀释好的干细胞加压注入骨不连部位的髓腔内、骨折断端之间的纤维瘢痕中及其表面；每例不少于3个注射点，每点注射6 10ml,保证干细胞在骨不连处均匀分布，局部稍加压包扎.注射量根据骨折部位而定，肱骨及胫骨中上段注射20 ml，胫骨下段骨折注射2030 ml.术后根据内固定的坚固程度,辅助使用外固定46周。注射1个月后复查x线片，如有硬化边缘清晰,无新生骨形成，无骨小梁通过骨折缝隙，骨不连间隙无明显缩小,患处压痛减轻不明显者，再次注射1次。可多次注射，每次注射间隔均为1个月左右。消化内科适应症：溃疡性结肠炎治疗方法：首先确定溃疡面的位置，溃疡面在肠系膜上动脉以上的，在DSA经股动脉插管至肠系膜上动脉,缓慢将干细胞悬液注入。溃疡面在肠系膜上动脉以下的，经股动脉插管至肠系膜下动脉，缓慢将干细胞悬液注入.克罗恩病治疗方法:大剂量化疗两日，第三日将获得的干细胞悬液用生理盐水稀释至100ml，采用大号针头经静脉回输干细胞.心内科适应症: 心肌梗死 扩张型心肌病 心力衰竭治疗方法: 在进行灌注前给病人做6分钟步行测试并记录数据,记录病人EF值及脑钠值。将分离好的干细胞稀释成10ml干细胞悬液备用在手术室备除颤器。由股动脉插管到冠状动脉的前降支,分别将干细胞缓慢（10min以上）注射到前降支远端、中端、近端。治疗前后常规使用其他治疗心肌病药物。肾内科适应症:慢性肾脏病狼疮性肾炎IGA肾病治疗方法:在DSA引导下经股动脉插管至双肾动脉,将获得的干细胞悬液20ml缓慢注入,每肾10ml。术后监测患者的生命体征。泌尿外科、妇产科适应病种： 压力性尿失禁 勃起功能障碍使用方法:压力性尿失禁：尿道粘膜下和括约肌注射法：将干细胞悬液稀释至1015ml,在超声波三维显示下,用10mm的针将干细胞悬液经尿道周围注射至尿道黏膜下及周围的尿道括约肌内，深度至膀胱颈为止,行四个方位尿道粘膜下和括约肌点状注射，每点0。51ml。整个植入手术约分钟，注射干细胞治疗女性患者的疗效较男性好,有效率分别为90和72%。一般在接受注射34周后有充分显效,且疗效似乎是长期的。勃起功能障碍：阴茎海绵体注射法、在腰麻下将干细胞悬液稀释至6ml，用注射器抽取在阴茎神经根部周围及阴茎海绵体四个方位行12个点状注射法，每点0。5ml.肿瘤科、血液科适应病种：肿瘤放、化疗后支持治疗，增强造血系统、免疫系统修复；肝癌介入栓塞合并干细胞治疗;移植途径： 1、静脉滴注：在大剂量化疗方案两日后将脐带血干细胞悬液稀释到100ml生理盐水中用大号针头缓慢输入。2、肝癌介入栓塞合并干细胞治疗;在DSA下经股动脉穿刺插管, 行肝癌介入栓塞后将待用的细胞悬液1015ml于1015分钟内经肝固有动脉或左右肝动脉缓慢注入；术毕拔管，穿刺点加压包扎后返回病房,穿刺侧下肢制动6h。 风湿免疫科适应症： 系统性红斑狼疮 类风湿性关节炎 多发性硬化 系统性硬化症治疗方法;患者进入层流病房，两日大剂量的化疗，第三日将获得的干细胞悬液用生理盐水稀释至100ml，采用大号针头经静脉回输干细胞。呼吸科适应症:肺动脉高压肺纤维化移植途径:上肢静脉输入法：用生理盐水将干细胞悬液稀释至100ml缓慢输入。右心导管介入注射法：对PAH常进行右心导管检查测压，治疗时可采用直接插管进入肺动脉缓慢注射干细胞悬液各10ml，该途径干细胞在血循环时间最短，细胞直接进入肺动脉末梢血管网，能保证有效的细胞水平和活性，更有利于细胞的定植和分化发育，是治疗PAH的最佳途径.眼科适应病种:黄斑变性病遗传性视网膜病小儿先天性视神经发育不全,视神经萎缩，眼底黄斑老年移植途径:1、静脉点滴。方法简单,但是收效慢，细胞到达病灶部位的数量少;2、蛛网膜下腔注射。可使细胞快速到达脑脊液，发挥功效，效果明显,两周左右改善病情；3、玻璃体腔注射,收效快。4,前三种方法联合使用,可在短期内达到很好的效果美容科适应病种：延年益壮和老年病去疤痕治疗亚健康移植途径： 1、 静脉滴注:将脐带血干细胞悬液稀释到100ml生理盐水中用大号针头缓慢输入。使用后的阶段性效果10天左右:改善睡眠深度,提高睡眠质量 30天左右：脸色红润有光泽，皮肤细腻有弹性,精力充沛 90天左右：精神焕发，抗疲劳能力显着增强,机体器官代谢旺盛，全身散发自然清香，从内到外都有年轻10岁的感觉,远离疾病困扰，恢复傲人体型。 适用人群：干细胞疗法适用对自身皮肤质量有更高要求的人士,在延缓衰老,增强机能、提高肌肤呼吸能力上有特殊的疗效，几乎能达到使肌肤返老还童的地步。2、局部注射法：用细小针头将干细胞悬液注射到受术者的皱纹、凹陷性疤痕部位，每点0.5-1ml。