基于血清mirnas差异性表达分析糖尿病高危足的风险因素分析.pdf

论著(临床研究)基于血清 mirnas 差异性表达分析糖尿病高危足的风险因素分析李秀贞,王丛香,王 猛,闫会霞,杨 越,高娟娟,张 鹏 摘要 目的 评估糖尿病(T2D)患者和 T2D 高危足患者以及非糖尿病患者的血清样本中的 miRNAs 表达模式。方法 收集 2021 年 6 月至 2022 年 6 月期间在河北省沧州中西医结合医院内分泌科住院的 92 例 T2D 患者。其中 46 例被诊断为高危足但没有足部溃疡,为 T2D 高危足组;其余患者为 T2D 组。选择在本院接受体检的 46 例糖耐量正常的健康人作为对照组。从所有参与者收集血液样本,采用了基于 RT-qPCR 的 TLDA 芯片血清样品的 miRNA 谱,并通过 RT-qPCR 对其中差异表达的 miRNA 进行验证。结果 TLDA 分析结果显示,在评估的754 个 miRNAs 中,与对照组相比,两组 T2D 患者中有25个上调,118 个下调。RT-qPCR 验证显示,与对照组相比,包括 miR-23、miR-195-5p、miR-205-5p、miR-203 在内的 4 个 miRNA 的水平在 T2D 组和 T2D 高危足组患者中均显著增加(P0.05)。此外,T2D 高危足组患者的上述 4 个血清 miRNA 的水平高于T2D 组患者(P0.05)。在多变量分析中,以对照组为参考类别时,仅 miR-195-5p(OR=6.9,95%CI:2.024.2,P=0.003)和miR-205-5p(OR=7.2,95%CI:1.632.0,P=0.009)与单纯 T2D 独立相关,和 miR-195-5p(OR=6.9,95%CI:2.0 24.2,P0.001)、miR-205-5p(OR=11.0,95%CI:2.843.2,P=0.001)与 T2D 高危足独立相关。当 T2D 组被作为参考类别时,仅 miR-195-5p(OR=3.0,95%CI:1.65.7,P=0.001)和 miR-205-5p(OR=2.3,95%CI:1.24.2,P=0.012)与 T2D 高危足独立相关。miR-195-5p 和 miR-205-5p 在区分 T2D 组和对照组时的 ROC 曲线下面积(AUC)分别为 0.74 和 0.70,在区分 T2D 高危足组和对照组时的 AUC 为 0.87 和 0.84,在区分 T2D 组和 T2D 高危足组时的 AUC 为 0.65 和 0.62。结论miR-195-5p、miR-205-5p 可能成为 T2D 及高危足的新型风险指标,并可能在 T2D 及高危足的发病机制和进展中发挥重要作用。关键词 糖尿病高危足;血清;miRNAs;表达模式 中图分类号 R587.1 文献标志码 A 文章编号 2097-2768(2024)01-0042-07 DOI 10.16571/ki.2097-2768.2024.01.007基金项目:河北省中医药管理局科研计划项目(2022590)作者单位:061000 沧州,河北省沧州中西医结合医院(沧州市二医院)内分泌糖尿病一科(李秀贞、王丛香、王猛、杨越、高娟娟、张鹏),ICU 科(闫会霞)Risk factors of high-risk foot of diabetes based on differential expression of serum mirnasLI Xiuzhen1,WANG Congxiang1,WANG Meng1,YAN Huixia2,YANG Yue1,GAO Juanjuan1,ZHANG Peng1(1.Department of Endocrinology and Diabetes,2.ICU Section,Hebei Cangzhou Integrated Traditional Chinese and Western Medicine Hospital(Cangzhou Second Hospital),Cangzhou 061000,Hebei,China)Abstract ObjectiveTo systematically assess miRNAs expression patterns in serum samples from patients with diabetes mellitus(T2D)and T2D high-risk foot patients as well as non-diabetic patients.Methods A total of 92 patients with T2D who were hospitalized in the Endocrinology Department of Hebei Cangzhou Integrated Traditional Chinese and Western Medicine Hospital from June 2021 to June 2022 were collected.Of these 92 participants,46 were diagnosed with high-risk foot but no foot ulcers and were includ-ed in the T2D high-risk foot group;the remaining patients were in-cluded in the T2D group.Forty-six healthy individuals with normal glucose tolerance who underwent physical examination at our hospital were selected as normal controls.Blood samples were collected from 24医学研究与战创伤救治2024 年1 月 第37 卷 第1 期 J Med Res Combat Trauma Care,Vol.37,No.1,January,2024all participants,and RT-qPCRbased miRNA profiles of TLDA microarray serum samples were used,and the differentially expressed miRNAs in them were verified by RT-qPCR.Results TLDA analysis showed that of the 754 miRNAs evaluated,25 were upregulat-ed and 118 were downregulated in both T2D patients compared to controls.RT-qPCR validation showed that compared to controls,the levels of four miRNAs,including miR-23,miR-195-5p,miR-205-5p,and miR-203,in the T2D group and T2D high-risk foot group were significantly increased(P0.05).In addition,the levels of the above four serum miRNAs were higher in patients in the T2D high-risk foot group than the T2D group(P0.05).In multivariate analysis,only miR-195-5p(OR=6.9,95%CI,2.0-24.2,P=0.003)and miR-205-5p(OR=7.2,95%CI,1.6-32.0,P=0.009)were independently associated with T2D alone when using the control group as the reference category,and miR-195-5p(OR=6.9,95%CI,2.0-24.2,P0.001),and miR-205-5p(OR=11.0,95%CI,2.8-43.2,P=0.001)were independently associated with T2D high-risk foot.When the T2D group was used as the refer-ence category,only miR-195-5p(OR=3.0,95%CI,1.6-5.7,P=0.001)and miR-205-5p(OR=2.3,95%CI,1.2-4.2,P=0.012)were independently associated with T2D high-risk foot.miR-195-5p and miR-205-5p were significantly associated with T2D high-risk foot when area under the ROC curve(AUC)were 0.74 and 0.70 when differentiating the T2D group from the control group,0.87 and 0.84 when differentiating the T2D high-risk foot group from the control group,and 0.65 and 0.62 when differentiating the T2D group from the T2D high-risk foot group.Conclusion miR-195-5p and miR-205-5p may become novel risk indicators for T2D and high-risk foot and may play an important role in the pathogenesis and progression of T2D and high-risk foot.Key words diabetic high-risk foot;serum;miRNAs;expression pattern0 引 言 糖尿病高危足是糖尿病(Type 2 diabetes,T2D)的常见和严重的慢性并发症之一,也是糖尿病足截肢的最重要前兆1。然而,与糖尿病高危足相关的主要机制仍未确定。因此,迫切需要更好地了解导致糖尿病高危足的潜在疾病机制,以便为糖尿病高危足制定有效的治疗策略。近年来研究发现了一组新的普遍存在的小的非编码 RNAs,称为 microRNAs(miRNAs),它们正在成为各种生物过程和疾病进展的关键调节器2。此外,miRNAs 在葡萄糖平衡和糖尿病发病机制中也发挥着关键作用。目前,已经发现大量的 miRNAs 与胰腺发育、胰岛素分泌和 细胞功能紊乱有关3。除了高血糖,miRNAs 还参与了炎症反应,以及血管内皮损伤和纤维化过程4。因此,miRNAs 可能参与常见高危足的发生和发展。现有的一些证据表明,miRNAs 在血液循环中可以稳定检测,可以作为各种疾病(包括糖尿病)的潜在非侵入性生物标志物5。然而,目前对糖尿病高危足患者的血清 miRNAs 进行系统分析的研究很少。因此,本研究旨在系统评估糖尿病患者和糖尿病高危足患者以及非糖尿病患者的血清样本中的 miRNA 表达模式。1 资料与方法1.1研究对象和标本采集收集 2021 年 6 月至2022 年 6 月期间在河北省沧州中西医结合医院内分泌科住院的 92 例 T2D 患者。其中 46 例被诊断为高危足但没有足部溃疡(瓦格纳分类 0 级),纳入T2D 高危足组;其余患者纳入 T2D 组。纳入标准:所有受试者没有严重的心脏病(没有不稳定的心绞痛、急性心肌梗塞和充血性心力衰竭),没有严重的肝病(丙氨酸氨基转移酶和天门冬氨酸氨基转移酶1.5 倍上限),也没有严重的肾功能障碍(血清肌酐60 mL/min/1.73 m2或癌症溃疡伤口;受试者在过去 6 个月内没有使用糖皮质激素、免疫抑制剂或外源性细胞因子。排除标准:参与者患有 1 型糖尿病、其他类型的糖尿病、严重感染、急性脑血管疾病或近期手术。选择在同一医院健康管理中心接受体检的 46例糖耐量正常的健康人作为对照组。对照组的参与者没有下肢动脉或静脉病变或皮肤溃疡。健康检查包括详细的病史、体检和验血。在参与者最近一次进餐后至少12 h,用血清空心管收集血液,并立即在1500g 下离心 10 min,分离血清。将血清样本保存在-80,直到 miRNA 分析。1.2 RNA 分离、TaqMan 低密度阵列和 RT-qPCR检测 采用了基于 RT-qPCR 的 TaqMan 低密度阵列(TLDA)芯片分析 24 例 T2D 患者、24 例 T2D 高危足患者和 24 例健康对照者的三个集合血清样本池的 miRNA 谱6。1.2.1RNA分离、TaqMan低密度阵列 使用 Trizol34医学研究与战创伤救治2024 年1 月 第37 卷 第1 期 J Med Res Combat Trauma Care,Vol.37,No.1,January,2024试剂(Invitrogen)从每个汇集的血清样本中提取总RNA。得到的 RNA 颗粒被溶解在 20 L DEPC 处理过的水中,并储存在-80,直到进一步分析。然后在 ABI PRISM 7900HT 上用低密度阵列(TaqMan Array Human MicroRNA A+B Cards Set v3.0,购自美国 Life Technologies 公司)检测 754 个不同的人类miRNA 谱。miRNA 的表达水平以阈值周期(Cq)值表示,并按照制造商的建议对每个池中的内源 U6进行归一化。1.2.2RT-qPCR检测对于血清 RT-qPCR 检测,采用一步法苯酚/氯仿纯化方案从 100 L 血清中提取总 RNA。使用 SYBR Green(美国 Applied Biosys-tems 公司)对从血清中提取的 RNA 进行 qRT-PCR反应。为了控制 RNA 提取和纯化过程中的变化,在RNA 分离过程中,将外源植物 miRNA MIR2911(5-GGCCGGGGGACGGGCUGGGA-3)添加到每个样品中,最终浓度为 106 fmol/L,作为血清 miRNA 正常化的合成外部参考。靶向 miRNA 的相对水平随后被归一化为 MIR2911,并使用比较 Cq 方法(2-Cq)进行计算。Cq 是通过从目标 miRNAs 的 Cq 值中减去 MIR2911 的 Cq 值来计算。然后用 T2DM 患者的平均 2-Cq值除以对照组的平均 2-Cq值来确定2-Cq。1.3 血清生化参数测定使用商业试剂盒(美国RANDOX 公司)在日立 7600 分析仪(日本日立公司)上测量血清 TC、TG、LDL 和 HDL 的浓度。使用商业试剂盒(日本 TOSOH 公司)在 HLC-723GB 自动分析仪(日本 TOSOH 公司)上测量 HbA1C 的浓度。1.4 统计学分析采用 SPSS 16.0 软件进行统计分析。计量数据以均数标准差(xs)表示,组间均值比较采用 t 检验。各组间 miRNA 浓度的差异采用非参数的 Mann-Whitney U 检验。在控制其他变量的情况下,还进行了向前逐步的二元逻辑回归分析,以评估血清 miRNA 对 T2D 和 T2D 高危足的影响。进行 Pearson 相关分析以评估三组之间 miRNA谱的相关性。以 P0.05 为差异有统计学意义。2 结 果2.1 人口学和临床特征T2D 组和 T2D 高危足组BMI、收缩压(SBP)和舒张压(DBP)明显高于对照组(P0.05)。与对照组相比,T2D 组和 T2D 高危足组血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)浓度也明显升高(P0.05),而血清高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平则明显下降(P0.05)。见表 1。表 1 T2D、T2DM 高危足和对照组的人口学和临床特征Table 1Demographic and clinical characteristics of T2D and T2DM high-risk foot and control group变量对照组(n=46)T2DM 组(n=46)T2D 高危足组(n=46)年龄(xs,岁)50.214.247.713.952.413.1#性别(男/女,n)28/1829/1735/11BMI(xs,kg/m2)23.62.025.64.525.52.9吸烟n(%)曾经和现在9(19.6)10(21.7)14(30.4)从未37(80.4)36(78.3)32(69.6)饮酒n(%)曾经和现在11(23.9)6(12.0)11(23.9)从未35(76.1)40(88.0)35(76.1)SBP(xs,mmHg)122.16.8134.116.5135.514.4DBP(xs,mmHg)78.34.181.210.382.511.1糖尿病病程(xs,年)-2.12.74.84.2葡萄糖(xs,mmol/L)4.90.59.24.39.53.4HbA1c(xs,%)5.30.49.82.910.32.7总胆固醇(xs,mmol/L)4.40.59.24.39.53.7甘油三酯(xs,mmol/L)0.90.32.62.12.11.6低密度脂蛋白胆固醇(xs,mmol/L)2.50.62.70.82.90.9HDL-C(xs,mmol/L)1.40.30.970.21.00.2 与对照组比较,P0.05;与 T2DM 组比较,#P 10,用单个血清样本进一步进行 RT-qPCR 验证,结果显示与对照组相比,包括 miR-23、miR-195-5p、miR-205-44医学研究与战创伤救治2024 年1 月 第37 卷 第1 期 J Med Res Combat Trauma Care,Vol.37,No.1,January,20245p、miR-203 在内的 4 个 miRNA 的水平在 T2D 组和T2D 高危足组患者中均显著增加(P0.05)。此外,T2D 高危足组患者的上述 4 个血清 miRNA 的水平高于 T2D 组患者(P0.05)。见表 2。2.3 单变量和多变量的逻辑回归分析以对照组为参考类别,当 T2D 伴有或不伴有高危足疾病组被视为因果两类变量时,所选的 4 个血清 miRNAs 与单纯 T2D 和 T2D 高危足独立相关。为了进一步评估这些血清 miRNAs 与高危足类别的关联,发现当T2D 组被作为参考类别时,所有这 4 种 miRNAs 都与高危足独立相关。然而,在进一步多变量分析中,以对照组为参考类别时,仅 miR-195-5p(OR=6.9,95%CI:2.024.2,P=0.003)和 miR-205-5p(OR=7.2,95%CI:1.632.0,P=0.009)与单纯 T2D 独立相关,和 miR-195-5p(OR=6.9,95%CI:2.024.2,P0.001)、miR-205-5p(OR=11.0,95%CI:2.8 43.2,P=0.001)与 T2D 高危足独立相关。当 T2D组被作为参考类别时,仅 miR-195-5p(OR=3.0,95%CI:1.6 5.7,P=0.001)和 miR-205-5p(OR=2.3,95%CI:1.24.2,P=0.012)与 T2D 高危足独立相关,见表 3、表 4。2.4ROC 曲线分析miR-195-5p 和 miR-205-5p在区分 T2D 组和对照组时的 ROC 曲线下面积(AUC)分别为 0.74 和 0.70,在区分 T2D 高危足组和对照组时的 AUC 为 0.87 和 0.84,在区分 T2D 组和 T2D 高危足组时的 AUC 为 0.65 和 0.62,见表 5,图 2。上述结果表明,这 2 个 miRNA 对 T2D 高危足具有相对较高的诊断价值。a、b、c:分别为 T2D 组和对照组、T2D 高危足组和对照组、T2D 组和 T2D 高危足组的相关分析图 1 由 TLDA 测定的 T2D、T2D 高危足和对照组的血清 miRNA 谱(754 个 miRNAs)的 Pearson 相关散点图Figure 1 Pearson correlation scatter plot of serum miRNA spectrum(754 miRNAs)of T2D,T2D high-risk foot and control group determined by TLDA表 2 RT-qPCR 检测 T2D、T2DM 高危足和对照组血清样品中 miRNA 的相对水平Table 2 Relative levels of miRNA in serum samples of T2D,T2DM high-risk foot and control group detected by RT-qCPRmiRNA对照组T2D 组倍数变化(T2D/对照)P 值T2D 高危足组倍数变化(T2D 高危足/对照)P 值miR-23181.142.21173.4181.16.50.0012023.2314.511.20.001miR-195-5p598.4115.61970.6299.43.30.0013280.7545.55.50.001miR-205-5p372.654.71198.2241.73.20.0011970.1279.45.30.001miR-203726.0146.41714.2298.32.40.0012480.9304.63.80.001miR-1208453.490.1567.091.61.40.072606.695.81.40.093miR-664216.442.0230.3112.71.00.426269139.51.10.353miR-584256.251.4276.760.71.00.547317.2100.11.20.174miR-1303154.530.5123.769.40.90.614169.080.71.20.188miR-770-5p249.323.3296.446.71.00.875296.242.71.10.726miR-892b796.2260.21018.7220.21.30.1251156.5355.11.30.132miR-886-5p1708.3399.01807.3223.61.30.1011950.1451.41.40.09354医学研究与战创伤救治2024 年1 月 第37 卷 第1 期 J Med Res Combat Trauma Care,Vol.37,No.1,January,2024表 3 T2D 和 T2D 高危足的血清 miRNAs 的单变量逻辑回归分析Table 3 univariate logistic regression analysis of serum miRNAs in T2D and T2D high-risk feetmiRNAmiR-23OR(95%CI)P 值miR-195-5pOR(95%CI)P 值miR-205-5pOR(95%CI)P 值miR-203OR(95%CI)P 值模型 1 T2D7.6(2.820.8)0.00111.2(4.130.2)0.0019.7(3.626.4)0.0015.5(2.015.2)0.001 T2D 高危足19.8(7.453.4)0.001 25.9(9.669.8)0.00122.6(8.460.9)0.00116.7(6.244.8)0.001模型 2 T2D 高危足2.6(1.44.8)0.0022.3(1.34.2)0.0052.3(1.34.2)0.0053.0(1.65.7)0.001表 4 T2D 和 T2D 高危足的血清 miRNAs 的多变量逻辑回归分析Table 4 Multivariate logistic regression analysis of serum miRNAs in T2D and T2D high-risk feetmiRNAmiR-195-5pOR(95%CI)P 值miR-205-5pOR(95%CI)P 值模型 1 T2D6.9(2.024.2)0.0037.2(1.632.0)0.009 T2D 高危足19.7(5.570.6)0.00111.0(2.843.2)0.001模型 2 T2D 高危足3.0(1.65.7)0.0012.3(1.24.2)0.012 模型 1:参考类别是对照组;模型 2:参考类别是 T2D 组表 5 ROC 曲线分析血清 miR-195-5p 和 miR-205-5p 区分对照、T2D、T2DM 高危足病例的能力Table 5 ROC curve analysis of the ability of serum miR-195-5p and miR-205-5p to distinguish control,T2D and T2DM high-risk foot casestmiRNAT2D 组 vs 对照组AUC95%CIP 值T2D 高危足组 vs 对照组AUC95%CIP 值T2D 组 vsT2D 高危足组AUC95%CIP 值miR-195-5p0.740.660.810.0010.870.820.920.0010.650.570.730.003miR-205-5p0.700.620.770.0010.840.790.900.0010.620.540.700.008图 2 ROC 曲线分析血清 miR-195-5p 和 miR-205-5p 区分对照、T2D、T2DM 高危足病例的能力Figure 2 ROC curve analysis of the ability of serum miR-195-5p and miR-205-5p to distinguish control,T2D and T2DM high-risk foot cases3 讨 论 血浆中循环 miRNAs 水平的改变与各种疾病和治疗效果有关。近年来,有几项研究对血清、血浆或血细胞 miRNA 谱的特定特征进行了描述和定义,以试图开发新的方法来预测和监测 T2D 的发展和进展7。上述研究提出了使用循环 miRNA 作为 T2D疾病的新生物标志物的可能性。然而,目前仍缺乏64医学研究与战创伤救治2024 年1 月 第37 卷 第1 期 J Med Res Combat Trauma Care,Vol.37,No.1,January,2024对有和无高危足的 T2D 患者的血清 miRNAs 动态变化的系统分析。在本研究中,我们利用高通量TLDA 技术确定了 T2D 患者和无高危足患者的全局血清 miRNA 表达谱,然后在单个样本中进行 RT-qPCR 确认,成功确定了 4 种 miRNA 的谱系,包括miR-23、miR-195-5p、miR-205-5p 和 miR-203,它们的表达在 T2D 患者血清中显著增加。此外,这 4 个miRNA 在 T2D 高危足组中的水平明显高于单纯T2D 患者。统计分析表明,确定的 miRNAs 与 T2D高危足密切相关。因此,我们假设这 4 个循环 miR-NAs 可能参与 T2D 和高危足并发症的发病机制。目前,关于 T2D 以及其高危足并发病的主要机制仍然不清楚,而且没有一个明确的治疗方法。用于早期检测这种疾病的生物标志物和识别有发生并发症风险的个体将大大改善病人的护理。然而,目前没有一种新型的生物标志物可以有效地预测T2D8。既往研究表明,细胞外的 miRNAs 稳定地出现在循环中,可以作为有希望的糖尿病诊断生物标志物9。Jimenez-Lucena 等10在 T2D 患者循环中确定了 10 个下调 miRNAs,并证实了它们是区分T2D 患者和对照组的有用生物标志物,血浆 miR-126 表达的减少与未来糖尿病发展的风险有关。上述结果在最近的两项研究中得到证实,描述了循环的 miR-126 可以发展成为一种非侵入性的有用的诊断工具,用于预测容易发展为 T2D 的个体11-12。另一项研究发现,与糖尿病前期个体和/或糖耐量正常的 T2D 易感个体相比,新发 T2D 中 7 个与糖尿病有关的 miRNAs 明显升高13。然而,与上述发现相比,本研究没有观察到改变的 miRNAs 的重叠情况。我们推测,这种不一致可能不仅是由样本特性产生的,也可能与以下因素有关:以前的研究中使用了miRCURY LNATM microRNA PCR 系 统 和 SYBR Green qPCR SuperMix-UDG 方法,而本研究主要基于 TaqMan 探针的 RT-qPCR 来检测单个血清样品中的 miRNA 水平;这些研究中使用了不同的归一化方法。在既往研究中,循环 miRNA 表达水平被归一化为 U6、合成细胞-miR-39 或未经调整的 Ct 值,而在本研究中,血清 miRNA 表达水平被归一化为一种尖锐的外源性 RNA(miR2911)。因此,迫切需要进行大型的前瞻性和多中心研究,根据标准化的样品制备、RNA 提取和 miRNA 数据分析方案来确定诊断 T2D 的可靠 miRNA 特征。既往研究表明,miRNA 可以由各种细胞主动或被动释放。此外,循环中的 miRNA 通过微囊、Ago蛋白复合物或 HDL 运输,并能以活性形式转移到受体细胞14。基于上述结果,在 T2D 和 T2D 高危足的过程中,来自特定细胞群的改变的 miRNA 可能提供有关糖尿病并发症发生的目标组织的生理或病理状态的详细信息。在我们确定的 4 个 miRNA 中,miR-23 参与了胰岛素生物生成的调节和 SNAIL 触发的上皮到间质的转变15。miR-205-5p 是一个已知的抗血管生成因子,研究发现 miR-205-5p 表达减少抑制导致胃癌等中 VEGF 信号的过度激活16。此外,氧化应激抑制了 miR-205-5p 在视网膜上皮ARPE-19 细胞中的表达;因此,VEGFA 表达和血管生成增加,这可能是糖尿病视网膜病变的一个潜在机制17。研究发现,在 T2D 的背景下,高血糖诱导了心肌细胞中 miR-195-5p 的表达水平,并与糖尿病心肌病的发展有关18。miR-203 被称为“皮肤特异性 miRNA”,研究发现 miR-203 的表达在糖尿病足部溃疡伤口的皮肤组织中增加,并与疾病的严重程度密切相关19。本研究多变量分析确定了 miR-195-5p 和 miR-205-5p 与单纯 T2D 和 T2D 高危足独立相关,并且两者在区分 T2D 组和 T2D 高危足组时具有相对较高的诊断价值。因此,miR-195-5p、miR-205-5p 可能在 T2D 高危足的病理中发挥潜在作用。综上所述,本研究确定了 miR-195-5p、miR-205-5p 可能成为 T2D 及高危足的新型风险指标,并可能在 T2D 及高危足的发病机制和进展中发挥重要作用。【参考文献】1 张 悦,周冬梅,李伟,等.影响糖尿病足的危险因素及溃疡严重程度对预后的影响J.中国老年学杂志,2021,41(22):4911-4914.2 李运杰,龚建华,姚汝铖,等.MicroRNA 在肝细胞癌诊断和治疗中的研究进展J.医学研究与战创伤救治,2023,36(2):214-218.3 Yarahmadi A,Shahrokhi SZ,Mostafavi-Pour Z,et al.MicroR-NAs in diabetic nephropathy:from molecular mechanisms to new therapeutic targets of treatmentJ.Biochem Pharmacol,2021,189:114301.74医学研究与战创伤救治2024 年1 月 第37 卷 第1 期 J Med Res Combat Trauma Care,Vol.37,No.1,January,20244 Smit-McBride Z,Morse LS.MicroRNA and diabetic retinopathy-biomarkers and novel therapeuticsJ.Ann Transl Med,2021,9(15):1280.5 Paul S,Vazquez LAB,Uribe SP,et al.Roles of microRNAs in carbohydrate and lipid metabolism disorders and their therapeutic potentialJ.Biochimie,2021,187:83-93.6 Barutta F,Bellini S,Guarrera S,et al.Association of serum Mi-croRNA-145-5p levels with microvascular complications of type 1 Diabetes:The EURODIAB prospective complications studyJ.Diabetes Res Clin Pract,2022,190:109987.7 Pordzik J,Jakubik D,Jarosz-Popek J,et al.Significance of cir-culating microRNAs in diabetes mellitus type 2 and platelet reac-tivity:bioinformatic analysis and reviewJ.Cardiovascular dia-betology,2019,18(1):1-19.8 张鹏翔,曾 霖,孟璐,等.唾液生物标志物在 2 型糖尿病及其相关并发症检测中的研究进展J.医学研究与战创伤救治,2023,36(4):430-435.9 叶志鑫,陈渡波,陈培松,等.血浆外泌体 miRNAs 与妊娠期糖尿病的关系J.中山大学学报:医学科学版,2021,42(3):381-391.10 Jimenez-Lucena R,Alcala-Diaz JF,Roncero-Ramos I,et al.MiRNAs profile as biomarkers of nutritional therapy for the pre-vention of type 2 diabetes mellitus:From the CORDIOPREV studyJ.Clin Nutr,2021,40(3):1028-1038.11Matsha TE,Kengne AP,Hector S,et al.MicroRNA profiling and their pathways in South African individuals with prediabetes and newly diagnosed type 2 diabetes mellitusJ.Oncotarget,2018,9(55):30485.12 Pordzik J,Eyileten-Postua C,Jakubik D,et al.Mir-126 is an independent predictor of long-term all-cause mortality in patients with type 2 diabetes