微生物常用染色法-PPT.ppt

微生物常用染色法微生物常用染色法1细菌染色的一般程序细菌染色的一般程序l涂片(干燥)-固定-染色-脱色-复染2涂片制备涂片制备l血液,分泌物,排泄物,穿刺液和液体培养物,直接在载玻上作薄涂片.固体培养基上的菌落或菌苔的制片,用接种环取1 环9g/L氯化钠溶液置载玻片中央.再用无菌接种环取少量的培养物在氯化钠溶液中磨匀,涂成人1CM*1CM大小的涂面.置室温下自然干燥或火慢慢烘干.3固定固定l目的是杀菌.凝固细菌蛋白及结构,便于染色.避免在水洗过程中被水冲掉.通常用火焰加热固定,将涂片在火焰中迅速通过3次,以手背皮肤接触玻片不烫为佳.4染色染色l根据检验目的不同,选择不同染色方法进行染色.染色时滴加染色液以覆盖涂面为佳，染色时间则随时间而定5媒染媒染 l使染料固定于被染物引起细胞膜通透性改变.常用明矾,鞣酸,金属盐和碘作为媒染l剂.也可用加热法促进着色.6脱色脱色l使已着色的被染物脱去颜色.常用乙醇,丙酮等作为脱色剂.脱色剂可以查出细菌与染料结合的稳定程度,作为鉴别染色用.7复染复染l复染液作为复染以便观察,复染不宜太强,以免掩盖初染的颜色.8常用染色法常用染色法单染色法 只用一种染料染色,常用吕氏美蓝,结晶紫和稀释石碳酸复红等.复染色法 用两种或以上的不同颜色的染料进行染色，可将不同细菌或同一细菌的不同结构染成不同颜色9大家有疑问的，可以询问和交流大家有疑问的，可以询问和交流可以互相讨论下，但要小声点可以互相讨论下，但要小声点可以互相讨论下，但要小声点可以互相讨论下，但要小声点10革兰染色革兰染色细菌涂片经火焰固定,加结晶紫染液1min,清水冲去染液.加碘液媒染1min,水洗,甩干.用95%乙醇脱色,轻轻摇动约30S,至无紫色洗落为止,水洗,甩干.加稀释石碳酸复红或沙黄染液数滴进行复染,约30S,水洗.干后显微镜下镜检观察结果.革兰阳性菌染成紫色,革兰阴性为红色.11BASO革兰染液革兰染液12抗酸染色抗酸染色l萋_纳抗酸染色法步骤:l细菌涂片经火焰固定,加石碳酸复红溶液,加热至有蒸气出现,切不可沸腾.染液因蒸发减少时,应随时补充,防止染液蒸干.持续5 min,水洗,甩干.l滴加3%盐酸乙醇脱色,不时摇动玻片至红色脱落为止,水洗,甩干.l加吕氏美蓝复染液数滴复染1min,水洗.l干后置显微镜下镜检.l 抗酸杆菌呈红色,非抗酸杆菌呈蓝色.13BASO抗酸染液抗酸染液14染色法原理染色法原理 l单染色l可选用任何一种碱性染料使细菌着色,观察到不同细菌形态大小及排列的特征.15染色法原理染色法原理l复合染色l用两种以上的染料染色,不同的细菌着色不同,不但通过形态及排列,可通过染色反应性来鉴别细菌,称为鉴别染色.常用有革兰染色和抗酸染色.16革兰染色革兰染色 l染色方法:先以结晶紫液初染,后以卢戈氏碘液媒染,使脱色的细菌 显红色,为G-菌.末脱色细菌呈紫色为G+菌.17涂片见涂片见G-杆菌，形似肠杆菌杆菌，形似肠杆菌18涂片见G+球菌，呈葡萄状排列19涂片见G+球菌，呈链状排列20染色原理染色原理:l最广泛接受观点认为与细菌细胞壁结构及化学组成有关.G+菌细菌壁结构致密,肽聚糖层厚,脂质含量少,形成结晶紫_碘复合物.脱 色过程中,虽然溶解细菌壁脂质成分形成小孔.脱水作用使细胞壁收缩又 构成屏障,阻止结晶紫碘复合物被乙醇溶出,细菌保持紫色紫色.G-菌细菌壁 疏松,肽聚糖层较薄,脂质含量高,乙醇溶解脂质,经复染细菌呈红色红色.21应用应用 l用革兰氏染色将几乎所有细菌分为G+和G-细菌两部分.不同 染色反应细菌细胞壁结构差异较大,致病性各有特点,对不同抗生素的敏 感性也有差别.在抗生素敏感试验中有直接的指导意义.22抗酸染色抗酸染色 l抗酸染色是细菌着色后不被盐酸乙醇脱色的染色方法.23染色方法染色方法l)先将碳酸复红染色,加温促使菌体着色,再用3%盐酸乙醇脱色.最后用美蓝复染,末脱色细菌呈红色为抗酸性细菌,脱色细菌呈蓝 色为非抗酸性细菌.24染色原理染色原理l抗酸性染色细菌与细胞壁成分有关.分枝杆菌细胞壁含脂质较多,其中主要成分是分枝菌酸.决定抗酸性染色反应,用乙醚脱去分 分枝菌酸,则呈非抗酸染色性.25