(高清正版）DB43_T 1952-2020桃蚜实验室内人工饲养技术规程.pdf

湖南省地方标准DB43湖南省市场监督管理局发 布DB43/T 12020 9522020-12-29发布2021-03-29实施桃蚜实验室内人工饲养技术规程Procedures of Intra-laboratory Feeding for Green Peach AphidICS 65.020CCS B 16 目 次 前言 1 范围 1 2 规范性引用文件 1 3 术语和定义 1 4 饲养环境 1 4.1 温度 1 4.2 湿度 1 4.3 光照 2 5 仪器与设备 2 6 人工饲料 2 6.1 原料及配方 2 6.2 制备方法与储存 2 7 饲养方法与繁殖 2 7.1 桃蚜挑取与饲料更换 2 7.2 桃蚜繁殖 2 7.3 注意事项 3 8 饲喂管理记录与废料处理 3 附录 A（资料性）桃蚜人工饲料配方 4 附录 B（资料性）刺吸式昆虫饲喂器 5 附录 C（资料性）桃蚜饲喂管理记录表 7 前 言 本文件按照 GB/T 1.12020 给出的规则起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利，本文件的起草和发布单位不承担相关责任。本文件由湖南省农业农村厅提出。本文件由湖南省农业标准化委员会归口。本文件起草单位：湖南省植物保护研究所。本文件主要起草人：刘勇、张德咏、高阳、彭静、贺荣华、程菊娥、朱春晖、郑立敏、史晓斌。桃蚜实验室内人工饲养技术规程 1 范围 本文件规定了桃蚜（green peach aphid）实验室内人工饲养的饲养环境、仪器与设备、人工饲料、饲养方法与繁殖、饲喂管理记录与废料处理的要求。本文件适用于湖南省内实验用桃蚜的实验室内人工饲养和日常管理。2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB 14942 食品容器、包装材料用聚碳酸酯成型品卫生标准 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。3.1 桃蚜 green peach aphid 属半翅目（Hemiptera），蚜科（Aphididae）。别名腻虫、桃赤蚜、烟蚜、油汉。3.2 桃蚜成虫 adult 具有繁殖能力的桃蚜。3.3 桃蚜若虫 nymph 不具有繁殖能力的桃蚜，可根据蜕皮次数分为 1 龄、2 龄、3 龄和 4 龄若虫。3.4 人工饲料 Artificial Diet 由酵母提取物和多种化合物人工配制而形成的饲料 4 饲养环境 4.1 温度 桃蚜在 15-30均可正常生长繁殖，最佳饲养温度应控制在 222。4.2 湿度 最佳饲养湿度应控制在 70-90RH。4.3 光照 光周期设定为光照:黑暗=16h:8h，光照强度为 2000200Lux 左右。5 仪器与设备 刺吸式昆虫饲养箱：使用刺吸式昆虫饲养箱进行饲养。饲养箱尺寸为 250mm250mm200mm。饲养装置的具体结构详见附录 B。饲养箱包括箱体、隔板和多个养虫筒。隔板上设置有多个安装孔，养虫筒两端开口，下端端面开口处设置有用于防止养虫筒内昆虫逃逸的网层。养虫筒下端插入安装孔内。养虫筒的上端端面开口处密封设置有用于供养虫筒内昆虫取食的食材组件，食材组件包括带孔盖板和人工叶片两部分。利用热熔机将桃蚜的人工饲料密封在双层封口膜中间形成人工叶片，通过拉伸使人工叶片延展开后覆盖于带孔盖板上形成食材组件。光照培养箱：刺吸式昆虫饲养箱自身不具备环境条件控制功能，因此需使用光照培养箱进行温度、湿度、光周期和光强的控制。光照培养箱尺寸为 600mm600mm2000mm。热熔封口机：刺吸式昆虫饲养箱中使用的人工叶片需使用热熔封口机加工制备。6 人工饲料 6.1 原料及配方 饲喂桃蚜的人工饲料使用的化学试剂均要求使用分析纯以上，且氨基酸类试剂需要使用 L 型，配制饲料使用的水为超纯水。人工饲料的具体配方详见附录 A。6.2 制备方法与储存 桃蚜人工饲料除维生素 C 外，可以按氨基酸类、维生素类、无机盐类、蔗糖、酵母提取物的顺序依次进行溶解配制。配制后的溶液经微孔滤膜过滤灭菌后进行分装，可于-20避光冷冻储存不超过 30天。使用前按饲料用量加入相应质量的维生素 C 并用 1 mol/L 的 KOH 溶液调整 pH 值至中性，再次过滤灭菌后方可使用。配制好的人工饲料为透明的亮黄色液体，由于维生素 C 半衰期较短，配好的人工饲料可于-20避光冷冻储存不超过 7 天。7 饲养方法与繁殖 7.1 桃蚜挑取与饲料更换(1）用毛笔尖轻轻触动桃蚜，待桃蚜口针从自然宿主植物的叶片中抽出后，将桃蚜挑取到 2 mL 离心管中，此步可以同时记录挑取桃蚜头数。(2）挑取的桃蚜转移到养虫筒内，利用食材组件密封养虫筒上端口。(3）更换人工叶片时需要先将食材组件取下，桃蚜用毛笔挑取到养虫筒内，更换新的人工叶片后再将试材组件装回。7.2 桃蚜繁殖 人工饲养的桃蚜可进行自然繁殖，主要生殖方式为孤雌生殖，1 年可繁殖 10-30 个世代。新繁殖的若虫体型较小，形态上与无翅成虫基本上一致，可与成虫一同饲喂。7.3 注意事项（1）挑取桃蚜动作需轻柔，否则容易造成桃蚜口针折断。（2）每个养虫筒内桃蚜数量不大于 30 头，避免产生有翅蚜。（3）食材组件中的人工叶片每 24h 更换一次。（4）如需控制若虫龄期，可在成虫产仔后将成虫移除，新生若虫即可保持龄期一致。8 饲喂管理记录与废料处理 每天记录一次室内温度和湿度。每次更换人工饲料时记录更换时间。桃蚜饲喂管理记录表格参见附录 C。使用后的人工叶片需高压灭菌后按实验室化学废料进行处理。多余的桃蚜可置于 65烘干箱内15 min 进行杀灭。附 录 A（资料性）桃蚜人工饲料配方 药品名称 用量（mg/100mL）药品名称 用量（mg/100mL）氨基酸类氨基酸类 维生素类维生素类 丙氨酸 100 盐酸硫胺素 2.5 精氨酸 200 烟酸 10 天冬酰胺 500 盐酸吡哆醇 2.5 天冬氨酸 200 叶酸 0.5 半胱氨酸 100 泛酸钙 5 谷氨酸 200 肌醇 50 谷氨酰胺 200 氯化胆碱 50 甘氨酸 50 生物素 0.1 组氨酸 80 异亮氨酸 100 无机盐类（大量）无机盐类（大量）甲硫氨酸 100 磷酸二氢钾（KH2PO4）500 亮氨酸 100 赖氨酸 100 无机盐类（微量）无机盐类（微量）苯丙氨酸 40 柠檬酸铁（FeC6H5O75H2O）脯氨酸 40 氯化铜（CuCl22H2O）0.2 丝氨酸 50 氯化锌（ZnCl2）0.4 苏氨酸 150 乳酸钙（Ca(C3H5O3)25H2O）1.7 色氨酸 50 氯化高铁（FeCl33H2O）11 酪氨酸 40 氯化锰（MnCl24H2O）0.4 缬氨酸 100 柠檬酸 10 氯化镁（MgCl26H2O）0.2 加入蔗糖：15g，酵母提取液：0.5-2.0。使用前按 1mg/mL 比例加入维生素 C，用 1mol/L 的 KOH 调节至中性，过滤灭菌 附 录 B（资料性）刺吸式昆虫饲喂器 刺吸式昆虫饲喂器实物图 刺吸式饲喂器材质符合食品级 PC 材质标准，包括箱体、隔板和养虫筒，隔板用于支撑养虫筒，养虫筒下端为防逃逸网，上端为食材组件，食材组件内包含人工饲料，用于饲喂桃蚜。刺吸式昆虫饲喂器剖面图 刺吸式昆虫饲喂器养虫筒结构图 人工叶片示意图 附 录 C（资料性）桃蚜饲喂管理记录表 日期 温度（）湿度（）人工饲料 更换时间 废料灭菌处理 备注 记录人