DB42T2036.1-2023农产品中农药残留量的测定 第1部分：草铵膦、草甘膦和氨甲基膦酸的测定 液相色谱-质谱_质谱法.pdf

ICS65.020CCSB 20DB42湖北省地方标准DB42/T 2036.12023农产品中农药残留量的测定第 1 部分：草铵膦、草甘膦和氨甲基膦酸的测定 液相色谱-质谱/质谱法Determination of pesticides residues in agricultural productsPart 1:Determination of glufosinate ammonium,glyphosate and(aminomethyl)phosphonic acid by LC-MS/MS2023-05-16 发布2023-07-16 实施湖北省市场监督管理局发 布DB42/T 2036.12023I目次前言.III引言.V1范围.12规范性引用文件.13术语和定义.14原理.15试剂和材料.16仪器和设备.27样品制备与保存.28分析步骤.39分析结果的表述.410相对标准偏差.511检出限及定量限.512质量保证和质量控制.5附录 A（资料性）草铵膦、草甘膦和氨甲基膦酸标准品多反应检测（MRM）色谱图.6附录 B（资料性）方法的检出限、定量限和线性范围.8附录 C（资料性）回收率和精密度.9DB42/T 2036.12023III前言本文件按照GB/T 1.12020标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则的规定起草。本文件DB42/T 2036农产品中农药残留量的测定的第1部分。DB42/T 2036已经发布了以下部分：第1部分：草铵膦、草甘膦和氨甲基膦酸的测定 液相色谱-质谱/质谱法本文件由湖北省农业农村厅提出并归口。本文件起草单位：武汉市农业科学院、湖北省理化分析测试中心有限公司。本文件主要起草人：董军、苏小路、高梦月、肖康飞、姚延兴、金凤美、金莉、谢焰峰、李宝喜、郑利、胡亦清、易文晗、戚红晨、韩艳云、陈钢、陈建、黄志宏、夏浩。本文件实施应用中的疑问，可咨询湖北省农业农村厅，联系电话：[phone]，邮箱：；对本文件的有关修改意见建议请反馈至武汉市农业科学院，联系电话：[phone],邮箱：。DB42/T 2036.12023V引言农药残留在农业生产中施用农药后一部分农药直接或间接残存于谷物、蔬菜、果品、畜产品、水产品等农产品中的现象。农药残留检测会造成农产品污染，危害人的健康。因此，农产品质量安全关系人民群众身体健康和生命安全，开发简单快速、准确高效的农产品中农惨检测方法可以规范农产品市场，确保人民群众食品安全。当前，由于农产品中农残种类繁多且性质不一，对农产品中农药残留全部进行规范检测成为亟待解决的问题。农产品中农药残留量的测定主要是构建农产品中的不同种类农药残留检测方法标准体系，根据技术需求分别编写，便于该文件各部分的单独使用。当前，农产品中农药残留量的测定由第一部分组成，其它部分后续待补充。第1部分：草铵膦、草甘膦和氨甲基膦酸的测定 液相色谱-质谱/质谱法农产品中农药残留量的测定 系列标准各部分均涉及的农药残留均存在于农产品中，他们具有类似的基质属性，同时又有各自独特的本征特性，各部分相互协调，共同构建农产品中农药残留量检测方法的技术标准体系。本文件的发布机构提请注意，声明符合本文件时可能涉及到一种农产品中草甘膦、草铵膦及其代谢物氨甲基膦酸残留量的测定方法相关专利的使用。本文件的发布机构对于该专利的真实性、有效性和范围无任何立场。该专利持有人已向本文件的发布机构承诺，他愿意同任何申请人在合理且无歧视的条款和条件下就专利授权许可进行谈判。该专利持有人的声明已在本文件的发布机构备案。相关信息可以通过以下联系方式获得：专利持有人姓名：武汉市农业科学院地址：湖北省武汉市洪山区白沙洲大道173号请注意除上述专利外，本文件的某些内容仍可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。DB42/T 2036.120231农产品中农药残留量的测定第 1 部分：草铵膦、草甘膦和氨甲基膦酸的测定 液相色谱-质谱/质谱法1范围本文件规定了测定农产品中草甘膦、草铵膦和氨甲基膦酸的液相色谱-质谱/质谱方法原理、试剂和材料、仪器和设备、样品制备与保存、分析步骤、分析结果的表述、相对标准差、检出限及定量限、质量保证和质量控制等内容。本文件适用于果蔬、粮食中草铵膦、草甘膦和氨甲基膦酸的测定。2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法3术语和定义本文件没有需要界定的术语和定义。4原理试样粉碎或匀浆后经水提取、固相萃取小柱净化后，经亲水性色谱柱分离，串联质谱法测定，内标法定量。5试剂和材料试剂5.1.1甲酸（HCOOH）：色谱纯。5.1.2乙腈（CH3CN）：色谱纯。5.1.3去离子水等实验室用水：应满足 GB/T 6682 的要求。试剂配制5.2.1甲酸水溶液（0.9%,V/V）：准确量取 9mL 的甲酸（5.2.1）于容量瓶中，然后用去离子水定量至 1000 mL。5.2.2甲酸乙腈溶液（0.9%,V/V）：准确量取 9mL 的甲酸（5.2.1）于容量瓶中，然后用乙腈（5.2.2）定量至 1000 mL。标准品DB42/T 2036.1202325.3.1草铵膦（C5H15N2O4P，CAS 号：77182-82-2）：100 g/mL，或采用具有标准物质证书的草铵膦基准试剂。5.3.2草甘膦（C3H8NO5P，CAS 号：1071-83-6）：100 g/mL，或采用具有标准物质证书的草甘膦基准试剂。5.3.3氨甲基膦酸（CH6NO3P，CAS 号：1066-51-9）：100 g/mL，或采用具有标准物质证书的氨甲基膦酸基准试剂。5.3.4草铵膦-D3（CAS 号：1323254-05-2）：100 g/mL，或采用具有标准物质证书的草铵膦-D3基准试剂。5.3.5草甘膦-13C2,15N（CAS 号：1185107-63-4）：100 g/mL，或采用具有标准物质证书的草甘膦-13C2,15N基准试剂。5.3.6氨甲基膦酸-13C,15N（CAS 号：1066-51-9）：100 g/mL，或采用具有标准物质证书的氨甲基膦酸-13C,15N 基准试剂。标准溶液的制备5.4.1混合外标使用液 1（10 g/mL）：量取草铵膦标准品（5.4.1）、草甘膦标准品（5.4.2）、氨甲基膦酸标准品（5.4.3）各 1 mL 于 10 mL 容量瓶中，用 50%乙腈水溶液（V/V）定容，制成 10 g/mL的混合标准使用液 1，避光 4 保存，有效期两个月。5.4.2混合外标使用液 2（1 g/mL）：量取草铵膦标准品（5.4.1）、草甘膦标准品（5.4.2）、氨甲基膦酸标准品（5.4.3）各 100 L 于 10 mL 容量瓶中，用 50%乙腈水溶液（V/V）定容，制成 1 g/mL的混合标准使用液 2，避光 4 保存，有效期两个月。5.4.3混合内标使用液 1（10 g/mL）：量取草铵膦-D3标准品（5.4.4）、草甘膦-13C2,15N 标准品（5.4.5）、氨甲基膦酸-13C,15N 标准品（5.4.6）各 1 mL 于 10 mL 容量瓶中，用 50%乙腈水溶液（V/V）定容，制成10 g/mL 的混合内标使用液 1，避光 4 保存，有效期两个月。材料5.5.1固相萃取小柱：200 mg/6 mL，如 Prime HLB 小柱或性能相当者。5.5.2微孔滤膜：0.22 m，针式，水系。6仪器和设备液相色谱-质谱/质谱仪：配有电喷雾离子源（ESI）。分析天平：感量为 0.001 g。组织捣碎器。涡旋混合仪：2500 r/min。高速离心机：12000 r/min。SPE 真空固相萃取装置。7样品制备与保存果蔬类取新鲜样品可食用部分约500 g，将其切碎后，用组织捣碎器均质，充分混匀，装入洁净容器，密封并标记，-5 以下避光保存。DB42/T 2036.120233粮食类取样品可食用部分约500 g，用组织捣碎器均质，过20目筛后混匀，装入洁净容器，密封并标记，-5 以下避光保存。8分析步骤提取称取0.50g试样（精确到0.01g），置于15 mL离心管中，加入50 L混合内标使用液1（5.5.3）、5mL去离子水，2500 r/min涡旋混合30 min，15000 r/min、4 离心5 min，取上清液待净化。净化取上清液（8.1）2mL于固相萃取小柱（5.6.1）小柱中，控制流速为1滴/s通过小柱，弃去最初0.5mL滤液，收集剩余滤液，过0.22 m滤膜（5.6.2），上机测定。基质标准工作液的制备取与试样基质相应的阴性样品，按提取（8.1）与净化（8.2）步骤制成空白基质溶液，使用空白基质溶液稀释标准使用液（5.5.1，5.5.2，5.5.3），配制成外标浓度分别为0 g/mL、0.02 g/mL、0.05g/mL、0.1 g/mL、0.2 g/mL、0.5 g/mL、1.0 g/mL，内标浓度均为0.5 g/mL的基质标准工作液，上机测定。测定8.4.1液相色谱条件液相色谱参考条件如下：a)色谱柱：Anionic Polar Pesticide 柱（5 m,2.1 mm100 mm），或性能相当者；b)流速：0.5 mL/min；c)进样量：10 L；d)柱温：35；e)流动相：A：0.9%甲酸水溶液（5.3.1）；B：0.9%甲酸乙腈溶液（5.3.2），洗脱程序见表 1。表 1流动相洗脱程序时间/min流速/mL/min流动相A/%流动相B/%Curve/-00.51090-40.585152120.585156180.5109018.4.2质谱条件质谱参考条件如下：a)离子源：电喷雾离子源 ESI；b)扫描方式：负离子模式；c)监测方式：多反应监测（MRM）；DB42/T 2036.120234d)离子源温度：135；e)毛细管电压：2.4 kV；f)脱溶剂气温度：600；g)脱溶剂气流速：1000 L/h；h)锥孔气流速：150 L/h；i)碰撞气流速：0.15 mL/min；j)辅助气为高纯氮气，碰撞气为高纯氩气。使用前应调节各气体压力，以使质谱灵敏度达到检测要求；电喷雾电压、碰撞能等参数应优化至最佳灵敏度，相关参数及检测离子对信息见表2。表 2物质检测离子对信息及相关参数编号检测物质保留时间/min母离子/m/z子离子/m/z锥孔电压/V碰撞能/V1氨甲基膦酸1.53110.0863.004514110.0881.00*30122草甘膦4.00168.0081.003018168.00149.98*3083草铵膦2.04180.1085.05*2516180.1095.0025164氨甲基膦酸-13C,15N1.53112.0881.00*25125草甘膦-13C2,15N4.00171.04152.93*30106草铵膦-D32.04183.0085.05*3516注：保留时间相对误差在2.5%以内；带*号为定量离子。8.4.3定性测定在相同试验条件下进行试样测定时，如果试样中待测物的色谱峰保留时间和标准工作液中对应色谱柱峰的保留时间一致（相对误差在2.5%以内），且试样谱图中待测物检测离子的相对丰度和浓度相当的标准品的相对丰度一致，允许误差不超过表3规定的范围，则可判断样品中存在对应的待测物。表 3实验室内定性离子的相对丰度要求相对离子丰度/%允许的相对偏差/%502020-502510-203010508.4.4定量测定在仪器最佳工作条件下，将基质标准工作液由低到高依次进样，以待测物的定量离子峰面积与待测物相对应的内标物质的定量离子峰面积之比为纵坐标，以待测物的浓度与待测物相对应的内标物质的浓度之比为横坐标，绘制标准曲线，用标准曲线对试样进行定量。试样中各待测物的响应值应在标准曲线线性范围内。在8.4.1与8.4.2条件下，各待测物的多反应检测图和参考保留时间参见附录A中图A.1至A.3。9分析结果的表述DB42/T 2036.120235计算试样中草甘膦、草铵膦和氨甲基膦酸的残留量以质量分数计，单位以毫克每千克（mg/kg）表示，按式（1）计算。=1000(1)式中：试样中待测物的残留量（mg/kg）；C由标准曲线得到的试样溶液中被测化合物的浓度，单位为微克每升（g/L）；试样提取液的体积，单位为毫升（mL）；试样的取样量，单位为克（g）；1000换算系数计算结果以算术平均值表示。若计算结果大于等于 1 mg/kg，保留三位有效数字，若计算结果小于1 mg/kg，保留至小数点后三位。平行样测定每批样品（最多 10 个样品）应至少进行 1 次平行测定，平行双样测定结果相对偏差应在 10%以内。10相对标准偏差在重复性试验条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的 15%。11检出限及在取样量为 0.5g，提取液体积为 5mL 时，草甘膦、草铵膦、氨甲基膦酸的检出限分别为 0.005mg/kg、0.01 mg/kg、0.01 mg/kg，定量限分别为 0.02 mg/kg、0.04 mg/kg、0.04 mg/kg，见附录 B。12质量保证和质量控制校准核查每次分析样品前应选择校准曲线中间浓度进行校准曲线核查，其测定结果相对偏差应不大于10%，否则应重新绘制校准曲线。实际样品加标和加标平行每一批样品（最多10个样品）应至少分析1个实际样品加标和一个加标平行。实际样品加标回收率应在80%120%之间，加标平行样的测定结果相对偏差应在10%以内。其他每批样品应同时进行一次空白实验。空白结果中目标化合物浓度应小于方法检出限。本次检测的实际样品均为阴性样品，为确保定量结果准确以及避免污染仪器，实际样品中检测对象最高残留限量较高时，应稀释到合适浓度后再上机检测。本方法测定13种果蔬及粮食样品中草甘膦、草铵膦和氨甲基膦酸的标准曲线，以及其中8种果蔬及粮食样品中草甘膦、草铵膦和氨甲基膦酸的回收率和精密度数据，结果见附录C。DB42/T 2036.120236AA附录A（资料性）草铵膦、草甘膦和氨甲基膦酸标准品多反应检测（MRM）色谱图图A.1图A.3给出了草铵膦、草甘膦和氨甲基膦酸标准品多反应检测（MRM）色谱图。图 A.1 草甘膦及其内标标准溶液（1.0 g/mL）多反应监测（MRM）色谱图图 A.2 草铵膦及其内标标准溶液（1.0 g/mL）多反应监测（MRM）色谱图DB42/T 2036.120237图 A.3 氨甲基膦酸及其内标标准溶液（1.0 g/mL）多反应监测（MRM）色谱图DB42/T 2036.120238BB附录B（资料性）方法的检出限、定量限和线性范围表B.1给出了果蔬及粮食中的检出限和定量限，表B.2给出了线性范围和相关系数。表 B.1 方法检出限和定量限序号化合物名称英文名称CAS No.检出限/mg/kg定量限/mg/kg1草甘膦Glyphosate1071-83-60.0050.022草铵膦Glufosinate ammonium77182-82-20.010.043氨甲基膦酸(Aminomethyl)phosphonic acid1066-51-90.010.04表 B.2 13 种基质中 3 种目标化合物的标准曲线方程和相关系数编号基质草甘膦草铵膦氨甲基膦酸标准曲线r2标准曲线r2标准曲线r21苹果y=0.210*x+0.2120.999y=0.190*x-0.6200.999y=0.198*x-0.7830.9982黄瓜y=0.225*x+0.4910.996y=0.199*x-0.07520.998y=0.190*x-0.07180.9973土豆y=0.195*x-1.350.997y=0.219*x-0.4120.999y=0.179*x-0.1820.9994芹菜y=0.224*x-0.3070.999y=0.183*x-0.2880.998y=0.202*x-0.9530.9975葡萄y=0.247*x-0.5230.999y=0.191*x+0.2650.998y=0.203*x-1.550.9996猕猴桃y=0.233*x-1.050.997y=0.184*x-0.2380.999y=0.191*x+0.6890.9967茶叶y=0.223*x-0.0370.998y=0.167*x-0.5270.998y=0.175*x-3.060.9988南瓜y=0.231*x-0.2220.998y=0.193*x+0.5070.999y=0.212*x-2.380.9989橙子y=0.258*x-0.6080.999y=0.195*x+0.4170.998y=0.163*x-0.5760.99610莴苣y=0.224*x-0.01090.996y=0.182*x-0.2340.999y=0.188*x-0.5370.99811大豆y=0.150*x+0.4760.996y=0.148*x-0.3610.999y=0.165*x-0.3790.99812大米y=0.243*x-0.4310.999y=0.225*x-0.3120.998y=0.195*x+0.1180.99813小麦y=0.233*x+2.080.997y=0.226*x-0.5640.998y=0.188*x-5.660.999DB42/T 2036.120239CC附录C（资料性）回收率和精密度表C.1给出了果蔬和粮食中的加标回收率，表C.2表C.9给出果蔬和粮食中的精密度。表 C.1 13 种基质中 3 种目标化合物的回收率序号基质样品氨甲基磷酸草甘膦草铵膦加标浓度/mg/kg检测结果/mg/kg回收率/%加标浓度/mg/kg检测结果/mg/kg回收率/%加标浓度/mg/kg检测结果/mg/kg回收率/%1苹果10.50.46592.90.20.218109.00.20.19597.621.01.06105.80.50.507101.40.50.510101.932.02.07103.71.01.02102.11.01.07107.42黄瓜10.50.45791.40.20.205102.60.20.205102.321.01.11110.80.50.523104.60.50.515103.032.01.8391.51.01.00100.21.01.11110.93土豆10.50.42885.50.20.203101.50.20.20099.921.00.87187.10.50.47194.20.50.44288.432.02.06103.01.00.99099.01.01.00100.34芹菜10.50.44288.40.20.20099.70.20.211105.521.00.97397.30.50.48897.70.50.509101.732.01.9798.71.01.06106.11.01.06106.55葡萄10.50.540108.00.20.18893.90.20.16683.221.01.04104.00.50.48496.90.50.520104.032.02.20109.91.01.02102.11.01.03103.16大豆10.50.44388.60.20.220110.00.20.219109.321.00.84484.40.50.568113.60.50.542108.432.01.7888.91.01.08108.01.01.04104.47茶叶10.50.41482.80.20.200100.10.20.224112.221.01.16115.90.50.520104.10.50.48897.632.01.6682.91.00.94694.61.01.06105.6DB42/T 2036.1202310图 C.1 13 种基质中 3 种目标化合物的回收率（续）序号基质样品氨甲基磷酸草甘膦草铵膦加标浓度/mg/kg检测结果/mg/kg回收率/%加标浓度/mg/kg检测结果/mg/kg回收率/%加标浓度/mg/kg检测结果/mg/kg回收率/%8猕猴桃10.50.567113.40.20.18291.20.20.18692.921.00.90090.00.50.551110.20.50.545109.032.02.10104.81.01.00100.21.01.06106.39南瓜10.50.534106.70.20.19296.10.20.202100.821.01.01101.30.50.549109.70.50.559111.832.02.15107.61.01.16115.91.01.04104.010橙子10.50.45891.70.20.212105.90.20.19396.521.00.91891.80.50.49498.80.50.48096.132.02.01100.51.00.98098.01.00.96996.911莴苣10.50.48296.30.20.18592.40.20.19597.421.01.03103.20.50.47494.80.50.535107.132.02.02100.91.00.98598.51.01.01101.412大米10.50.46292.40.10.098798.70.10.096196.121.00.89489.40.50.44589.00.50.49899.632.02.05102.31.00.95295.21.00.95595.513小麦10.50.41082.00.20.233116.30.20.18693.121.00.95595.50.50.585117.00.50.534106.732.02.16108.21.01.04104.31.00.96996.9表 C.2 大米中 3 种目标化合物的精密度化合物样品 1样品 2样品 3样品 4样品 5样品 6样品 7样品 8平均值/mg/kg相对标准偏差/%氨甲基膦酸0.2280.1980.2100.1920.2260.2200.2280.2160.2136.45草甘膦0.1870.1850.1870.1890.1870.1850.1870.1870.1860.68草铵膦0.1980.1960.1990.1930.2000.1930.1970.1910.1971.64DB42/T 2036.1202311表 C.3 番茄中 3 种目标化合物的精密度化合物样品 1样品 2样品 3样品 4样品 5样品 6样品 7样品 8平均值/mg/kg相对标准偏差/%氨甲基膦酸0.2100.2180.2070.1950.1940.2030.1910.1980.2024.62草甘膦0.2150.2140.2100.2080.2100.2050.2040.2020.2082.22草铵膦0.2630.2590.2570.2560.2590.2580.2440.2380.2543.33表 C.4 橘子中 3 种目标化合物的精密度化合物样品 1样品 2样品 3样品 4样品 5样品 6样品 7样品 8平均值/mg/kg相对标准偏差/%氨甲基膦酸0.2160.2480.2490.2000.2260.1970.2350.2400.2268.91草甘膦0.1910.1980.1910.1950.1870.1900.1910.1990.1932.13草铵膦0.1970.1970.1980.1970.1990.1960.2040.2030.1991.52表 C.5 苹果中 3 种目标化合物的精密度化合物样品 1样品 2样品 3样品 4样品 5样品 6样品 7样品 8平均值/mg/kg相对标准偏差/%氨甲基膦酸0.2230.2410.1970.2320.2090.2300.2270.2050.2216.99草甘膦0.2320.2250.2350.2290.2440.2450.2390.2470.2373.40草铵膦0.2060.2050.2030.1960.2040.1960.1970.1890.1992.99表 C.6 橙子中 3 种目标化合物的精密度化合物样品 1样品 2样品 3样品 4样品 5样品 6样品 7样品 8平均值/mg/kg相对标准偏差/%氨甲基膦酸0.2610.2280.2370.2240.2510.2530.2360.2370.2415.32草甘膦0.2050.2100.2170.2140.2130.2100.2100.2170.2121.93草铵膦0.1940.1980.1920.1990.2040.2040.1920.2060.1982.90表 C.7 猕猴桃中 3 种目标化合物的精密度化合物样品 1样品 2样品 3样品 4样品 5样品 6样品 7样品 8平均值/mg/kg相对标准偏差/%氨甲基膦酸0.1830.1970.1820.2070.2060.2110.2250.2250.2058.09草甘膦0.1900.1860.1910.1980.1970.1900.1840.1910.1912.51草铵膦0.2030.1930.1950.2040.2050.1890.2020.1880.1973.52DB42/T 2036.1202312表 C.8 南瓜中 3 种目标化合物的精密度化合物样品 1样品 2样品 3样品 4样品 5样品 6样品 7样品 8平均值/mg/kg相对标准偏差/%氨甲基膦酸0.1830.2180.1840.2010.1780.1950.1930.1930.1936.50草甘膦0.1740.1850.1880.1760.1860.1930.1940.1780.1844.06草铵膦0.1870.2030.1910.1900.2000.1980.1970.1920.1952.85表 C.9 土豆中 3 种目标化合物的精密度化合物样品 1样品 2样品 3样品 4样品 5样品 6样品 7样品 8平均值/mg/kg相对标准偏差/%氨甲基膦酸0.2080.1870.1880.2150.2200.2040.2090.2000.2045.87草甘膦0.2080.2090.2080.2080.2090.2210.2120.2160.2112.19草铵膦0.2240.2360.2260.2320.2290.2250.2360.2390.2312.44