DB51T1664-2023桑蚕种质资源继代保存技术规程.pdf

ICS 65.020.30 CCS B 47 四川省地方标准 DB51/T 16642023 代替 DB51/T 16642013 DB51 桑蚕种质资源继代保存技术规程 2023-06-19 发布 2023-08-01 实施 四 川 省 市 场 监 督 管 理 局 发布I 目 次 前言.II 1 范围.1 2 规范性引用文件.1 3 术语和定义.1 4 基本条件.1 5 饲育及继代要求.1 6 技术要求.2 7 数据修约.6 附录 A（资料性）桑蚕种质资源系统调查表.7 II 前 言 本文件按照GB/T 1.12020标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则的规定起草。本文件代替DB51/T 16642013桑蚕种质资源继代保存技术规程,与DB51/T 16642013相比，除编辑性修改外主要技术变化如下：修改了规范性引用文件（见2）；修改了术语和定义（见3）；增加了饲育及继代要求（见5）；修改了技术流程（见6）；增加了数据修约（见7）；增加了附表（见附录A）。本文件由四川省农业农村厅提出、归口并解释。本文件起草单位：四川省蚕业管理总站、四川省三台蚕种场、四川省南充蚕种场、四川省农业科学院蚕业研究所、凉山彝族自治州蚕种场。本文件主要起草人：杨远萍、蒋佳、谢忠良、杨忠生、肖文福、朱江、熊国林、杜鸿、曹宁宁、杨秀燕、刘彬斌、鲜跃荣、张胜林、贾晓虎。本文件的历次版本发布情况为：首次发布为DB51/T 16642013。本次为第一次修订。1 桑蚕种质资源继代保存技术规程 1 范围 本文件规定了桑蚕种质资源继代保存技术要求。本文件适用于四川省桑蚕种质资源继代保存。2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。NY/T 1093 桑蚕一代杂交种繁育技术规程 DB51/T 597 桑蚕原原种检验规程 DB51/T 844 桑蚕微粒子病防治技术规程 DB51/T 845 桑蚕一代杂交种冷藏技术规程 DB51/T 916 桑蚕种催青技术规程 DB51/T 1050 桑蚕原原种繁育与母种继代选择技术规程 DB51/T 1051 桑蚕一代杂交种保护技术规程 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。3.1 桑蚕种质资源 germplasm resources of silkworm 用于桑蚕种质保存、繁殖的品种或由自然突变、人工诱变、现代分子生物技术等所产生的遗传类型。4 基本条件 桑蚕种质资源保存单位应具备专用桑园、专用蚕室、控温控湿等设备设施，以及专业技术人员。5 饲育及继代要求 5.1 基本要求 5.1.1 每个资源制备蚕种 42 蛾，包括正式种 14 蛾、备用种 28 蛾。5.1.2 当年（季）继代保存完成、母蛾镜检合格后方可淘汰备用种。5.1.3 防混措施、环境条件按照 DB51/T 1050 执行。5.1.4 微粒子病防治按照DB51/T 844执行，检验检疫按照DB51/T 597执行。5.2 饲育方式 桑蚕种质资源继代采用混合育。2 5.3 饲育季节 5.3.1 每个资源在每年春季继代保育1次，其中夏秋用和抗逆性资源每2年秋季继代保育1次。5.3.2 人工饲料适应性资源每2年（季）开展1次人工饲料饲育。5.4 调查 5.4.1 常规调查 5.4.1.1 每次继代，对每个资源每区进行卵、幼虫、茧、蛹、蛾等性状调查，品种性状成绩为2区的平均值。5.4.1.2 调查时将不符合品种固有性状的个体淘汰，落地蚕一律淘汰。5.4.2 特殊性状调查 5.4.2.1 抗病性资源每3年（季）添食相应病毒（菌）开展1次抗病性检测。5.4.2.2 人工饲料适应性资源每年开展1次24 h疏毛率调查。5.4.3 丝质调查 每5年开展1次。5.4.4 图片拍摄 5.4.4.1 每5年开展1次。5.4.4.2 蚕卵、蚁蚕应以蚕连纸为背景，其他发育阶段应以蓝色为背景色，像素800万以上，水平方向置标尺。垂直拍摄彩色照片，照片长宽比宜为4:3，大小宜不低于2 MB。6 技术要求 6.1 技术流程图 技术流程见图1。图1 技术流程图 6.2 出库 蚕种出库按照DB51/T 1050执行。6.3 催青与分区 出库 催青与分区 收蚁 制种与调查 蚕种保护、冷藏与卵期调查 上蔟采茧与调查 饲育 资料建档 蛹期保护与调查 蛾期保护与调查 3%100%未孵化蚕卵粒数孵化蚕卵粒数孵化蚕卵粒数）孵化率（6.3.1 催青 将正式种按计划出库催青。催青技术按照 DB51/T 916 执行，调查从丙2胚胎至孵化的时间，记录催青经过。6.3.2 分区 在蚕种转青包种时，用白纸封包成 2 区，每区 7 蛾，放入黑暗室保护。6.4 收蚁 6.4.1 收蚁方法 分区收蚁，收蚁方法按照 DB51/T 1050 执行，统一编排饲育号，做好记录，填写 DB51/T 1050 中的饲育采茧调查表。6.4.2 收蚁调查 按下列要求进行：a)在孵化后给桑前，观察记录蚁蚕体色；b)在自然光下观察记录蚕卵孵化后的卵壳色；c)收蚁当天随机抽查 6 个卵圈，点数孵化蚕卵粒数、未孵化蚕卵粒数，计算孵化率，记录孵化整齐度。（1）6.4.3 蚁蚕拍摄 特殊蚁色品种，在孵化当日 8 时10 时，选取 1 个刚孵化的完整卵圈拍摄。6.5 饲育 6.5.1 饲育技术 环境控制、给桑、除沙、眠起处理，按照 DB51/T 1050 执行。6.5.2 幼虫期定蚕 2龄、3龄眠起后，分别淘汰弱小蚕、病蚕和迟眠蚕，每龄每区保留50%70%健康蚕。4 龄起蚕后24 h36 h数蚕，每区定蚕350头400头。6.5.3 幼虫期调查 按下列要求进行：a)饲养中，观察饲育区各龄眠起情况，记录眠起整齐度；b)1 龄3 龄期观察稚蚕有无趋光性、趋密性、背光性、逸散性，记录蚁蚕趋性；c)记录4龄5龄淘汰蚕头数；d)记录5龄经过、幼虫期经过；4%100%全茧量茧层量）茧层率（%10054%蔟中病死蚕头数龄淘汰蚕头数龄结茧蚕头数结茧蚕头数）对四龄蚕结茧率（%100%结茧蚕头数普通茧死笼头数同宫茧死笼头数屑茧死笼头数）死笼率（%100%四龄蚕头数健蛹数）对四龄蚕健蛹率（e)在5龄或末龄盛食期观察记录食桑习性、壮蚕体色、壮蚕体型、壮蚕斑纹；随机取1头2头幼虫，茧色限性品种雌雄各1头，剪去尾角或1个腹足，将体液滴到载玻片上，立即在自然光下观察其颜色，记录体液色。6.5.4 幼虫拍摄 取5龄或末龄的盛食期蚕2头（斑纹限性品种雌雄各1头），放置于5 10 冷藏2 min后取出，相距2 cm3 cm并列垂直放置拍摄。6.6 上蔟采茧与调查 6.6.1 上蔟采茧技术 上蔟准备、上蔟方法、蔟中保护、采茧适期、采茧方法、剥茧衣等按照DB51/T 1050执行。每个品种分区采茧。6.6.2 上蔟采茧调查 按下列要求进行：a)见熟后适时捉熟上蔟，记录始熟、盛熟和终熟时间，调查老熟整齐度；b)采茧前揭开覆蔟网，观察蚕茧的空间分布比例，记录营茧特性。采茧时，记录蔟中病死蚕数、烂茧、不结茧蚕头数；c)采下的蚕茧按普通茧、同宫茧、屑茧分类计数，统计结茧蚕头数，计算普茧率、对四龄蚕结茧率、死笼率、对四龄蚕健蛹率；（2）（3）（4）（5）d)观察记录茧衣量、茧色、茧形、缩皱、茧层状态；e)从普通茧中随机抽取10粒，用游标卡尺测量，记录茧长、茧幅；f)从普通茧中随机切剖雌、雄各25粒，分别称量25粒全茧量、茧层量，计算雌雄平均全茧量、茧层量、茧层率。（6）6.6.3 茧期拍摄 选2粒普通茧（茧色限性品种雌雄各1粒），相距2 cm3 cm并列垂直放置拍摄。%100%屑茧数量同宫茧数量普通茧数量普通茧数量）普茧率（5 6.6.4 丝质检测 6.6.4.1 留足继代用蚕茧后，混合2区普通茧，随机抽取160粒，采用二次烘干法烘茧，烘干称重后装袋，袋内外置挂标签，标明品种名称、饲育编号、净重、粒数，一周内将干样茧送交丝质检验单位检测。6.6.4.2 丝质检验单位收到样茧后，记录样茧情况，并在6个月内完成茧丝长、解舒丝长、解舒率、茧丝量、茧丝纤度、洁净等6个指标检验。6.7 蛹期保护与调查 6.7.1 蛹期保护技术 蛹期保护技术按照NY/T 1093执行。6.7.2 蛹期调查 在复眼开始着色时，自然光下观察选留蚕蛹的体色和体态，记录蛹体色、蛹体态。6.7.3 蛹期拍摄 取雌雄蚕蛹各1粒腹面向上，头部向上，相距2 cm3 cm并列垂直放置拍摄。6.8 蛾期保护与调查 6.8.1 蛾期保护技术 蛾期保护技术按照NY/T 1093执行。6.8.2 蛾期调查 按下列要求进行：a)盛发蛾时，自然光线下观察记录羽化当日蛾体态、蛾眼色、蛾翅，分雌雄记录蛾体色、蛾体形、蛾行动；b)始发蛾后第2 d、3 d、4 d，每日6时感光，8时以后统计计算当日雌、雄蚕蛾数量的比例，根据连续几日调查结果，记录羽化习性；c)记录盛发蛾时间、蛰中经过。6.8.3 蛾期拍摄 选取1对雌雄交尾状态的蚕蛾，雄蛾在上、雌蛾在下拍摄。6.9 制种与调查 6.9.1 交配 采用同品种异区交配，交配时间3 h4 h。6.9.2 制种 6.9.2.1 单蛾框制42蛾蚕种。6.9.2.2 产卵24 h后核对品种、饲育号、交配号、连纸号无误后单蛾装盒，干燥、保存。6.9.2.3 母蛾装盒和干燥保存按照DB51/T 1050执行。6.9.3 繁育性能调查 6%100%总卵粒数良卵粒数）良卵率（%100%总卵粒数不受精卵粒数）不受精卵率（按下列要求进行：a)交配后观察交配性能、散对情况，记录交尾性能；b)调查投蛾6 h后的产卵情况，记录产卵快慢；c)投蛾产卵第2 d上午观察蚕连纸上蚕卵黏附是否牢固、分布是否平整，记录卵胶着性、产附平整性；d)在蚕卵产下10 d后，观察是否有蚕卵孵化，记录有无生种发生。6.10 蚕种保护、冷藏与卵期调查 6.10.1 蚕种保护、冷藏技术 6.10.1.1 春制越年种或秋制越年种蚕种保护按照DB51/T 1051执行。6.10.1.2 蚕种浴消入库时平均分为3份，分别编为正式种、备用种1、备用种2。6.10.1.3 蚕种冷藏按照DB51/T 845执行。6.10.2 卵期调查 按下列要求进行：a)在自然光线下，观察记录卵形、卵色，滞育卵的卵形可在冬季调查。b)随机选取6个卵圈，滞育卵在浴消后，非滞育卵在产下后转青时，点数单蛾产卵粒数、良卵数、不受精卵数，计算良卵率、不受精卵率。（7）（8）6.10.3 卵期拍摄 随机选择2个卵圈拍摄。滞育卵在产卵后5 d至翌年催青前拍摄，非滞育卵在产卵后3 d7 d拍摄。6.11 资料建档 蚕季结束后，应对饲育资料进行整理归档，主要包括下列内容：a)饲育采茧调查表；b)每5年填报1次桑蚕种质资源系统调查表（见附录A，桑蚕种质资源概况表参见表A.1、桑蚕体形外貌登记表参见表A.2、桑蚕生产性能登记表参见表A.3、桑蚕种质资源影像材料参见表A.4）；c)制种清单。7 数据修约 茧丝长、解舒丝长计量数据为整数；茧长、茧幅保留小数点以下一位；良卵率、不受精卵率保留小数点以下两位；茧丝量、茧丝纤度保留小数点以下三位；其余指标按照DB51/T 1050执行，小数点有效数后一位采取四舍六入五奇进方法处理。7 附 录 A（资料性）桑蚕种质资源系统调查表 表 A.1 至表 A.4 给出了桑蚕种质资源系统调查表。表 A.1 桑蚕种质资源概况表 品种名称 其它名称 品种类型 地方品种 培育品种 引入品种 经济类型 资源型：实用型：多丝量 中丝量 少丝量 抗病/逆 彩色茧 斑纹限性 地理系统 中国系统 日本系统 欧洲系统 热带系统 品种来源及形成历史 保存单位 化性 一化 二化 有滞育多化 无滞育多化 眠性 三眠 四眠 五眠 其他：适应生态区域 长江流域 黄河流域 珠江流域 其他：适宜饲养季节 春季 夏季 秋季 春秋兼用 中心饲养区 无 长江流域 黄河流域 珠江流域 其他：资源评价 遗传特点：常规 三眠蚕 致死突变 隐性遗传 限性遗传 特殊斑纹：彩色蚕茧：优异特性：高茧层率 长丝长 粗纤度 细纤度 高产 优质 抗 BmNPV 抗高温 其他：利用方向：优质基因 育种素材 基因功能解析 生物医学模型 其他：开发利用情况 饲养区域：无 1 个省区 2 个省区 3 个以上省区 组配的品种数量：无 1 对 2 对 3 对以上 8 表 A.2 桑蚕体型外貌登记表 卵形 椭圆 纺锤 肾形 长形 特大 其它：卵色 绿色 灰绿色 灰色 灰紫色 紫色 淡黄色 其它：蚁蚕体色 赤色 黑褐色 淡黄色 其它：卵壳色 白色 乳白色 淡黄色 黄色 其他：稚蚕趋性 无 趋光性 趋密性 背光性 逸散性 食桑习性 踏叶 不踏叶 壮蚕体色 青白 青赤 黄色 灰黑色 油蚕 斑点油蚕 其他：壮蚕体型 细长 普通 粗壮 有瘤状突起 其他：壮蚕斑纹 素斑 普通斑 暗色斑 黑色蚕 黑缟 鹑斑 虎斑 褐圆斑 多星纹 斑点蚕 皋蚕 无半月斑 其他：体液色 淡黄色 黄色 雌蚕黄色、雄蚕淡黄色 老蚕整齐度 齐涌 较齐 不齐 营茧特性 多上层茧 多中层茧 多底层茧 茧衣量 少 中 多 茧色 白色 竹色 金黄 土黄 稻草黄 橘红色 桃红色 绿色 其他：茧形 椭圆 球形 束腰 纺锤形 长筒形 锥形 薄头茧 薄腰茧 缢痕 其他：缩皱 细 中 粗 绵茧 蛹体色 棕色 褐色 黑色 蛹体态 正常蛹 鳌虾蛹 黑翅蛹 白翅蛹 小翅蛹 雏翅蛹 邹翅蛹 痕迹翅蛹 无翅蛹 其他：蛾体色 雌：正常 灰褐 暗红 其他：雄：正常 灰褐 暗红 其他：蛾体形 雌：正常 瘦小 肥大 雄：正常 瘦小 肥大 蛾体态 正常蛾 小翅蛾 雏翅蛾 邹翅蛾 痕迹翅蛾 无翅蛾 其他：蛾眼色 白 红 黄 黑 蛾翅 有花纹斑 无花纹斑 无鳞毛（透明翅）蛾行动 雌：正常 活泼 文静 雄：正常 活泼 文静 9 表 A.3 桑蚕生产性能登记表 发育与生命力性状 催青经过（日：时）五龄经过（日：时）幼虫期经过（日：时）蛰中经过（日：时）蚕卵孵化情况 齐（90%）较齐（80%90%）不齐（80%）眠起整齐度 齐 较齐 不齐 对四龄蚕结茧率（%）死笼率（%）对四龄蚕健蛹率（%）茧、丝品质 茧长（cm）茧幅（cm）茧层状态 紧实 多层 绵茧 普茧率（%）全茧量（g）茧层量（g）茧层率（%）茧丝长（m）解舒丝长（m）解舒率（%）茧丝量（g）茧丝纤度（dtex）洁净（分）繁育性能 羽化习性 雌雄同步 雌先 雄先 发蛾齐涌 发蛾不齐 交尾习性 良好 一般 难交 易散对 不易散对 产卵快慢 快 中等 慢 卵胶着性 好 差 无胶着性 产附平整性 平整 不平整 少数叠卵 叠卵多 单蛾产卵粒数（粒）良卵率（%）不受精卵率（%）生种 10 表 A.4 桑蚕种质资源影像材料 品种名称：蚕卵照片（2 卵圈）蚁蚕照片（仅蚁色特殊时拍照，1 卵圈）壮蚕照片（2 头，斑纹限性 1 雌+1 雄）蚕茧照片（2 粒茧）蚕蛹照片（复眼开始着色，1 雌+1 雄）成虫照片（1 雌 1 雄交尾状，1 对）视频资料 1 视频资料 2