（高清正版）DB37_T 3771-2019 枣疯病综合防控技术规程.pdf

ICS 65.020 B 16 DB37 山东省地方标准 DB 37/T 37712019 枣疯病综合防控技术规程 Technical regulation for integrated management of jujube witches-broom 2019-12-05 发布 2020-01-05 实施 山东省市场监督管理局 发 布 前 言 本标准按照GB/T 1.12009给出的规则起草。本标准由山东省农业农村厅提出并组织实施。本标准由山东农业标准化技术委员会归口。本标准起草单位：山东省果树研究所、山东省农业科学院植物保护研究所。本标准主要起草人：高瑞、王洁、周广芳、路兴波、杨淑珂、孙红炜、艾呈祥、张琼、王中堂、余贤美。枣疯病综合防控技术规程 1 范围 本标准规定了枣疯病发病规律、发病症状、普查、鉴定及综合防治措施。本标准适用于山东省枣产区枣疯病综合防治。2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T 8321（所有部分）农药合理使用准则 NY/T 393 绿色食品 农药使用准则 NY/T 1276 农药安全使用规范总则 3 术语与定义 下列术语和定义适用于本文件。3.1 植原体 Phytoplasma 一类无细胞壁、不能人工培养的单细胞原核生物、专性寄生于寄主植物韧皮部筛管组织和传播介体昆虫的肠道、淋巴、唾腺等组织，对四环素类抗生素敏感。侵染植物后常引起叶片黄化、丛枝、矮化、茎杆带化及花器绿变等症状。3.2 枣疯病 Jujube witches-broom 由枣疯病植原体（Jujube witches-broom phytoplasma）侵染引起的一种枣树致死性、维管束系统性病害。3.3 枣疯病双抗夹心酶联免疫吸附（DAS-ELISA）检测 利用枣疯病植原体免疫膜蛋白抗体（来源于兔）及碱性磷酸酯酶标记的羊抗兔进行ELISA检测样品的吸光值（I）与健康植株（H）的吸光值。根据I/H的比值来判断枣疯植原体的存在与否。4 发病规律 4.1 传播途径 枣疯病植原体主要通过媒介昆虫、嫁接和带病苗木进行传播。4.2 发病特点 枣疯病潜伏期及危害情况与品种、生态环境和管理条件等因子有关。在冷凉地区发病较轻，管理粗放的枣树发病较重。品种间枣疯病发生情况差异很大，一般从局部枝条先发病，逐渐蔓延，一般感病枣树发病后，小树1年2年，大树5年6年全树即死亡。5 发病症状 5.1 根部症状 初期表皮呈褐色，萌生的根蘖呈丛枝状，后期形成点发性溃疡斑，继而枯死。5.2 枝条症状 病株枝条的主芽、隐芽和副芽多次萌发，形成节间缩短的细弱丛生状枝条，伴随叶片变小黄化，休眠期不脱落。5.3 花器症状 花器退化返祖，花梗延长至正常花梗的3倍6倍，有些病株萼片、花瓣、雄蕊发育成小叶，呈花变叶状；有些病株萼片、花瓣变为绿色，雄蕊和雌蕊败育，呈绿瓣状。5.4 果实症状 结果少或不结果，果实小、花脸，肉质硬，口感差。6 普查与鉴定 6.1 田间普查 每年8月10月进行逐株检查，枝条节间缩短、簇生，叶片黄化变小为病害诊断主要依据，对查出的病株做好明显标记，统计发病率。6.2 室内病原鉴定 6.2.1 聚合酶链式反应（PCR）检测方法 检测方法见附录A。6.2.2 双抗夹心酶联免疫吸附（DAS-ELISA）检测方法 检测方法见附录B。7 防治措施 7.1 检疫措施 加强枣树接穗、砧木等繁殖材料和苗木的检疫和检测，不使用来自枣疯病发生区的枣苗建园。发现带病或带菌植物繁殖材料应及时销毁，防止病害扩散蔓延。7.2 建园要求 7.2.1 园地选择 新建枣园宜在没有发生枣疯病的地块建园。7.2.2 立地条件 平原、丘陵、山地均可栽培，选择地势较高，土质疏松，耕作层深厚，排水良好的沙壤土或壤土种植。盐碱土壤地区，应选5 cm60 cm土层，总盐量低于0.3%的地块。7.2.3 品种及苗木选择 建园时优先选用耐病品种的苗木、砧木或接穗。推广应用脱毒苗，在网室内建立优良品种无毒采穗圃。7.3 栽培管理措施 7.3.1 肥水管理 因地制宜，秋季施基肥，适时追肥，合理施用叶面肥。土壤水分保持在田间土壤相对含水量60%70%为最佳，根据土壤墒情、不同生长时期适时灌水，并应设置排水沟，雨季及时排水防涝。7.3.2 合理修剪 适度修剪，合理整形，提高树体通透性和光照强度。7.4 病株的处理与更新 7.4.1 销毁补栽 新建园应首先对传病媒介等进行一次防治，然后将病株连根挖除并销毁，经土壤消毒、充分晾晒树坑后再进行补栽。7.4.2 输液治疗 在进行疯枝清理后，可辅助树干输液（滴注）延缓病情发展，最佳治疗时期为枣树展叶期。输液治疗方法见附录C。7.5 防治媒介昆虫 主要传毒媒介为中华拟菱纹叶蝉（Hishimonoides chinensis A.）、凹缘菱纹叶蝉（Hishimonus selltus U.）、片突菱纹叶蝉（Hishimonus lamellatus C.）和红闪小叶蝉（Typhlocyba sp.）等。可选用内吸性、触杀性的杀虫剂，使用方法按照GB/T 8321、NY/T 393和NY/T 1276执行。A A 附 录 A（规范性附录）枣疯病病原聚合酶链式反应（PCR）检测方法 A.1 感病和健康枣树总DNA提取方法 采取症状明显的和健康的枣树幼嫩枝条、叶片或者花样本，样本短时间（1周内）可于4 冰箱保存，长时间需于-80 冰箱保存。用商品化植物基因组DNA快速提取试剂盒提取。A.2 PCR扩增引物、反应体系及程序 A.2.1.1 以植原体16S rRNA基因通用引物R16mF2（5-CAT GCA AGT CGA ACG GA-3）/R16mR1（5-CTT AAC CCC AAT CAT CGA C-3）进行PCR扩增。并设置健康枣树组织DNA为阴性对照，清水为空白对照。A.2.1.2 PCR 反应体系：PCR反应体系参照Taq 酶说明书。扩增程序：预变性温度94，3 min；然后94变性 45 s，60 退火1 min，72 延伸2 min，35个循环。最后72 延伸10 min。A.3 电泳检测 PCR产物于1.0%琼脂糖凝胶电泳检测。阳性材料直接PCR扩增片段大小约1.4 kb，阴性对照及空白对照均应无扩增片段。A.4 序列测定及分析 PCR产物直接送测序公司测序。将所得DNA序列输入GenBank（http:/www.ncbi.nlm.nih.gov）进行Blast检索，初步确定病原种类。B B 附 录 B（规范性附录）枣疯病植原体双抗夹心酶联免疫吸附（DAS-ELISA）检测方法 B.1 样品处理 将疑似病样按照1:10或1:100的比例加入抗原包被缓冲液，研磨后取上清备用。B.2 样品包被 取150 L稀释的检测样品液加入96孔酶标板中，以枣疯植原体阳性标准品为阳性对照，以健康枣树标准品为阴性对照，在4 条件下孵育过夜或37 孵育1 h2 h。B.3 洗板 将酶联板迅速反扣，弃去孔中液体，每孔加入PBST液200 L，静置3 min5 min后迅速弃去孔中液体，并在吸水纸上扣打几下以尽量除去孔中液体，重复3次。B.4 封闭 去除酶标板中的PBST缓冲液，每孔加入150 L的封闭缓冲液，37 恒温箱孵育1.5 h。B.5 洗板 同步骤C.3。B.6 加一抗 用PBST稀释枣疯植原体免疫膜蛋白抗体（来源于兔）至合适的工作浓度（1:1 000），每孔样品加150 L，37 恒温箱孵育2 h。B.7 洗板 同步骤C.3。B.8 加酶标抗体 每孔加入150 L PBST稀释的碱性磷酸酯酶标记的羊抗兔（1:5 000），37 恒温箱孵育2 h。B.9 洗板 同步骤C.3。B.10 底物显色 每孔加底物溶液150 L；室温避光显色30 min60 min；酶联仪在405 nm下读数。B.11 结果判定 I/H=（待测样品读数空白读数）/（阴性样品的读数空白读数）3判断为阳性反应；反之则为阴性。C C 附 录 C（规范性附录）药剂防治枣疯病的方法 药剂防治枣疯病的方法见表C.1。表C.1 药剂防治枣疯病的方法 药剂选择 四环素类农用抗生素 使用时间 枣树展叶期，5 月上旬 使用方法 配药 药液需随用随配。按照药剂使用说明，用适量的干净清水溶解药后，用 4 层6 层纱布或滤纸过滤，减少沉淀。每瓶装药液 500 mL。打孔 对应疯枝方向在主干距地面 20 cm 处，向下倾斜 45 钻深达木质部 2 cm3 cm，孔径 0.45 cm的注药孔。若多侧均有疯枝时，打孔数量依据树干直径决定，树干直径10 cm，只需打对应最严重的疯枝方向打 1 个孔，树干直径10 cm，打 2 个孔，树干直径每增加 10 cm，就多增加 1个孔，1 棵树最多打 4 个孔。孔与孔之间沿树干水平均匀分布，垂直有 10 cm 落差。注意注药孔附近不能有树洞和裂缝，避免造成漏液。输液 输液瓶悬挂在距地面至少 1.5 m 的位置。清理干净孔中的碎木屑避免堵塞针头。不漏液且能正常滴液后，放到最大输液速度处输液。输完液后用泥巴涂抹好孔口，以防药液挥发。使用药量 树干直径 10 cm15 cm，一次使用 2 瓶；15 cm20 cm，一次使用 4 瓶；20 cm25 cm，一次使用 6 瓶，25 cm30 cm 使用 8 瓶。30 cm 以上每增加 1 cm 多使用 0.5 瓶药液。使用次数 一般 1 月 1 次，连续输液 23 个月，可延缓病害发生。_