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一、选择题
1．下列有关植物细胞工程的叙述，正确的是( )
A．脱分化过程中植物细胞会失去其特有的结构和功能
B．再分化过程中只需要细胞分裂素作用即可
C．白菜与甘蓝均为二倍体，经体细胞杂交可得二倍体“白菜—甘蓝”新品种
D．植物体细胞杂交与动物细胞融合的方法完全全都
解析：选A 再分化过程中需生长素与细胞分裂素共同作用，只是细胞分裂素的效应高于生长素；因杂交细胞含有两个物种的四个染色体组，所以两种二倍体经体细胞杂交所得生物为异源四倍体；动物细胞融合可用灭活的病毒处理，而植物体细胞杂交不能。
2．(2021·重庆高考)某爱好小组拟用组织培育繁殖一种贵重花卉，其技术路线为“取材→消毒→愈伤组织培育→出芽→生根→移栽”。下列有关叙述，错误的是( )
A．消毒的原则是既杀死材料表面的微生物，又削减消毒剂对细胞的损害
B．在愈伤组织培育中加入细胞融合的诱导剂，可获得染色体加倍的细胞
C．出芽是细胞再分化的结果，受基因选择性表达的调控
D．生根时，培育基通常应含α萘乙酸等生长素类调整剂
解析：选B 植物组织培育中消毒的原则是既杀死材料表面的微生物，又削减消毒剂对培育材料的损害；植物体细胞的杂交需先除去细胞壁得到原生质体，再在细胞融合诱导剂作用下获得染色体加倍的细胞；细胞分化的实质是基因的选择性表达；植物组织培育过程中，生根阶段的培育基中通常应含有生长素类调整剂。
3．细胞工程中，选择合适的生物材料是成功的关键。下列选择不合理的是( )
A．选择高度分化的动物体细胞进行培育有利于获得大量细胞
B．选择胚胎细胞作为核供体进行核移植可提高克隆动物的成功率
C．选择确定大小的植物茎尖进行组织培育可获得脱毒苗
D．选择植物的愈伤组织进行诱变处理可获得优质的突变体
解析：选A 培育动物细胞时，应当选择增殖力气强、分化程度低的组织或器官，如幼龄动物的组织。胚胎细胞的分化程度低，进行核移植能够提高克隆动物的成功率。植物茎尖由于没有病毒，通过植物组织培育可以获得脱毒苗。愈伤组织的分裂力气强，对其进行诱变处理后可获得优质的突变体。
4．下列关于动物细胞培育的叙述中，正确的是( )
A．动物细胞培育的目的就是为获得细胞分泌蛋白
B．动物细胞培育前要用胰蛋白酶处理使细胞分散开
C．动物细胞培育通常不会毁灭接触抑制现象
D．可以通过细胞培育技术获得完整的动物个体
解析：选B 动物细胞的培育是为了获得更多的动物细胞，不同于植物组织培育，它无法获得完整动物个体。在培育之前对材料要用胰蛋白酶处理使细胞分散开，在培育过程中动物细胞会毁灭接触抑制现象。
5．下列与细胞工程技术相关的表述中，不正确的是( )
A．植物体细胞杂交技术可以克服常规的远缘杂交不亲和障碍
B．动物细胞培育与植物组织培育所用的培育基成分相同
C．动物细胞融合与植物原生质体融合的基本原理相同
D．植物组织培育技术的理论基础是细胞的全能性
解析：选B 植物体细胞杂交可以把来自不同植物细胞融合在一起，克服了自然状态下植物间远缘杂交不亲和障碍，融合后的细胞能培育成一个植物个体，体现了植物细胞全能性，细胞融合原理是膜的流淌性，但植物细胞培育基除基本成格外还需要植物激素，动物细胞培育液还需要动物血清。
6．某争辩小组为测定药物对体外培育细胞的毒性，预备对某种动物的肝肿瘤细胞(甲)和正常肝细胞(乙)进行动物细胞培育。下列说法正确的是( )
A．在利用两种肝组织块制备肝细胞悬液时，也可用胃蛋白酶处理
B．细胞培育过程中加入的O2和CO2作用相同
C．甲、乙细胞在持续的原代培育过程中，乙会毁灭停止增殖的现象
D．仅用该培育液也能用来培育乙肝病毒
解析：选C 胃蛋白酶最适pH值接近于2，在酸性条件下作用强，而细胞培育液的pH值接近于中性，所以不能用胃蛋白酶处理。CO2的作用是调整细胞培育液的pH值，而O2是细胞代谢所必需的。由于存在细胞接触抑制现象，所以在原代培育过程中，乙会毁灭停止增殖的现象，需要传代培育获得细胞株和细胞系；病毒在活细胞内才能增殖，不能用培育细胞的培育液进行培育。
二、非选择题
7．将胚状体包埋在一个能供应养分的胶质中，便成了所谓的人工种子。其培育过程如图所示，请回答：
(1)人工种子依据的原理是________，经过________________技术培育而成的。
(2)包埋胚状体的胶质可以看做种子的哪部分结构？________________。
(3)假如外植体为植物的茎尖，通过①的处理可使细胞彼此分别，可加入______(填序号)。
A．蛋白酶 B．淀粉酶
C．果胶酶 D．胰蛋白酶
(4)②表示脱分化过程，其实质是______________；③表示再分化的过程，其实质是___。
(5)从上面所述胚状体的类型分析，人工种子萌发长成的植株是否可育？___________。
解析：(1)人工种子能发育成完整的植株，说明其细胞内含有个体发育的全部遗传信息，因此依据的原理是细胞的全能性，经过植物组织培育得以表达。(2)包埋胚状体的胶质有疼惜胚状体的作用，同时又可以为胚状体供应养分物质，所以可以看做种皮及胚乳。(3)使植物细胞彼此分别可以使用果胶酶，由于植物细胞壁的主要成分是果胶。(4)脱分化实质上是恢复分裂力气，而再分化就是分化，其实质是基因的选择性表达。(5)由题目信息可知，人工种子的胚状体可来自茎尖、芽尖、子房、花粉等，假如来自花粉，得到的个体是单倍体，单倍体一般高度不育。
答案：(1)细胞的全能性 植物组织培育 (2)种皮及供应养分的胚乳或子叶 (3)C (4)使细胞恢复分裂 基因的选择性表达 (5)若是由花粉(或三倍体植物的养分器官)发育而来的则不行育，若是由茎尖、根尖等养分器官发育而来的则可育
8．(2021·天津高考)花椰菜易受黑腐病菌的危害而患黑腐病。野生黑芥具有黑腐病的抗性基因。用确定剂量的紫外线处理黑芥原生质体可使其染色体片段化，并丢失再生力气。再利用此原生质体作为部分遗传物质的供体与完整的花椰菜原生质体融合，以获得抗黑腐病杂种植株。流程如下图。
据图回答下列问题：
(1)过程①所需的酶是______________________________________________________。
(2)过程②后，在显微镜下观看融合的活细胞中有供体的________存在，这一特征可作为初步筛选杂种细胞的标志。
(3)原生质体培育液中需要加入适宜浓度的甘露醇以保持确定的渗透压，其作用是______________________。原生质体经过________再生，进而分裂和脱分化形成愈伤组织。
(4)若分析再生植株的染色体变异类型，应剪取再生植株和________植株的根尖，通过________、________、染色和制片等过程制成装片，然后在显微镜下观看比较染色体的形态和数目。
(5)接受特异性引物对花椰菜和黑芥基因组DNA进行PCR扩增，得到两亲本的差异性条带，可用于杂种植株的鉴定。下图是用该引物对双亲及再生植株1～4进行PCR 扩增的结果。据图推断，再生植株1～4中确定是杂种植株的有____________________。
(6)对杂种植株进行________接种试验，可筛选出具有高抗性的杂种植株。
解析：图中(1)过程①是获得黑芥叶肉细胞的原生质体和花椰菜根细胞的原生质体，该过程需用纤维素酶和果胶酶去除细胞壁。(2)供体细胞为黑芥叶肉细胞含有叶绿体，而受体花椰菜的根细胞无叶绿体，因此可以依据叶绿体的有无初步筛选出杂种细胞。(3)加入甘露醇以保持渗透压，是为了维持原生质体的完整性，防止原生质体吸水涨破。原生质体再生出细胞壁，经过脱分化形成愈伤组织。(4)若分析再生植株的染色体变异类型，需将再生植株细胞的染色体与亲本即黑芥和花椰菜的染色体进行比较；观看染色体的形态和数目需在有丝分裂中期观看，因此需要经过解离、漂洗、染色、制片等过程制成装片。(5)杂种植株需含有双亲的遗传物质，分析图形可知，再生植株1、2、3、4均含有花椰菜的DNA，其中1含有黑芥的全部DNA,2、4含有黑芥的部分DNA，而3不含有黑芥的DNA，因此1、
2、4确定是杂种植株。(6)为培育具有抗黑腐病的杂种植株，需对得到的杂种植株进行黑腐病菌接种试验，观看其是否患病，不患病的即为高抗性的杂种植株。
答案：(1)纤维素酶和果胶酶 (2)叶绿体 (3)保持原生质体完整性 细胞壁 (4)双亲(或花椰菜和黑芥) 解离 漂洗 (5)1、2、4 (6)黑腐病菌
9．(2022·泉州质检)狂犬病的病原体为RNA病毒，其表面的G蛋白可作为主要抗原用于制备狂犬病疫苗。争辩人员利用生物工程技术培育出转G基因番茄，实现G蛋白的大量生产。其基本技术流程如下图。请回答：
MN
(1)图中，过程①称为____________；过程②接受最多的方法是____________。
(2)图中，N称为__________；过程③称为________。
(3)食用G基因已有效表达的转基因番茄果实________(填“能”或“不能”)预防狂犬病。
解析：(1)由于M能通过PCR获得G基因，所以M为基因，过程①称为反转录(或逆转录)，基因表达载体导入植物细胞接受最多的方法是农杆菌转化法。(2)分化的番茄细胞通过脱分化得到N称为愈伤组织，然后再通过过程③再分化得到胚状体。(3)食用G蛋白会破坏蛋白质的结构，所以不能预防狂犬病。
答案：(1)反转录(或逆转录) 农杆菌转化法
(2)愈伤组织 再分化 (3)不能
10．科学家通过转基因技术获得了含有人生长激素基因的奶牛，假如要加速转基因奶牛的繁育，可以对此转基因奶牛进行克隆(如下图所示)，请结合图示回答下列问题：
(1)在进行细胞培育时，要对取自转基因奶牛的组织细胞进行分散处理，形成单个细胞，这个过程中需要利用________酶处理。
(2)形成重组细胞时应选用________期的卵母细胞，去掉其细胞核的缘由是________。
(3)假如重组细胞为贴附性细胞，则在进行原代培育时，会表现出________和__________等特点。
(4)图中犊牛并非是对体细胞核供体母牛100%的复制，其主要缘由是_____、_______。
(5)上图中所示的生物技术整体被称为________。其包括的具体生物技术有________、________等。转基因奶牛的克隆成功，说明白动物________________具有全能性。
解析：(1)胰蛋白酶可以水解动物细胞间的蛋白质成分，使细胞相互分别。(2)利用核移植形成重组细胞时需要用发育至减Ⅱ中期的卵母细胞，若不对其做去核处理，重组细胞的遗传物质含量就不正常。(3)贴附性细胞表现出贴壁生长的特性，并且会毁灭接触抑制现象，故要定期用胰蛋白酶将贴壁生长的细胞从瓶壁上分别下来。(4)重组细胞的遗传物质源于体细胞的细胞核和卵细胞的细胞质，同时生长环境对其表现型也有影响。(5)图示为体细胞核移植技术，所包括的技术有动物细胞培育、胚胎移植等。转基因奶牛培育成功，说明动物体细胞核具有全能性。
答案：(1)胰蛋白(或胶原蛋白)
(2)减Ⅱ中 使克隆出的动物个体的遗传物质几乎全部来自供体细胞(或“避开卵细胞中的遗传物质对后代造成干扰”，其他合理答案也可)
(3)贴壁生长(或细胞贴壁) 接触抑制(两空挨次可以颠倒)
(4)生物的性状受细胞核基因和细胞质基因共同把握 生物的性状还受环境因素的影响(两空挨次可以颠倒，其他合理答案也可)
(5)核移植(或体细胞核移植) 细胞培育 胚胎移植 体细胞的细胞核
11．下图是制备分泌抗X抗体的过程，依据图解回答问题：
(1)给小鼠注射抗原的目的是_____________________________________________。
(2)在单克隆抗体制备过程中之所以选用B淋巴细胞和骨髓瘤细胞，是由于它们融合后的杂交瘤细胞具有______________________________的特性。
(3)由图中可看出，单克隆抗体制备过程运用了______________和________________的动物细胞工程技术手段，前者常用的与植物原生质体融合不同的诱导剂是____________。
(4)动物细胞培育液的配方通常含有葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素等，与植物细胞培育基有所不同的是，还含有____________。
(5)在动物细胞融合过程中，需要将所选取的组织细胞离散开，以利于细胞融合，可用____________处理所选组织细胞使之分散开。
(6)图中有两次筛选过程，其中步骤④的目的是筛选出______________，步骤⑤⑥的目的是筛选出________________________。
(7)请依据以下信息，设计一方法(不考虑机械方法)从培育液中筛选出杂交瘤细胞。已知细胞合成DNA有D和S两种途径，其中D途径能被氨基嘌呤阻断。人淋巴细胞有这两种DNA的合成途径，但一般不分裂增殖；鼠骨髓瘤细胞中虽然没有S途径，但能不断分裂增殖。将这两种细胞在试管中混合，加聚乙二醇促融，获得杂种细胞。
方法：___________________________________________________________________
________________________________________________________________________。
原理：___________________________________________________________________
________________________________________________________________________。
解析：单克隆抗体的制备过程中，将已免疫的B淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合，已免疫的B淋巴细胞的获得要求给小鼠注射抗原；形成的杂交瘤细胞既具备B淋巴细胞能产生特异性抗体的特点，也具备了骨髓瘤细胞能无限增殖的特点；单克隆抗体的制备过程利用了动物细胞融合和动物细胞培育技术，和植物体细胞杂交的不同之处是可利用灭活的病毒为诱导剂；使组织分散成单个细胞可用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理；在制备单克隆抗体的过程中毁灭两次筛选，第一次的目的是选出杂交瘤细胞，其次次的目的是从杂交瘤细胞中选出能产生特定抗体的杂交瘤细胞。
答案：(1)获得能产生相应抗体的B淋巴细胞
(2)既能无限增殖，又能产生特定抗体
(3)动物细胞融合 动物细胞培育 灭活病毒
(4)动物血清 (5)胰蛋白酶
(6)杂交瘤细胞 能产生特定抗体的杂交瘤细胞
(7)方法：培育液中加入氨基嘌呤，收集增殖的细胞
原理：加入氨基嘌呤后，使D合成途径阻断，仅有D合成途径的骨髓瘤细胞及其彼此融合的细胞就不能增殖，但人淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合后的杂种细胞可以利用淋巴细胞中的S途径合成DNA而增殖
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