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7—肝胆胰疾病实验诊断教学内容.doc

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7—肝胆胰疾病实验诊断 精品文档 肝胆胰疾病实验诊断 重点: 蛋白代谢功能:TP Alb Pre 蛋白电泳测定及意义 胆红素代谢及黄疸类型的鉴别 ALT AST ALP GGT AMY MAO LIP检测及意义 病毒性肝炎、肝硬化、肝癌、胰腺炎的实验诊断 (一) 常用生物化学的实验检 1. 蛋白质代谢功能检测 (1) 肝脏疾病相关蛋白质代谢相关检测 ①血清总蛋白(total protein,TP)、白蛋白(albumin,ALB)、球蛋白(globulin,GLB)    静脉血2ml,不抗凝,分离血清进行测定。血清总蛋白包括白蛋白及球蛋白。 TP-ALB=GLB , A/G=1.5-2.5:1 应用价值:反映慢性肝损害和肝实质细胞的储备功能 i. 总蛋白、白蛋白降低:合成减少;营养缺乏或不良;丢失过多;慢性消耗性疾病;血液稀释 ii. 总蛋白增高:合成增多;肝硬化(γ-球蛋白);慢性感染;血液浓缩 iii. 球蛋白增高: 慢性肝脏疾病:如肝硬化、慢性肝炎等。 胶原性疾病,如系统性红斑狼疮(SLE) 慢性感染性疾病如血吸虫病、疟疾等。 恶性疾病:多发性骨髓瘤,原发性巨球蛋白血症等。 iv. 球蛋白减低:先天性体液免疫缺陷;免疫抑制剂及抗肿瘤治疗;严重肝、肾病晚期 v. 白蛋白/球蛋白比值(A/G)  正常参考值1.5~2.5 。A/G比值<1提示有慢性肝实质性损害。 动态观察可提示病情的发展和估计预后,病情恶化时A/G比值下降,A/G比值持续倒置表示预后较差。 vi. 评价: Ø 静止、空腹、卧位状态下采血,避免止血带压迫时间过长、溶血 Ø 激烈运动数小时TP可升12% Ø 直立位比卧位TP高3-5g/L,ALB上升5-10% Ø 1g/L Hb致TP上升3% Ø 脂血标本有正干扰 Ø 止血带压迫3分钟,TP可上升10% ②血清蛋白电泳(Serum protein electrophoresis) 血清蛋白电泳特征性条带: Ø 肝癌患者有时在白蛋白和α1球蛋白之间出现一条新区带即甲胎蛋白区带。 Ø 多发性骨髓瘤在β、γ之间或γ区可见M蛋白区带。 Ø 肝硬化患者出现β-γ桥。 ③前白蛋白( Prealbumin ,PAB) Ø PAB是一种肝合成维生素A载体蛋白,可与甲状腺素结合,分子量为60kD,电泳时处在白蛋白前方,半衰期为1.9天。 Ø 参考值:280~360mg/L (透射比浊法) Ø 临床意义:急性时相蛋白;可反映营养状态; 肝脏疾病时均降低,早于其它血清蛋白的改变 ④肝脏功能相关特殊蛋白 a α1-酸性糖蛋白(AAG)、α1-抗胰蛋白酶(AAT)、α2-巨球蛋白(α2-M)、铜蓝蛋白(ceruloplasmin,CP)、纤维结合蛋白(fibronectin,FN) ⑤凝血因子过筛试验 Ø PT(prothrombin time):II V VII X Ø APTT(activated partial thromboplastin time):IX X XI XII Ø TT(thrombin time):Fbg FDP Ø AT-III(anti-thrombin III):严重肝病 (2) 肝性脑病的生化指标—血氨 Ammonia反映肝脏鸟苷酸循环的解毒能力。肝硬化及暴发性肝衰竭时,80%以上肝组织损害,即可致肝性脑病。 升高:严重肝损害、上消化道出血、尿毒症、肝外门脉系统分流、高蛋白饮食、运动。 实验条件直接影响结果的可靠性: © 无氨一次性真空采血管 © 立即置冰水中 © 尽快送检,15分钟分离出血浆 © 溶血、高GGT、高血小板、压迫肌肉或运动使之升高 2. 胆红素和胆汁酸代谢检测 (1) 胆红素 Serum total bilirubin(STB);Connect bilirubin(CB);Unconnect bilirubin(UCB);Urine bilirubin;Total bile acids (TBA) ①来源 Ø 衰老红细胞破坏、降解的血红蛋白 Ø 无效造血的血红蛋白或血红素 Ø 肌红蛋白、细胞色素和过氧化物酶 ②胆红素的生成 Ø 部位:肝、脾、骨髓等网状内皮系统 Ø 加单氧酶、NADPH、NADPH—细胞色素P450还原酶、胆绿素还原酶 ③胆红素检测的意义 判断黄疸的有无,判断黄疸的严重程度,帮助查找黄疸的原因 ④d胆红素 Ø 与白蛋白共价结合,不被肾小球滤过,半寿期15-19d Ø 少数高结合胆红素血症,尿中CB阴性 Ø 肝炎恢复期尿胆红素已消失,但血清CB仍高 ⑤胆红素测定评价 Ø 易产生光降解现象,日光照射1小时,STB可降30% Ø 溶血有负干扰 Ø 脂浊有正干扰 Ø 室温避光保存可稳定3天 (2) 胆汁酸(Total bile acids,TBA)代谢功能检测 肝细胞将胆固醇合成胆汁酸,经肠肝循环,可反映肝细胞摄取、合成、分泌及胆道排泄功能。是一项敏感的肝功能试验。 胆汁酸测定的意义: Ø 灵敏反映肝实质细胞功能:摄取合成、分泌、排泄 Ø 胆道梗阻性疾病 Ø 中毒性肝炎与回肠病变 Ø 高脂蛋白血症:内源性胆固醇的主要代谢去路、胆固醇的分泌、排泄通路、影响脂类吸收 、调控肝内胆固醇的合成 3. 血清酶及同工酶检测 (1) 肝细胞损害酶类 ①丙氨酸氨基转移酶(Alanine aminotransferase;ALT) Ø 主要分布于肝、骨骼肌、肾、心肌,T1/2=47h。 Ø 急性者ALT升高可达20~100倍,ALT升高更明显。病毒感染后1~2周达高峰,3~5周逐渐下降 Ø 参考值:速率法 8~40 U/L (37℃) Ø ALT的MDL:ALT的参考范围为0~40IU/L;其MDL有3个: © 300IU/L:ALT>300IU/L以上表示极度的肝细胞损伤 © 60IU/L:当ALT在40~60IU/L之间时,并不能确定是否属于病理性改变,许多不很健康的肥胖者,其值通常浮动在此范围内,只有当ALT>60IU/L时,才可明确诊断为肝细胞损伤 © 20IU/L:低于此值则可排除许多与ALT升高有关的疾病 ②天门冬氨酸氨基转移酶(AST) Ø 主要分布于心肌、肝、骨骼肌、肾。分为ASTs和ASTm, T1/2=17h 。 Ø 慢性肝炎轻度上升,AST升高为主;肝硬化时转氨酶可偏高、正常或降低 Ø 参考值:速率法 5~40 U/L (37℃) ③谷氨酸脱氢酶(glutamine dehydrogenase,GLDH) 主要分布于肝小叶中央区肝细胞线粒体中。反映肝实质细胞大量坏死、缺氧性肝病或中毒性损害。 灵敏度47%,不适合作肝病筛选试验 ④胆碱酯酶(cholinesterase,ChE) 肝中假胆碱酯酶,反映肝脏合成能力,用于肝脏损伤和有机磷中毒诊断 临床意义: © 重症肝炎,慢性活动性肝炎、肝硬化失代偿ChE降低 © 有机磷杀虫剂中毒, ChE明显抑制 © 孕妇和口服避孕药妇女,血清ChE活性稍低 (2) 胆汁淤滞酶类 ①碱性磷酸酶(alkaline phosphatase;ALP) Ø ALP主要来源于肝、骨、肾、小肠等,位于肝细胞的血窦侧和毛细胆管侧的微绒毛上。同工酶ALP1~6,正常人以ALP2为主,胆道梗阻时ALP1为主,肝硬化以ALP5为主。 Ø 参考值:成人40~110U/L,儿童<350U/L Ø ALP测定结果的影响因素: © 脂血、溶血呈负干扰,干扰程度与溶血程度和ALP活性高低有关。 © 不同试剂配方(反应原理差异)结果差异很大 © 不能用EDTA、枸橼酸钠、草酸盐抗凝血浆 Ø ALP临床意义: © 60%升高由肝胆疾病引起,反映胆汁淤滞的敏感指标 © 生理性增高:妊娠3个月时胎盘产生ALP,9个月时达高峰,分娩后1个月左右恢复正常。正在生长发育中的儿童,ALP活性升高。 ②γ-谷氨酰转移酶 (γ–glutamyltransferase,γ–GT) 广泛分布于肾、肝、胰细胞膜和微粒体。肝细胞毛细胆管侧和整个胆管系统,在肝活性第3(肾、胰)。 临床意义: © 升高原因:合成增多(肝细胞癌、胆管癌等);分泌增强;排泄受阻;肝实质细胞损伤,释放增多。肝癌时γ-GT↑ ,阳性率 95% © 阻塞性黄疸时,γ-GT↑与黄疸相关。 © 酒精性肝损害,γ-GT较ALT、AST敏感,可作监测指标。 © 酒精性肝硬化>胆汁性肝硬化>肝炎后肝硬化 (3) 肝纤维化为主的酶肝细胞癌相关酶类 ①血清单胺氧化酶(Serum monoamine oxidase;MAO)  MAO的活性升高与组织的胶原纤维增生有关,当机体有纤维化的疾病时常常有MAO升高。 临床意义: © 肝硬化时80%以上患者MAO升高 © 肝癌时MAO升高,可能与伴有肝硬化有关。 © 进行性全身性硬皮症,慢性心力衰竭,糖尿病时MAO也可升高。 ②脯氨酰羟化酶(prolyl hydroxylase,PH) PH是胶原纤维合成酶。用于肝纤维化的诊断、肝脏疾病的疗效观察和预后判断 (4) 原发性肝癌相关酶测定 ①岩藻糖苷酶(Fucosidase, AFU) Ø 溶酶体酸性水解酶,参与含岩藻糖苷的各种糖脂、糖蛋白、粘多糖等的分解代谢。AFU存在于肝、脑、肺、肾、胰、白细胞等细胞溶酶体中。 Ø 临床意义:岩藻糖苷蓄积病的诊断、肝癌的鉴别诊断 (5) 胰腺疾病酶类 ①淀粉酶(amylase,AMY) Ø 多糖水解的重要酶,包括胰、唾液淀粉酶,易从肾排出 Ø AP发病后6-12h内升高,20-48h达峰值,3-5d恢复。尿液AMY于12-24h升高,下降慢于血清 Ø 其他一些疾病亦可升高,但幅度小 Ø 水平高低与预后关系不大,阴性结果不能排除AP ②脂肪酶(lipase,LPS) Ø 胰腺外分泌酶 Ø AP发病后24h内升高,持续7-10d Ø 特异性高于AMY Ø 与AMY同时检测可提高AP诊断的灵敏性 4. 肝脏纤维化相关标志物检查测 MAO、PH ;PIIIP、IV型胶原;LN、FN;HA 肝纤四项检查:MAO、PIIIP、CIV、HA (1) 层粘连蛋白(Laminin ,LN) 胞外基质中的一种重要的非胶原性糖蛋白,与肝纤维化呈动态正相关,与HA联合检测,是早期诊断肝纤维化或肝硬化较理想的非损伤性指标。放免分析或ELISA。 (2) 纤维结合蛋白(Fibronectin,Fn) α2糖蛋白,是结缔组织的主要成分。诱导细胞分化,连接细胞和间质参与凝血、止血和机体防御。急、慢性肝炎,慢活肝和早期肝硬化明显增高,暴发性肝衰和失代偿性肝硬化明显下降。电泳或免疫比浊。 (3) 透明质酸(hyaluronic acid,HA) 肝细胞外基质的主要成分。肝硬化晚期显著升高,早期不一定;与PIIIP互补印证 5. 肝脏摄取、排泄功能检测 靛氰绿(ICG)滞留率试验、磺溴酞钠试验、利多卡因试验 6. 脂质代谢功能检测 Ø 血清脂类含CHO、ChoE、磷脂、TG、FFA Ø LCAT(卵磷脂胆固醇脂肪酰基转移酶)的作用 Ø 肝病时的胆固醇合成与酯化障碍 Ø LP-X与胆汁淤积性黄疸 (二) 常用免疫学实验检测 肝炎血清学标志物 AFP、CA-199 自身抗体检测:自身免疫性肝炎、原发性胆汁性肝硬化、原发性硬化性胆管炎等,如ANCA (三) 常见肝、胆、胰疾病的实验诊断 1. 病毒性肝炎 Ø 肝细胞损伤酶 Ø 胆红素代谢障碍? Ø 蛋白代谢状况? Ø 血清学标志 2. 肝硬化 Ø 血常规:WBC、PLT减少? Ø 尿液:尿胆红素、尿胆原变化 Ø 粪便:脂肪滴、淀粉颗粒、潜血试验 Ø 蛋白定量与电泳分析 Ø 胆红素测定、胆汁酸检测 Ø 血清酶:MAO、PH、r-GT、ALP Ø 凝血酶原时间(PT) Ø 其他肝纤指标:PIIIP、CIV、HA、FN、LN等 Ø 免疫学检查:IgG、IgA增高,g-球蛋白增高;非特异性自身抗体阳性;肝炎病毒血清标志物辅助;AFP Ø 肝穿刺活检:弥漫性纤维化、假小叶和再生结节形成 Ø 腹水检查:漏出液,TP<25g/L,Glu>3.3mmol/L 3. 原发性肝癌(PHC) Ø AFP及其异质体 Ø g-GT及g-GT2同工酶 Ø ALP及ALP1同工酶 Ø AFU Ø 5’-核苷酸磷酸二酯同工酶(5’-NPD-V) Ø ALT、AST、GLDH、胆红素 4. 肝性脑病 Ø 血氨测定 Ø 肝功能损害指标:ALT、AST、胆红素、PA、PT、α1-AG 5. 肝癌的生物化学检查 AFP、AFU、g-GT(g-GT2)、ALP(ALP1)、LDH(LDH5)、5’-NPD 肝癌实验室检查的最佳组合:AFP+AFU Ø 甲胎蛋白(α-fetoprotein, AFP) © 一种70KD糖蛋白 © 胎儿期由胃肠道、肝、卵黄囊合成, 4g/L © 保护胎儿(雌激素、免疫排斥),ALB替代品 © 成人升高与HCC、睾丸、卵巢、外生殖腺的胚胎细胞肿瘤进展有关 Ø AFP应用评价 © PHC阳性率67.8~74.4%, 18%不升高 © 胆管细胞癌AFP正常 © 肿瘤大小、生长速度、分期、恶性程度与AFP浓度不相关 © 对危险人群(肝硬化、HBsAg阳性)监测、原发性HCC的早期检测有价值 Ø AFP异质体 © 糖链结构不同,与ConA或LCA(小扁豆凝集素)结合能力不同 © 良恶性鉴别:PHC者LCA结合型AFP≥25% 6. 急性胰腺炎的检查 Ø 淀粉酶(AMY):有时相性,腮腺炎亦升高,非胰腺性急腹症时可升高,血中高尿中不高亦考虑巨酶 Ø 脂肪酶(LPS):特异性高,可与AMY互补 Ø 感染血象、CRP升高 Ø 部分患者Glu、TG、TBIL、ALT、ALP等升高,Ca下降 7. 胰腺癌的检查 Ø 肿瘤标志物:CA19-9 CEA Ø 不明原因的梗阻性黄疸 Ø 突发性糖尿病、无家族史、无诱因 Ø 突发性无法解释的脂肪便 收集于网络,如有侵权请联系管理员删除
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