1、精品文档研究抗癌药物 癌症是当今世界上大多数国家的主要死因之一。尽管到目前为止已有数十种化疗或辅助抗癌药物可以用于临床治疗,但大多数药物只能使病情缓解,无法达到治愈的目的。虽然一些儿童的癌症或成人皮肤肿瘤有治愈或长期缓解的可能,但大多数死亡率很高而又很常见的癌症如胃癌、食道癌、肺癌等仍缺乏有效的抗癌药物。近年来,各国都在抗癌药物的研究与发展上投入了大量的人力、物力,希望在不久的将来能有所突破。本章就抗癌药物的研究与发展的分子生物学基础、药物的筛选与评价以及非临床研究和临床试验的特点作一综述,以帮助读者对这一领域的进展有所了解。 第一节抗癌药物研究的分子生物学基础 抗癌药物研究的依据是人们对癌症
2、生物学的理解。早期人们对于癌症的了解限于细胞水平,所以大多数药物的发展着眼于细胞分裂分化和免疫等环节。近年来,肿瘤生物学的进展非常迅速,人们对癌症的了解深入到了分子水平,比如癌基因的发现,细胞凋亡学说的形成,肿瘤抑制基因的发现等为抗癌药物的研究与发展提供了新的分子生物学基础。以下简述这些方面的研究进展。 一、细胞分裂 自50年代,人们认为肿瘤细胞比正常细胞分裂快,并应用这一概念发展了一系列的抗癌药物用于干扰或阻止细胞的分裂。主要包括破坏细胞脱氧核糖核酸(DNA)以及蛋白质代谢的药物。比如烷化剂(Alkylating Agents), DNA拓扑异构酶抑制剂(Topoisomerase Inhi
3、bitors)以及抗生素类(Antibiotics)。通过对细胞周期的仔细研究,现在我们知道肿瘤细胞并不比正常细胞分裂得快,只是在任何时间都有较高比例的肿瘤细胞处于分裂期。 二、细胞增殖周期调控 中国医药资讯网 因为肿瘤细胞失去了正常细胞的控制机制,在癌组织中的细胞更倾向处于细胞分裂期。根据这一理论,许多抗癌药物作用于处于分裂期的细胞。如抑制DNA合成的抗代谢药物(Antimetabolites)和抑制微小管有丝分裂形成的微小管蛋白结合剂(TubulinBinding Atents)就是根据此概念发展而来的。 三、肿瘤抗原 研究表明某些癌症组织在免疫学上不同于正常细胞,癌症细胞在一定程度上是“
4、异物”,或者是去分化的细胞,且可能存在特异的肿瘤抗原,这一发现是肿瘤免疫治疗的基础。根据这一概念,人们试图用各种特异及非特异的方法,提高人体对肿瘤的免疫功能。比如用细胞毒性免疫细胞、单克隆抗体、细胞因子(Cytokins)以及核受体结合剂(VitaminD3 、Retinoids)等治疗癌症。 四、癌基因及其活化 80年代以来的研究发现,在某些肿瘤细胞中,一些癌基因被激活。若能抑制癌基因的激活,应可治疗癌症。例如研究发现ras癌基因蛋白的激活需要farnesyl蛋白转移酶的存在,因此farnesyl蛋白转移酶抑制剂被发展成为抗癌药物。另外,许多人类肿瘤,如膀胱癌、乳腺癌以及慢性白血病,含有不正
5、常的酪氨酸激酶(Tyrosine Kinase),因此EGF-受体激酶、erbB2激酶以及abl激酶等一系列酪氨酸激酶抑制剂被用于发展抗癌药物。除此以外,调节哺乳类细胞信息传递以及细胞周期转换的丝氨酸苏氨酸激酶也用作发展抗癌药物的靶分子。 五、肿瘤抑制基因 现在已充分证明,在人体中不仅存在癌基因,而且还存在肿瘤抑制基因,如 P53等。在某些人类癌症细胞中,肿瘤抑制基因缺失或失去功能,这提供了另一潜在的药物发展靶分子。大约有3050的癌症失去了成视网膜细胞瘤(Retinoblastoma,Rb)基因及p53蛋白基因。另外AT,MCC,APC,Von HipelLindan蛋白基因的突变也在某些组
6、织中找到。对于这些突变,可能的潜在治疗方法是用基因工程的方法恢复这些基因的功能。 六、细胞分化成熟 对于哺乳类细胞来说,每次细胞分裂都会失去染色体末端的端粒 DNA( Telomeric DNA)。对于正常细胞来说,细胞内贮存的端粒DNA足以补充这一丢失。但肿瘤细胞处于持续分裂期需要更多的端粒DNA,因此需要端粒酶(Telomerase)来补充失去的端粒DNA,否则肿瘤细胞不能无限制地分裂。这给抗癌药物发展提供了一条新的途径一使用端粒酶抑制剂。 七、新血管生成 肿瘤需要新血管的生长才能维持肿瘤的生长。肿瘤细胞能诱导血管生成及促进血流供应。假如没有新的血供,实体瘤不可能无限生长,直径不会超过12
7、毫米。因此,若能抑制新血管在肿瘤内的生长就能抑制肿瘤的生长。根据这一理论,80年代以来的许多研究致力于发展血管生长调节物。现已发现几种潜在的靶分子可用于此目的,包括内皮细胞生长因子(VEGF),纤维细胞生长因子(FGF)。这些调节因子的抗体以及多肽分子抑制剂均可发展成抗癌药。目前已有部分在动物模型中显示抗癌治性并进入临床试验阶段,比如 TNP470, Suramin等。 八、DNA修复人民广场地铁站有一家名为“漂亮女生”的饰品店,小店新开,10平方米不到的店堂里挤满了穿着时尚的女孩子。不几日,在北京东路、淮海东路也发现了“漂亮女生”的踪影,生意也十分火爆。现在上海卖饰品的小店不计其数,大家都在
8、叫生意难做,而“漂亮女生”却用自己独特的经营方式和魅力吸引了大批的女生。 正常细胞存在一套完整的DNA修复机制,而肿瘤细胞一些基因的突变使其失去此功能。这给抗癌药物的发展提供了一个新方向:一是可以用基因工程的方法修复这些缺陷;二是可以促进肿瘤细胞的这类突变,使肿瘤细胞对化疗更敏感。 九、细胞凋亡 自70年代以来,研究发现许多细胞组织具有周期性的自我生长调节机制。一些细胞在组织发育的一定阶段将自然死亡。通常把这种现象称为细胞程序化死亡或细胞调亡。这一过程涉及到细胞内外的一系列信息传递过程。进入这一过程的细胞发生一系列的特征性形态学和生化的变化,以至最终死亡。许多人类疾病据说与细胞凋亡的增加或减少
9、有关。肿瘤细胞可能失去细胞凋亡的功能,恢复这一功能可用于肿瘤治疗。现认为大多数临床使用的抗癌药物可引起特定癌症细胞的细胞调亡。另外,与正常细胞相比,肿瘤细胞对细胞凋亡的诱导更为敏感。这或许可以解释作用于细胞分裂的抗癌药物为何更易杀死肿瘤细胞。现发现某些癌基因的激活及肿瘤抑制基因的丢失可抑制细胞凋亡,因此,如能抑制癌基因或修复肿瘤抑制基因功能或许可以解决某些癌症对现有化疗药物不敏感的问题。研究细胞凋亡是近年来分子生物学领域的一个热点,许多与细胞凋亡有关的信息传递、蛋白酶活性的研究可望为肿瘤治疗提供更新的手段(表161)。4、宏观营销环境分析 表161与细胞凋亡有突的基因举例 “碧芝自制饰品店”拥
10、有丰富的不可替代的异国风采和吸引人的魅力,理由是如此的简单:世界是每一个国家和民族都有自己的饰品文化,将其汇集进行再组合可以无穷繁衍。中国医药资讯网 当然,在竞争日益激烈的现代社会中,创业是件相当困难的事。我们认为,在实行我们的创业计划之前,我们首先要了解竞争对手,吸取别人的经验教训,制订相应竞争的策略。我相信只要我们的小店有自己独到的风格,价格优惠,服务热情周到,就一定能取得大多女孩的信任和喜爱。诱发细胞凋亡p53现在是个飞速发展的时代,与时俱进的大学生当然也不会闲着,在装扮上也不俱一格,那么对作为必备道具的饰品多样性的要求也就可想而知了。Bax(二)创业弱势分析Bad图1-5 购物是对消费
11、环境的要求分布ElaE2FMycFos我们从小学、中学到大学,学的知识总是限制在一定范围内,缺乏在商业统计、会计,理财税收等方面的知识;也无法把自己的创意准确而清晰地表达出来,缺少个性化的信息传递。对目标市场和竞争对手情况缺乏了解,分析时采用的数据经不起推敲,没有说服力等。这些都反映出我们大学生创业知识的缺乏;抑制细胞凋亡在大学生对DIY手工艺品价位调查中,发现有46% 的女生认为在十元以下的价位是可以接受;48% 的认为在10-15元;6% 的则认为50-100元能接受。如图1-2所示Bcl2BclxlE6E1bRas在大学生对DIY手工艺品价位调查中,发现有46% 的女生认为在十元以下的价
12、位是可以接受;48% 的认为在10-15元;6% 的则认为50-100元能接受。如图1-2所示AblSrc 十、肿瘤的抗药性 在肿瘤治疗中,另一严峻挑战是抗药性。许多肿瘤细胞对一系列相关或不相关的药物均具有抗药性。这一领域也是抗癌药物研究的重点。肿瘤抗药性可能与减少对药物的吸收与摄取、加快药物的降解代谢、加快药物从细胞内的排出以及特殊蛋白的表达有关。已发现多种与抗药性有关的基因,抑制这些基因的表达可望达到提高或恢复肿瘤组织对药物的敏感性。 十一、细胞信息传递 各种细胞生长因子、细胞因子、蛋白激酶等均存在于正常及肿瘤细胞,但是其活性程度及表达水平有差异。一般说来,由于与细胞增殖有关,这些因子在肿
13、瘤细胞中的活性较高,或对肿瘤细胞的增殖比起正常组织(不分裂)更为必需。因此,调节或抑制细胞信息传递系统可能成为新的抗癌药物的发展依据。例如,近年来许多调节蛋白激酶C和蛋白激酶A的药物正在进行临床试验。许多天然药物也作用于细胞信息传递系统。 十二、联合疗法 上述靶分子都可能作为单一药物的发展基础。但是,现在的趋势是发展联合疗法,不仅是多种化疗药物联合使用,还包括与生物制剂、放射等疗法的联合使用。这些联合疗法的机制大致包括:各种疗法作用于不同的细胞周期;提高肿瘤细胞的敏感性;使肿瘤细胞停留在对化疗敏感的细胞周期;降低药物在人体内及细胞内的降解速度;提高药物对肿瘤组织的针对性分布及摄取率;提高正常组
14、织对药物副作用的抵抗力。 第二节化疗药物的筛选与评价 化疗药物的筛选可采用各种不同的方法,但总的来说可归纳为两大类,一类是按已往经验来寻找新药,另一类则是按肿瘤生物学和分子生物学特征来推断及设计新药。筛选的方法难易程度不等,但关键是这些系统必须能在较短的时间内筛选大量的化合物。化疗药物筛选的主要目的是找出具有发展前途的先导化合物,然后对这些化合物作进一步的改进使其适用于临床治疗。 下面将着重讨论美国国立癌症研究所(NCI)现采用的化疗药物筛选方法,并对其它方法亦作一简要的介绍。 一、NCI所用的体外化疗药物筛选法(图16-1) 简单地说,NCI的体外化疗药物筛选系统由60种不同的人体肿瘤细胞株
15、组成,测定每个受试化合物在一定浓度范围抑止各肿瘤细胞的生长的能力或细胞毒性程度。以常规采用的筛选试验为例,在实验开始前一天,所有60种肿瘤细胞株细胞先接种在96孔细胞培养板上,然后将受试化合物10倍梯度稀释,一般最高浓度采用104mol。每种化合物试验5种不同浓度。样品加入细胞悬液后培育48小时。此后用细胞染色法测定细胞的生长曲线,用sulforhodamine染色,再测定吸光度用以估计细胞数目。根据比色结果画出60条剂量一反应曲线,然后计算出50生长抑止浓度(GI50),100生长抑止浓度(TGI)以及50细胞死亡浓度(LC50)。再将各细胞系的GI50、TGI和LC50汇总画出均数图,从此
16、图可以大致看出该化合物对不同的肿瘤细胞株的抑止能力。然后用计算机进行计算、模拟、比较,评价受试化合物的特征是否与某一类已知化疗药物类似,从而推测可能存在的抗癌机制。据统计,NCI到目前为止已筛选了近460000种化合物。用NCI体外化疗药物筛选系统得出的数据也可用于指导将来对主要化合物的改造,使化合物的药理及毒理性质更为理想。表162列出了NCI所用的60种人肿瘤细胞株。 二、以分子生物学为基础的化疗药物筛选方法 近年来,对肿瘤的分子生物学研究取得了很大的进展,这给化疗药物的发展提供了一些新的目标。现在已有许多采用X射线衍射、蛋白结晶、基因配对等方法来推断及设计抗癌药物。这些方法往往开拓了一些
17、全新的途径,但其缺点是这些化合物不一定对肿瘤细胞有选择性。另外,这些化合物是否能进入肿瘤细胞也是一大问题。因此,任何采用非细胞系统筛选的化合物都必须经过细胞系统以及合适的动物模型的检定才能进入临床试验。表163对上述两种方法的优缺点作了一个比较。 三、经典的化疗药物筛选模型 中国医药资讯网 1985年NCI建立体外细胞筛选系统。在此之前,NCI抗癌药物的筛选方法主要采用体内肿瘤模型来进行。将白血病细胞株L1210及P388植入免疫缺陷鼠体内,待肿瘤长成后再给予不同剂量的筛选化合物,然后观察所试化合物是否能抑制肿瘤细胞的生长,甚至使肿瘤细胞死亡、消失。然后再作计算分析,得出最小抑制剂量、中位抑制
18、剂量、LC50等指标;以这些指标作为衡量受试化合物的抗癌作用强度。这一方法的优点是得到的药物可穿过细胞膜以及某些生理屏障,缺点是所得到的药物仅对快速分裂的肿瘤(如白血病、淋巴瘤)疗效较好,而对实体瘤的治疗远不尽人意。针对这一问题, NCI在1985年对抗癌药物的筛选过程作了如下重大改变:利用以肿瘤种类为指导的体外细胞筛选法取代体内筛选法;利用实体瘤细胞株取代白血病细胞株;用相对小量的原始材料用于初筛;重新强调利用生物实验指导天然物中具抗癌活性成分的筛选。 体内实验的免疫缺陷鼠肿瘤模型现已不常用于药物的初筛,而常规用于对初筛所得的先导药物作进一步测试以观察评估化合物对不同的实体瘤的治疗作用。 精品文档