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血红蛋白含量测定

精品资料
血红蛋白含量测定

² 血红蛋白生理概要
　　　　血红蛋白是红细胞的主要成分，在正常情况下，每个红细胞均含有一定量的血红蛋白。血红蛋白是由珠蛋白和亚铁血红素组成的结合蛋白质。血红蛋白除能与氧结合形成氧合血红蛋白外，尚能与某些物质作用形成多种血红蛋白衍生物。它们具有特定的色泽和吸光谱，在临床上，可用以诊断某些变性血红蛋白血症和血红蛋白的定量测定。
² 血球分析仪器法
l 仪器型号：Sysmex KX-21型多项目自动血球计数仪器
Sysmex XE-2100型多项目自动血球分析装置
l 检测原理：
一、Sysmex KX-21
在自动检测法中的血红蛋白测量以氰化正铁血红蛋白法或氧合血红蛋白法为主流。但这种方法血红蛋白转化速度慢，其处理液应进行妥善处理，以及环境方面的考虑，并不是一种令人满意的测量法。无氰HGB测量法与氧合血红蛋白法相同，其血液中的血红蛋白转化成氧合血红蛋白，且不含剧毒物。另外，由于可以测量正铁血红蛋白，如质控血那样的含有正铁血红蛋白的血液也可正确进行测量。
二、Sysmex XE-2100
集中于氰化高铁血红蛋白测定法和氧化血红蛋白测定法的优点，不使用毒性物质，使该方法成为自动检测的一个合适的方法。同时，由于该方法可以用测量氰化高铁血红蛋白，所以该方法也可以准确的测量含有高铁血红蛋白的血液。
l 试剂：
一、Sysmex KX-21
⑴稀释液
⑵WBC/HGB用溶血剂
⑶2％EDTA二钾溶液
二、Sysmex XE-2100
⑴CELLPACK（EPK）
⑵SULFOLYSER（SLS）
l 标本吸入量：
一、Sysmex KX-21: 全血模式50
二、Sysmex XE-2100：⑴手工模式130
⑵自动进样器模式200
l 静脉血采血方法：
抽取病人静脉血2ml，于EDTA三钾抗凝的真空采血管中（1.5mgEDTA-K3／ML）24小时室温保存。
l 操作步骤：
一、Sysmex KX-21
⑴仪器在全血模式（WB）下
⑵要在允许空白值内：
WBC
RBC
HGB
PLT
0.3109/L
0.021012/L
1g/L
10109/L
⑶检测质控数值合格。
⑷标本的测量：将待测标本充分混均，然后将吸液管放进待测标本试管中并按下开始键。蜂鸣器“笛笛”响两声之后，当LCD画面上显示“正在测量”状态时可将试管取下。
⑸结果显示：标本被吸入后仪器将进行自动测量，约1分钟左右测量结束，被测标本的结果自动显示出来。同时LCD画面自动切换至“准备测量”状态，此时可进行下一份标本的测量。
二、Sysmex XE-2100
⑴当机器经过电源接通和一系列自检无误后，在机器左上放状态栏显示“READY”及确认“READY LED”（准备状态灯）呈绿色时，机器进入准备测量状态。
⑵要在允许空白值内：
WBC
RBC
HGB
PLT
0.3109/L
0.021012/L
1g/L
10109/L
⑶检测质控数值合格。
⑷标本的测量：
手工模式：在准备测量状态下，按下屏幕最上一行MANUAL键，利用数字键输入标本的编号，按ENTER键确认。将待测标本充分混均，然后将吸液管放进待测标本试管中并按下开始键。吸液管吸液完毕后听到三声报警声，将试管移开。
进样器自动模式：在准备测量状态下，按下屏幕最上一行MANUAL键，利用数字键输入标本的编号，按ENTER键确认。将试管加放在自动进样器工作台上。机器开始自动混均、吸引和分析标本。
⑸结果显示：标本被吸入后仪器将进行自动测量，被测标本的结果自动显示出来。同时屏幕切换至“准备测量”状态，此时可进行下一份标本的测量。
² 氰化高铁血红蛋白测定法
l 检测原理：
血红蛋白被高铁氰化钾氧化为高铁血红蛋白，再与氰结合成稳定的棕红色氰化高铁血红蛋白，在规定的波长和液层厚度的条件下，具有一定的吸光系数，根据吸光度，即可求得细胞蛋白浓度。
l 试剂：
氰化高铁血红蛋白转化液：氰化钾0.05g、高铁氰化钾0.2g、无水磷酸二氢钾0.14g、TritonX-100（或其他非离子型表面活性剂）1.0ml、蒸馏水加至1000ml。
l 末梢血采集方法：
⑴采血部位必须无冻疮、炎症、水肿、充血及循环障碍。成人以无名指为宜，半岁以上儿童手指为好，半岁以下婴幼儿通常自拇指或足跟两侧采血。
⑵轻轻按摩采血部位，使其自然充血，用75％乙醇棉球消毒局部皮肤待干。
⑶紧控刺血部位，用采血针穿刺取血，动作应迅速，深度约2-3mm，稍加挤压，以血液能流出为宜。
⑷用干棉球擦去第一滴血，毛细吸管吸血120于抗凝管中混均，6小时内测定完毕。
⑸采血完毕，用干棉球压住伤口，血止为止。
l 标本吸入量：末梢血模式20
l 抗凝管的制备：
取上述EDTA二钾溶液10微升，加入小试管内于70℃以下干燥备用。
l 操作步骤：
取转化液5ml，加末梢血20，混均后静置5min。已校正过波长和灵敏度的分光光度计，波长540±1nm，光径1.000cm，谱带宽度＜1nm，20-25℃杯温等条件，转化液为空白，测定其吸光度。
l 计算：
血红蛋白g/L＝
² 正常参考范围
男：120～160g/L
女：110～150g/L
新生儿：170～200g/L
² 临床意义
血红蛋白增减的临床意义，基本与红细胞增减意义相同。但血红蛋白能更好地反应贫血程度。而某些贫血，由于单个红细胞血红蛋白的含量不同，血红蛋白减少与红细胞减少程度不成平衡关系。

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